活血祛痰法逆转高血压左心室肥厚的实验研究*
作者：严 灿 邓中炎 潘 毅 吴丽丽
单位：严 灿 邓中炎 潘 毅 吴丽丽(广州中医药大学基础医学院中医基础理论教研室 广州 510407)
关键词：活血祛痰；原发性高血压；左心室肥厚
中国中医基础医学杂志990407 摘 要 目的 探讨活血祛痰治法逆转高血压左心室肥厚(Left Ventricular Hypertrophy,LVH) 的作用机理。方法 采用14周龄自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat, SHR)。观察采用活血祛痰治法及组方治疗前后大鼠血压(Blood Pressure, BP)、左室重/体重(Left Ventricular Mass/Body Weight, LVM/BW)、左室壁相对厚度(Left Ventricular Wall Thickness, LVWT)、心肌Ca2+含量，以及心肌过氧化脂质(Lipid peroxidation, LPO)和超氧化物歧化酶活性(Superoxide dismutase, SOD)等的变化。结果 14周龄SHR已形成LVH，心肌Ca2+含量增高，心肌LPO含量升高而SOD活性下降。经活血祛痰治法及其组方治疗后，SHR血压下降，LVH明显消退，心肌Ca2+含量下降，心肌LPO含量下降而SOD活性升高。结论 活血祛痰治法及其组方可逆转高血压LVH，其作用机理与其降低血压和心肌Ca2+含量，改善心肌顺应性以及抗氧自由基损伤有关。
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Experimental Research on the Mechanism of Regulating
Blood Circulation and Eliminating Phlegm to Reverse the Essential
Hypertension-Left Ventricular Hypertrophy
Yan Can Deng Zhong-yan Pan Yi
(Department of Basic Theory of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510407)
Abstract: Objective:Exploring the mechanism of Regulating blood circulation and Eliminating phlegm to reverse the Left Ventricular Hypertrophy (LVH).Method:Spontaneously Hypertensive Rats (SHRs) were adopted. Before and after treatment, such indexes as Blood Pressure (BP)、 Left Ventricular Mass/Body Weight (LVM/BW)、 Left Ventricular Wall Thickness (LVWT)、 myocardial Ca2+ contents、 myocardial contents of Lipid peroxidation (LPO) and activity of Superoxide dismutase (SOD) were measured. Results:14-week-old SHRs develped LVH and had higher contents of myocardial Ca2+ and myocardial LPO and lower SOD activities. After treatment by the method of Regulating blood circulation and Eliminating phlegm, the indexes mentroned above were all improved. Conclusions:The method of Regulating blood circulation and Eliminating phlegm can reverse LVH , the mechanism may be related to its effects of decreasing BP and the content of Ca2+, improving the left ventricular diastolic function and ameliorate the damage of oxygen free radical.
, 百拇医药
Key words:@Regulating blood circulation and Eliminating phlegm, Essential Hypertension Left Ventricular Hypertrophy
左心室肥厚(Left Ventricular Hypertrophy LVH)是高血压病的主要并发症之一。现代研究结果普遍认为，LVH是一种增加心血管意外发病率和死亡率的独立危险因素。本课题组采用中医活血祛痰治法逆转LVH，取得了较为显著的疗效[1～3]。本文旨在对其治疗机理作进一步的探讨。
材料与方法
1 实验动物及分组
选用14周龄的自发性高血压大鼠(SHR)共30只和同龄正常Wistar-Kyoto大鼠(WKY)10只，雌雄各半，由上海市高血压病研究所提供。SHR在14周龄时已形成LVH。分组情况为：对照组：随机选用14周龄SHR和同龄WKY各10只(分别为SHR—C14组和WKY—C14组)；自然病程对照组(SHR—N28组)：随机另取14周龄SHR10只，喂至28周取材。以上对照组均喂饲蒸馏水和标准鼠食。中药复方治疗组(SHR—C28组)：采用中药灌胃治疗14周龄SHR10只，疗程为14周，饮食同前，喂至28周取材。各组大鼠采用尾动脉测压法，记录大鼠清醒状态下收缩压，每两周测血压一次。
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2 活血祛痰方药组成及剂量
活血祛痰方药组成：丹参15g,北芪10g,川芎12g，瓜蒌15g，桂枝5g，半夏12g，毛冬青10g，薤白15g，代赭石12g，牛膝15g。将上述中药制成100%水煎液(每ml含生药1g)，2ml/100g体重灌胃，每日2次，连续给药14周。
3 主要检测指标及方法
3.1 心肌肥厚形态学指标 实验大鼠称重，取出心脏，除去大血管残根、心房、右心室和结缔组织，吸干水分，称取左心室重量(LVM)和体重(BW)之比以及左室壁厚度(LVWT)，左室壁相对厚度为室间隔、左室游离壁及心尖厚度的均值[4]。
3.2 心肌钙离子含量测定 取左室心肌约100mg于100℃烘干，浓硝酸消化后稀释10倍，用原子吸收光谱仪(日立—800型)测定钙含量，单位以ug/g.dry.wt表示。
, 百拇医药
3.3 心肌过氧化脂质(LPO)含量和SOD活性的测定 取心肌组织200mg，制成10%的匀浆液。4℃11000r/min离心，吸取上清液，用MPF—4型荧光分光光度计，按硫代巴比妥酸荧光法[5]测定LPO含量；用751型紫外分光光度计，按邻苯三酚自氧化法测定SOD活性[6]。
3.4 统计学处理 所有结果以x±s表示，采用t检验及方差分析。
结果
1 各组大鼠血压(BP)、左室重/体重(LVM/BW)、左室壁相对厚度(LVWT)的变化(见表1)
由表1可知，SHR14周龄时，LVH已形成。经中药复方治疗后，LVH随血压的下降而明显消退(P<0.01)，而自然病程组大鼠LVH则进一步加重。
表1 各组大鼠血压(BP)、左室重/体重(LVM/BW)、左室壁相对厚度(LVWT)的变化(
±s) 组 别
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例数
BP(Kpa)
LVM(g)
LVM/BW(mg/g)
LVWT(mm)
WKY—C14
10
14.86±0.83
0.51±0.04
2.62±0.16
2.58±0.16
SHR—C14
, 百拇医药
10
24.67±0.67*
0.68±0.05*
3.66±0.36*
3.05±0.22*
SHR—N28
10
25.81±0.65
0.95±0.13
3.52±0.23
3.32±0.47
, http://www.100md.com
SHR—C28
10
16.52±0.41+Δ
0.74±0.04+Δ
2.71±0.21+Δ
2.60±0.21+Δ
注：* 与WKY—C14比较：P<0.01；Δ与SHR—C14比较：P<0.01；+与SHR—N28比较：P<0.01；下表同。
2 各组大鼠心肌Ca2+含量的变化(见表2)
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由表2可知，14周龄SHR心肌Ca2+含量明显增多，经过中药复方治疗后，SHR心肌Ca2+含量显著下降(P<0.01)。
表2 各组大鼠心肌Ca2+含量的变化(±s) 组 别
例数
Ca2+(ug/g.dry.wt)
WKY—C14
10
406.56±205.55
SHR—C14
, 百拇医药
10
862.47±238.41*
SHR—N28
10
788.32±187.63
SHR—C28
10
386.56±135.65+Δ
3 各组大鼠心肌过氧化脂质(LPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化(见表3)表3 各组大鼠心肌过氧化脂质(LPO)和
超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化(±s) 组 别
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例数
LPO(nmol/mg)
SOD(U/mg)
WKY—C14
10
0.58±0.04
145.28±17.56
SHR—C14
10
1.03±0.21*
104.35±16.06*
, 百拇医药 SHR—N28
10
1.05±0.22
102.27±15.84
SHR—C28
10
0.61±0.07+Δ
137.62±15.28+Δ
14周龄SHR心肌SOD活性明显低于同龄WKY，而LPO含量则明显升高(P<0.01)。经过中药复方治疗后，心肌SOD活性升高，LPO含量下降(P<0.01)。
讨论 讨论
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高血压LVH作为一种独立的心血管疾病的危险因素，是近年来颇受重视的研究领域之一，但有关其发生发展的机理及逆转尚有待于进一步研究。高血压LVH的形成除了与血流动力学因素有关外，非血流动力学因素，包括交感神经系统和肾素—血管紧张素系统的活性以及激素和生长因子等亦是导致LVH的重要因素。目前一些研究初步证实,Ca2+在LVH中起着重要作用。高血压时心肌细胞内Ca2+增加，致使血管平滑肌舒缩功能障碍，引起外周血管阻力增加。而肥厚心肌力学性能的改变和电生理的紊乱亦与心肌细胞内钙稳态失衡密切相关[7]。因此，降低Ca2+可以改善肥厚心肌的力学性能，减少心肌胶原的合成，改善心肌顺应性。本研究观察到活血祛痰治法能降低血压，并使得LVM/BW这一反映LVH的敏感指标的值明显降低，说明活血祛痰法能使LVH发生逆转。而活血祛痰法能降低肥厚心肌中Ca2+的含量(P<0.01)，则初步提示中药复方具有钙拮抗剂的效应。
氧自由基与多种心血管疾病有关，本研究观察到SHR、LPO含量明显升高，SOD活性明显下降，这初步提示氧自由基代谢紊乱也参与了LVH的发生和发展。机体可因儿茶酚胺水平升高、脂类代谢异常等可引起氧自由基生成增加；而持久的压力负荷过重，不仅可引起心肌肥厚，亦可通过多种途径导致氧自由基的产生。因此，在心肌肥厚的发生前后都可能存在着氧自由基代谢的紊乱。有关研究表明，原癌基因激活和能量缺乏是导致心肌肥厚的重要因素[8]。氧自由基可直接诱导某些原癌基因的异常表达[9]，进而可能使原癌基因激活或能量缺乏而导致心肌肥厚的发生。本研究结果表明，活血祛痰治法能显著降低SHR心肌LPO含量，升高SOD活性，改善氧自由基代谢的紊乱，从而起到逆转LVH的作用。
, 百拇医药
通过本项研究初步表明，活血祛痰治法及其组方能显著逆转高血压LVH，其作用机理与其能降低血压和心肌Ca2+含量以及改善氧自由基代谢紊乱有关。但有关其多方面、多层次的作用机理还有待于进一步深入研究。
* 国家中医药管理局重点课题(批准文号：972076)
作者简介：严灿，男，29岁，基础医学硕士，助理研究员。现任广州中医药大学基础医学院中医基础理论教研室秘书，中医基础公共实验室副主任。主要从事中医病因病机理论在防治心血管疾病中的应用基础研究。通讯地址：广州市机场路10号，广州中医药大学中医基础理论教研室。邮编：510407
参考文献
[1] 严灿，张新春，邓中炎，等.心肌康胶囊对高血压性左室肥厚的临床观察及机理探讨.中国中医药科技 1995;3(5):17～18
, 百拇医药
[2] 严序炳，肖雨，严灿，等，心肌康胶囊对左室肥厚逆转作用的临床研究.中国中西医结合杂志 1996；16(9)：533～536
[3] 严灿，高敏，邓中炎，等.高血压病左心室肥厚患者血浆P物质水平的变化及活血祛痰治法的影响.中国中西医结合杂志 1998；18(6):336～338
[4] Gelser EA, Bove KE. Caculation of left ventricular mass and relative wall thickness. Arch Pathol 1974; 97:13
[5] 八木国夫.过酸化脂质测定.临床检查 1979；78：761
[6] 邹国林，桂兴芬，钟晓波，等.一种SOD的测活方法—邻苯三酚自氧化法的改进.生物化学与生物物理进展 1986 ；(4)：71
, 百拇医药
[7] Kannel WB. Prevalence and natural history of electrocardio-graphic left ventricular hypertrophy. Am J Med 1983; 75:4～11
[8] 卢兴.心力衰竭.第1版，北京：人民卫生出版社，1986：243～246
[9] Kindy MS, Carney JP, Dempsey RJ, et al. Ischemic induction of proto-oncogene expression in the gerbil brain. J Mol Nearosci 1991; 2:217, 百拇医药
单位：严 灿 邓中炎 潘 毅 吴丽丽(广州中医药大学基础医学院中医基础理论教研室 广州 510407)
关键词：活血祛痰；原发性高血压；左心室肥厚
中国中医基础医学杂志990407 摘 要 目的 探讨活血祛痰治法逆转高血压左心室肥厚(Left Ventricular Hypertrophy,LVH) 的作用机理。方法 采用14周龄自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rat, SHR)。观察采用活血祛痰治法及组方治疗前后大鼠血压(Blood Pressure, BP)、左室重/体重(Left Ventricular Mass/Body Weight, LVM/BW)、左室壁相对厚度(Left Ventricular Wall Thickness, LVWT)、心肌Ca2+含量，以及心肌过氧化脂质(Lipid peroxidation, LPO)和超氧化物歧化酶活性(Superoxide dismutase, SOD)等的变化。结果 14周龄SHR已形成LVH，心肌Ca2+含量增高，心肌LPO含量升高而SOD活性下降。经活血祛痰治法及其组方治疗后，SHR血压下降，LVH明显消退，心肌Ca2+含量下降，心肌LPO含量下降而SOD活性升高。结论 活血祛痰治法及其组方可逆转高血压LVH，其作用机理与其降低血压和心肌Ca2+含量，改善心肌顺应性以及抗氧自由基损伤有关。
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Experimental Research on the Mechanism of Regulating
Blood Circulation and Eliminating Phlegm to Reverse the Essential
Hypertension-Left Ventricular Hypertrophy
Yan Can Deng Zhong-yan Pan Yi
(Department of Basic Theory of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510407)
Abstract: Objective:Exploring the mechanism of Regulating blood circulation and Eliminating phlegm to reverse the Left Ventricular Hypertrophy (LVH).Method:Spontaneously Hypertensive Rats (SHRs) were adopted. Before and after treatment, such indexes as Blood Pressure (BP)、 Left Ventricular Mass/Body Weight (LVM/BW)、 Left Ventricular Wall Thickness (LVWT)、 myocardial Ca2+ contents、 myocardial contents of Lipid peroxidation (LPO) and activity of Superoxide dismutase (SOD) were measured. Results:14-week-old SHRs develped LVH and had higher contents of myocardial Ca2+ and myocardial LPO and lower SOD activities. After treatment by the method of Regulating blood circulation and Eliminating phlegm, the indexes mentroned above were all improved. Conclusions:The method of Regulating blood circulation and Eliminating phlegm can reverse LVH , the mechanism may be related to its effects of decreasing BP and the content of Ca2+, improving the left ventricular diastolic function and ameliorate the damage of oxygen free radical.
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Key words:@Regulating blood circulation and Eliminating phlegm, Essential Hypertension Left Ventricular Hypertrophy
左心室肥厚(Left Ventricular Hypertrophy LVH)是高血压病的主要并发症之一。现代研究结果普遍认为，LVH是一种增加心血管意外发病率和死亡率的独立危险因素。本课题组采用中医活血祛痰治法逆转LVH，取得了较为显著的疗效[1～3]。本文旨在对其治疗机理作进一步的探讨。
材料与方法
1 实验动物及分组
选用14周龄的自发性高血压大鼠(SHR)共30只和同龄正常Wistar-Kyoto大鼠(WKY)10只，雌雄各半，由上海市高血压病研究所提供。SHR在14周龄时已形成LVH。分组情况为：对照组：随机选用14周龄SHR和同龄WKY各10只(分别为SHR—C14组和WKY—C14组)；自然病程对照组(SHR—N28组)：随机另取14周龄SHR10只，喂至28周取材。以上对照组均喂饲蒸馏水和标准鼠食。中药复方治疗组(SHR—C28组)：采用中药灌胃治疗14周龄SHR10只，疗程为14周，饮食同前，喂至28周取材。各组大鼠采用尾动脉测压法，记录大鼠清醒状态下收缩压，每两周测血压一次。
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2 活血祛痰方药组成及剂量
活血祛痰方药组成：丹参15g,北芪10g,川芎12g，瓜蒌15g，桂枝5g，半夏12g，毛冬青10g，薤白15g，代赭石12g，牛膝15g。将上述中药制成100%水煎液(每ml含生药1g)，2ml/100g体重灌胃，每日2次，连续给药14周。
3 主要检测指标及方法
3.1 心肌肥厚形态学指标 实验大鼠称重，取出心脏，除去大血管残根、心房、右心室和结缔组织，吸干水分，称取左心室重量(LVM)和体重(BW)之比以及左室壁厚度(LVWT)，左室壁相对厚度为室间隔、左室游离壁及心尖厚度的均值[4]。
3.2 心肌钙离子含量测定 取左室心肌约100mg于100℃烘干，浓硝酸消化后稀释10倍，用原子吸收光谱仪(日立—800型)测定钙含量，单位以ug/g.dry.wt表示。
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3.3 心肌过氧化脂质(LPO)含量和SOD活性的测定 取心肌组织200mg，制成10%的匀浆液。4℃11000r/min离心，吸取上清液，用MPF—4型荧光分光光度计，按硫代巴比妥酸荧光法[5]测定LPO含量；用751型紫外分光光度计，按邻苯三酚自氧化法测定SOD活性[6]。
3.4 统计学处理 所有结果以x±s表示，采用t检验及方差分析。
结果
1 各组大鼠血压(BP)、左室重/体重(LVM/BW)、左室壁相对厚度(LVWT)的变化(见表1)
由表1可知，SHR14周龄时，LVH已形成。经中药复方治疗后，LVH随血压的下降而明显消退(P<0.01)，而自然病程组大鼠LVH则进一步加重。
表1 各组大鼠血压(BP)、左室重/体重(LVM/BW)、左室壁相对厚度(LVWT)的变化(
±s) 组 别, http://www.100md.com
例数
BP(Kpa)
LVM(g)
LVM/BW(mg/g)
LVWT(mm)
WKY—C14
10
14.86±0.83
0.51±0.04
2.62±0.16
2.58±0.16
SHR—C14
, 百拇医药
10
24.67±0.67*
0.68±0.05*
3.66±0.36*
3.05±0.22*
SHR—N28
10
25.81±0.65
0.95±0.13
3.52±0.23
3.32±0.47
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SHR—C28
10
16.52±0.41+Δ
0.74±0.04+Δ
2.71±0.21+Δ
2.60±0.21+Δ
注：* 与WKY—C14比较：P<0.01；Δ与SHR—C14比较：P<0.01；+与SHR—N28比较：P<0.01；下表同。
2 各组大鼠心肌Ca2+含量的变化(见表2)
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由表2可知，14周龄SHR心肌Ca2+含量明显增多，经过中药复方治疗后，SHR心肌Ca2+含量显著下降(P<0.01)。
表2 各组大鼠心肌Ca2+含量的变化(
±s) 组 别例数
Ca2+(ug/g.dry.wt)
WKY—C14
10
406.56±205.55
SHR—C14
, 百拇医药
10
862.47±238.41*
SHR—N28
10
788.32±187.63
SHR—C28
10
386.56±135.65+Δ
3 各组大鼠心肌过氧化脂质(LPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化(见表3)表3 各组大鼠心肌过氧化脂质(LPO)和
超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化(
±s) 组 别, http://www.100md.com
例数
LPO(nmol/mg)
SOD(U/mg)
WKY—C14
10
0.58±0.04
145.28±17.56
SHR—C14
10
1.03±0.21*
104.35±16.06*
, 百拇医药 SHR—N28
10
1.05±0.22
102.27±15.84
SHR—C28
10
0.61±0.07+Δ
137.62±15.28+Δ
14周龄SHR心肌SOD活性明显低于同龄WKY，而LPO含量则明显升高(P<0.01)。经过中药复方治疗后，心肌SOD活性升高，LPO含量下降(P<0.01)。
讨论 讨论
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高血压LVH作为一种独立的心血管疾病的危险因素，是近年来颇受重视的研究领域之一，但有关其发生发展的机理及逆转尚有待于进一步研究。高血压LVH的形成除了与血流动力学因素有关外，非血流动力学因素，包括交感神经系统和肾素—血管紧张素系统的活性以及激素和生长因子等亦是导致LVH的重要因素。目前一些研究初步证实,Ca2+在LVH中起着重要作用。高血压时心肌细胞内Ca2+增加，致使血管平滑肌舒缩功能障碍，引起外周血管阻力增加。而肥厚心肌力学性能的改变和电生理的紊乱亦与心肌细胞内钙稳态失衡密切相关[7]。因此，降低Ca2+可以改善肥厚心肌的力学性能，减少心肌胶原的合成，改善心肌顺应性。本研究观察到活血祛痰治法能降低血压，并使得LVM/BW这一反映LVH的敏感指标的值明显降低，说明活血祛痰法能使LVH发生逆转。而活血祛痰法能降低肥厚心肌中Ca2+的含量(P<0.01)，则初步提示中药复方具有钙拮抗剂的效应。
氧自由基与多种心血管疾病有关，本研究观察到SHR、LPO含量明显升高，SOD活性明显下降，这初步提示氧自由基代谢紊乱也参与了LVH的发生和发展。机体可因儿茶酚胺水平升高、脂类代谢异常等可引起氧自由基生成增加；而持久的压力负荷过重，不仅可引起心肌肥厚，亦可通过多种途径导致氧自由基的产生。因此，在心肌肥厚的发生前后都可能存在着氧自由基代谢的紊乱。有关研究表明，原癌基因激活和能量缺乏是导致心肌肥厚的重要因素[8]。氧自由基可直接诱导某些原癌基因的异常表达[9]，进而可能使原癌基因激活或能量缺乏而导致心肌肥厚的发生。本研究结果表明，活血祛痰治法能显著降低SHR心肌LPO含量，升高SOD活性，改善氧自由基代谢的紊乱，从而起到逆转LVH的作用。
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通过本项研究初步表明，活血祛痰治法及其组方能显著逆转高血压LVH，其作用机理与其能降低血压和心肌Ca2+含量以及改善氧自由基代谢紊乱有关。但有关其多方面、多层次的作用机理还有待于进一步深入研究。
* 国家中医药管理局重点课题(批准文号：972076)
作者简介：严灿，男，29岁，基础医学硕士，助理研究员。现任广州中医药大学基础医学院中医基础理论教研室秘书，中医基础公共实验室副主任。主要从事中医病因病机理论在防治心血管疾病中的应用基础研究。通讯地址：广州市机场路10号，广州中医药大学中医基础理论教研室。邮编：510407
参考文献
[1] 严灿，张新春，邓中炎，等.心肌康胶囊对高血压性左室肥厚的临床观察及机理探讨.中国中医药科技 1995;3(5):17～18
, 百拇医药
[2] 严序炳，肖雨，严灿，等，心肌康胶囊对左室肥厚逆转作用的临床研究.中国中西医结合杂志 1996；16(9)：533～536
[3] 严灿，高敏，邓中炎，等.高血压病左心室肥厚患者血浆P物质水平的变化及活血祛痰治法的影响.中国中西医结合杂志 1998；18(6):336～338
[4] Gelser EA, Bove KE. Caculation of left ventricular mass and relative wall thickness. Arch Pathol 1974; 97:13
[5] 八木国夫.过酸化脂质测定.临床检查 1979；78：761
[6] 邹国林，桂兴芬，钟晓波，等.一种SOD的测活方法—邻苯三酚自氧化法的改进.生物化学与生物物理进展 1986 ；(4)：71
, 百拇医药
[7] Kannel WB. Prevalence and natural history of electrocardio-graphic left ventricular hypertrophy. Am J Med 1983; 75:4～11
[8] 卢兴.心力衰竭.第1版，北京：人民卫生出版社，1986：243～246
[9] Kindy MS, Carney JP, Dempsey RJ, et al. Ischemic induction of proto-oncogene expression in the gerbil brain. J Mol Nearosci 1991; 2:217, 百拇医药