系膜增生性肾小球肾炎iNOS mRNA的表达及其意义
作者：牛献芝 李鹤英 施惠英 王 群
单位：山东省立医院肾内科(济南，250021)
关键词：系膜增生性肾小球肾炎；一氧化氮合成酶；逆转录-聚合酶链式反应
肾脏病与透析肾移植杂志990414
我们观察了人类系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)肾组织是否存在诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA的表达及其与肾脏病理改变和蛋白尿之间的关系。旨为阐明MsPGN的发病机制提供新的实验依据。
1 对象和方法
1.1 对象 选择我院肾内科住院的患者54例，均排除狼疮性肾炎等继发性肾小球肾炎，行肾组织穿刺活检术(术前未接受激素治疗)，按WHO 1982年制定的肾小球疾病分类及文献所列诊断及分度标准[1]诊断为MsPGN(不包括IgA肾病)36例(轻度16例；中、重度20例，其中伴节段性硬化者17例)，非MsPGN 18例(毛细血管内增生性肾炎7例，膜增生性肾炎11例)，36例MsPGN患者中尿蛋白>3.5g/d者22例，<3.5g/d者14例。正常对照组16例，取自因肾肿瘤切除肾脏的远离肿瘤的部分，经光镜、免疫荧光、电镜检查证实形态正常。
, 百拇医药
1.2 方法 参照TRlzol试剂提供的方法抽提肾组织总RNA，采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织iNOS mRNA及β-actin mRNA的表达，并用β-actin光密度值进行标准校正。
2 结 果
正常肾组织中均无iNOS mRNA表达。MsPGN组、非MsPGN组iNOS mRNA表达分别为：1.029±0.166、0.459±0.115，MsPGN组iNOS mRNA表达明显高于非MsPGN组(P<0.001)。中、重度MsPGN者iNOS mRNA表达(1.092±0.139)明显高于轻度MsPGN者(0.949±0.167)(P<0.01)；系膜增生程度较重伴硬化者(1.105±0.145)明显高于增生程度轻无硬化者(0.962±0.158)(P<0.01)。尿蛋白>3.5 g/d者与尿蛋白<3.5 g/d者iNOS mRNA表达分别为：1.098±0.137、0.922±0.156，二者之间有显著性差异(P<0.01)。
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3 讨 论
系膜细胞具有类似巨噬细胞和平滑肌细胞的特性，可产生细胞因子，也可在细胞因子的刺激下诱导产生iNOS，产生的NO又会极大地增强细胞因子诱导的肾小球系膜细胞iNOS表达。二者互为因果，形成恶性循环，从而导致系膜细胞不断增殖，系膜基质增多积聚，有时虽然起始病因去除，但病理改变仍可继续进行，最终可致肾小球纤维化和硬化[2]。NO本身所具有的强烈放大效应提示可能与急慢性肾炎的发病和进展有关。研究发现IgA肾病iNOS高表达患者肾功能下降明显[3]。iNOS抑制剂氨基胍治疗的狼疮性肾炎鼠，其肾组织iNOS含量比对照组明显减少，肾小球病理损伤及硬化程度轻，尿蛋白排泄量少[4]。我们采用RT-PCR方法扩增证实，正常肾组织无iNOS mRNA表达，而病变肾组织中存在程度不同的iNOS mRNA表达，结合文献报道资料，我们初步认为，iNOS的异常表达参与了MsPGN的发生和进展过程。
NOS及其产生的NO引起肾组织损伤的作用机制尚未彻底阐明，目前认为，iNOS激活所产生的大量NO，作为免疫反应的效应分子不仅对入侵的微生物、肿瘤细胞有毒性作用，同时对机体正常细胞也产生同样的毒性作用。NO可快速进入体内，灭活铁硫为中心的酶类，阻断细胞能量代谢[5]，也能与超氧化物反应而产生诸如过氧化硝酸盐及羟自由基等细胞毒性物质，对系膜细胞及其周围细胞有直接毒性损伤作用。
, http://www.100md.com
iNOS表达增加而生成的NO与肾小球毛细血管内皮细胞上的受体结合，使细胞内cGMP增加，内皮细胞足突形态发生改变，滤孔面积增大，通透性增加[4]。NO尚可使系膜内cGMP巨增而抑制血管紧张素Ⅱ的收缩系膜细胞效应。系膜细胞是调节肾小球滤过功能的重要因素之一，其收缩功能的丧失，必将导致肾小球通透性增加，产生蛋白尿。本研究中尿蛋白>3.5 g/d者，iNOS mRNA表达量明显高于尿蛋白<3.5 g/d者，进一步证实了iNOS异常表达在MsPGN病理过程中的重要作用。
参考文献
1 孙 林，叶任高，李幼姬等.系膜增殖性肾炎患者生存率的研究.中华肾脏病杂志，1996，12：359
2 Pfeilschifter J，Kunz D，Muh1 H.Nitric oxide：An inflammatory mediator of glomerular mesangial cells.Nephron，1993，64：518
, 百拇医药
3 Kashem A，Endoh M，Yano N et al.Expression of inducible-NOS in human glomerulonephritis：The possible source is infiltrating monocytes /macrophages.Kidney Int，1996，50：392
4 Yang CW，Yu CC，Ko YC et al.Aminoguanidine reduced glomerular inducible nitric oxide synthase(iNOS)and transforming growth factor-beta 1(TGF-beta1)mRNA expression and diminishes glomerulosclerosis in NZB/WF1 mice.Clin Exp Immunol，1998，113(2)：258
5 Narita I，Border WA，Ketteler M et al.Nitric oxide mediates immunologic injury to kidney mesangium in experimental glomerulonephritis.Lab Invest，1995，72：17
(1999-04-08收稿，1999-05-04修回), 百拇医药
单位：山东省立医院肾内科(济南，250021)
关键词：系膜增生性肾小球肾炎；一氧化氮合成酶；逆转录-聚合酶链式反应
肾脏病与透析肾移植杂志990414
我们观察了人类系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)肾组织是否存在诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA的表达及其与肾脏病理改变和蛋白尿之间的关系。旨为阐明MsPGN的发病机制提供新的实验依据。
1 对象和方法
1.1 对象 选择我院肾内科住院的患者54例，均排除狼疮性肾炎等继发性肾小球肾炎，行肾组织穿刺活检术(术前未接受激素治疗)，按WHO 1982年制定的肾小球疾病分类及文献所列诊断及分度标准[1]诊断为MsPGN(不包括IgA肾病)36例(轻度16例；中、重度20例，其中伴节段性硬化者17例)，非MsPGN 18例(毛细血管内增生性肾炎7例，膜增生性肾炎11例)，36例MsPGN患者中尿蛋白>3.5g/d者22例，<3.5g/d者14例。正常对照组16例，取自因肾肿瘤切除肾脏的远离肿瘤的部分，经光镜、免疫荧光、电镜检查证实形态正常。
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1.2 方法 参照TRlzol试剂提供的方法抽提肾组织总RNA，采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织iNOS mRNA及β-actin mRNA的表达，并用β-actin光密度值进行标准校正。
2 结 果
正常肾组织中均无iNOS mRNA表达。MsPGN组、非MsPGN组iNOS mRNA表达分别为：1.029±0.166、0.459±0.115，MsPGN组iNOS mRNA表达明显高于非MsPGN组(P<0.001)。中、重度MsPGN者iNOS mRNA表达(1.092±0.139)明显高于轻度MsPGN者(0.949±0.167)(P<0.01)；系膜增生程度较重伴硬化者(1.105±0.145)明显高于增生程度轻无硬化者(0.962±0.158)(P<0.01)。尿蛋白>3.5 g/d者与尿蛋白<3.5 g/d者iNOS mRNA表达分别为：1.098±0.137、0.922±0.156，二者之间有显著性差异(P<0.01)。
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3 讨 论
系膜细胞具有类似巨噬细胞和平滑肌细胞的特性，可产生细胞因子，也可在细胞因子的刺激下诱导产生iNOS，产生的NO又会极大地增强细胞因子诱导的肾小球系膜细胞iNOS表达。二者互为因果，形成恶性循环，从而导致系膜细胞不断增殖，系膜基质增多积聚，有时虽然起始病因去除，但病理改变仍可继续进行，最终可致肾小球纤维化和硬化[2]。NO本身所具有的强烈放大效应提示可能与急慢性肾炎的发病和进展有关。研究发现IgA肾病iNOS高表达患者肾功能下降明显[3]。iNOS抑制剂氨基胍治疗的狼疮性肾炎鼠，其肾组织iNOS含量比对照组明显减少，肾小球病理损伤及硬化程度轻，尿蛋白排泄量少[4]。我们采用RT-PCR方法扩增证实，正常肾组织无iNOS mRNA表达，而病变肾组织中存在程度不同的iNOS mRNA表达，结合文献报道资料，我们初步认为，iNOS的异常表达参与了MsPGN的发生和进展过程。
NOS及其产生的NO引起肾组织损伤的作用机制尚未彻底阐明，目前认为，iNOS激活所产生的大量NO，作为免疫反应的效应分子不仅对入侵的微生物、肿瘤细胞有毒性作用，同时对机体正常细胞也产生同样的毒性作用。NO可快速进入体内，灭活铁硫为中心的酶类，阻断细胞能量代谢[5]，也能与超氧化物反应而产生诸如过氧化硝酸盐及羟自由基等细胞毒性物质，对系膜细胞及其周围细胞有直接毒性损伤作用。
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iNOS表达增加而生成的NO与肾小球毛细血管内皮细胞上的受体结合，使细胞内cGMP增加，内皮细胞足突形态发生改变，滤孔面积增大，通透性增加[4]。NO尚可使系膜内cGMP巨增而抑制血管紧张素Ⅱ的收缩系膜细胞效应。系膜细胞是调节肾小球滤过功能的重要因素之一，其收缩功能的丧失，必将导致肾小球通透性增加，产生蛋白尿。本研究中尿蛋白>3.5 g/d者，iNOS mRNA表达量明显高于尿蛋白<3.5 g/d者，进一步证实了iNOS异常表达在MsPGN病理过程中的重要作用。
参考文献
1 孙 林，叶任高，李幼姬等.系膜增殖性肾炎患者生存率的研究.中华肾脏病杂志，1996，12：359
2 Pfeilschifter J，Kunz D，Muh1 H.Nitric oxide：An inflammatory mediator of glomerular mesangial cells.Nephron，1993，64：518
, 百拇医药
3 Kashem A，Endoh M，Yano N et al.Expression of inducible-NOS in human glomerulonephritis：The possible source is infiltrating monocytes /macrophages.Kidney Int，1996，50：392
4 Yang CW，Yu CC，Ko YC et al.Aminoguanidine reduced glomerular inducible nitric oxide synthase(iNOS)and transforming growth factor-beta 1(TGF-beta1)mRNA expression and diminishes glomerulosclerosis in NZB/WF1 mice.Clin Exp Immunol，1998，113(2)：258
5 Narita I，Border WA，Ketteler M et al.Nitric oxide mediates immunologic injury to kidney mesangium in experimental glomerulonephritis.Lab Invest，1995，72：17
(1999-04-08收稿，1999-05-04修回), 百拇医药
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