血管内皮生长因子、nm23表达与鼻咽癌预后及其组织学类型的关系
作者：曾俊 周云峰 张弓 龚玲玲 王敏
单位：曾俊(湖北医科大学附属第二医院病理科, 武汉 430071)；周云峰(湖北医科大学附属第二医院放、化疗科, 武汉 430071)；张弓(湖北医科大学附属第二医院放、化疗科, 武汉 430071)；龚玲玲(湖北医科大学附属第二医院病理科, 武汉 430071)；王敏(湖北医科大学病理学教研室，武汉 43007)
关键词：鼻咽癌；血管内皮生长因子；nm23；基因
临床与实验病理学杂志990541
分类号 R739.6 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0468-02
在肿瘤生长和转移过程中，其血管生成是一重要因素。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF)在肿瘤血管生成过程中起着重要作用。作者应用免疫组化方法，回顾性检测了103例鼻咽癌(NPC)VEGF和nm23表达与其生存时间、转移、复发和组织学类型关系，旨在探讨NPC组织中 VEGF，nm23表达特征作为判断其预后的可行性。
, 百拇医药
1 材料方法
1.1 临床及病理资料 选用1986～1994年在我院放、化疗科治疗，并附有完整临床、病理随访资料103例。其中男性58例，女性45例，男、女之比为1.2∶1，患者年龄26～74岁，中位年龄44.03岁。全部病例均经病理证实为鼻咽癌。按WHO分类，鳞状细胞癌27例，非角化型鳞状细胞癌47例，未分化癌29例。临床分级(1997年UICC分类)84.46%为3～4级(87/103)。全部病例均经DF方案(DDP,100 mg/m2 D1,5-氟尿嘧啶100 mg/m2 D1-5)化疗和DT 66Gy/6.5W放疗。治疗后所有病例原发肿块均消失或缩小。按生存时间和复发是否超过5年而分为：大于5年(51例)，小于5年(52例)两组。
1.2 试剂 多克隆VEGF，nm23抗体和免疫组化S-P法试剂盒均购自福州迈新公司。
1.3 方法 全部病例活检组织均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，常规HE染色后按WHO分类法分型。采用免疫组化S-P法，微波抗原修复，PBS代替一抗作为阴性对照。
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1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 结果判定 阳性细胞胞浆呈棕黄色。阳性细胞大于10%为阳性，小于10%为阴性。
2.2 VEGF，nm23与NPC患者生存时间、转移、复发的关系 结果见表1。生存时间大于5年组的VEGF，nm23阳性表达率为39.21%和58.82%，小于5年组为VEGF阳性71.15%，nm23阳性表达为30.76%，复发、转移时间大于5年组的VEGF，nm23阳性表达率为37.03%和59.25%，小于5年组VEGF阳性表达率为71.79%，nm23阳性为30.75%。组间检验差异均有显著性(P<0.01，P<0.05)。
2.2 VEGF，nm23表达与NPC组织学类型关系 检验无差异(P>0.05)。
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表1 103例NPC VEGF，nm23的表达与其预后和组织学类型关系 组别
n
VEGF
P值
nm23
P值
+(%)
-
+(%)
1
生存期
>5年
<5年
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51
52
20(39.21)
37(71.15)
31
15
<0.01
30(58.82)
16(30.76)
21
36
<0.01
转移
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>5年
<5年
27
39
10(37.03)
28(71.79)
17
11
<0.01
16(59.25)
12(30.76)
11
27
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<0.05
组织学类型
鳞状细胞癌
27
15(55.55)
12
13(48.14)
14
非角化鳞癌
47
20(42.55)
27
>0.05
, 百拇医药
26(55.31)
20
>0.05
未分化癌
29
15(51.72)
14
17(58.62)
11
3 讨论
鼻咽粘膜组织淋巴管、血管丰富，且通透性高，虽然鼻咽癌原发灶很小，但癌细胞常易早期经淋巴道转移，在同侧颈部形成肿块，或经血道转移至肝、肺和骨。故60%以上NPC患者首次就医,已发生局部转移。VEGF首先是从正常垂体滤泡细胞中分离出来的一种能选择作用于血管内皮细胞的蛋白质〔1，2〕。通过旁分泌机制刺激血管内皮细胞分裂，增生。VEGF的受体分别是位于肿瘤血管内皮细胞的fit(fms-like tyrosine kinase)蛋白和flk(fetal liver kinase)蛋白。属RTK(receptor tyrosine kinase)家族。flk和fit蛋白均能与VEGF发生特异性，高亲和力结合。VEGF通过与这两种受体结合，促使血管内皮细胞增值，并增加血管的通透性，使肿瘤组织的血流供应增多，而影响肿瘤的生长，转移等生物学特征。Lawrence等〔2，3〕用原位杂交和免疫组化技术对乳腺癌和胃，肠道肿瘤的VEGF表达研究认为：VEGF的高表达与肿瘤患者的生存期，转移等有关。即VEGF高表达者生存期短，易转移。本组结果表明与上述报道一致。亦说明VEGF可作为判断NPC预后的一项有实用价值的预测指标。但本研究发现，在正常鳞状上皮细胞胞浆亦可见VEGF表达，和Lawrence报道正常上皮细胞VEGF不表达相反。
, 百拇医药
nm23是一种与恶性肿瘤有关的转移抑制基因。它通过调节某些蛋白质的合成或激发某些蛋白质的聚合，解聚，而参与肿瘤形成的转移过程的调节。现已发现：nm23基因在某些具有转移特性的人类肿瘤基因组中存在，丢失，扩增和突变与其转移相关。Cohn和Leone等〔3，4〕在乳腺癌、肺癌、肾癌及大肠癌的研究中发现：nm23的低表达与肿瘤术后发生远处转移有关。本研究亦支持这一结果。说明nm23和VEGF联合检测，其低表达不但可判断NPC 5年生存期，也可用来预测具有高危复发、转移的病例。
我们研究发现：虽然NPC有不同组织学形态，但各类型VEGF，nm23的表达无差异，临床可以根据NPC的VEGF、nm23的表达特征，考虑如何优化目前NPC的综合治疗方案，以提高NPC患者的远期生存率。
基金项目：湖北省教委自然科学类重点资助项目(No 97A051)
参考文献
, 百拇医药
1，Berse B,Brown L,Van DW et al. Vascular permeability gene is expressed dirrerentially in nomal tissues,macrophages,and tumors. Mol Biol Cell, 1992;3(1):211
2，Lawrece BF,Brygida B,Robert WJ et al. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptor in adenocarcinomas of the gastrointestinal tract. Cancer Res, 1993;53(3):4727
3，Cohn KH, Wang HS, Fidelina DL et al. Association of nm23-Hallelic deletions with distant metastasis in colorectal carcinoma. Lancet, 1991;388(1):722
4，Leone A, Mc Bride OW .Somatic allelic deletion of nm23 in human. Cancer Res, 1991;51:2490
收稿日期：1999-02-10, 百拇医药
单位：曾俊(湖北医科大学附属第二医院病理科, 武汉 430071)；周云峰(湖北医科大学附属第二医院放、化疗科, 武汉 430071)；张弓(湖北医科大学附属第二医院放、化疗科, 武汉 430071)；龚玲玲(湖北医科大学附属第二医院病理科, 武汉 430071)；王敏(湖北医科大学病理学教研室，武汉 43007)
关键词：鼻咽癌；血管内皮生长因子；nm23；基因
临床与实验病理学杂志990541
分类号 R739.6 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)05-0468-02
在肿瘤生长和转移过程中，其血管生成是一重要因素。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF)在肿瘤血管生成过程中起着重要作用。作者应用免疫组化方法，回顾性检测了103例鼻咽癌(NPC)VEGF和nm23表达与其生存时间、转移、复发和组织学类型关系，旨在探讨NPC组织中 VEGF，nm23表达特征作为判断其预后的可行性。
, 百拇医药
1 材料方法
1.1 临床及病理资料 选用1986～1994年在我院放、化疗科治疗，并附有完整临床、病理随访资料103例。其中男性58例，女性45例，男、女之比为1.2∶1，患者年龄26～74岁，中位年龄44.03岁。全部病例均经病理证实为鼻咽癌。按WHO分类，鳞状细胞癌27例，非角化型鳞状细胞癌47例，未分化癌29例。临床分级(1997年UICC分类)84.46%为3～4级(87/103)。全部病例均经DF方案(DDP,100 mg/m2 D1,5-氟尿嘧啶100 mg/m2 D1-5)化疗和DT 66Gy/6.5W放疗。治疗后所有病例原发肿块均消失或缩小。按生存时间和复发是否超过5年而分为：大于5年(51例)，小于5年(52例)两组。
1.2 试剂 多克隆VEGF，nm23抗体和免疫组化S-P法试剂盒均购自福州迈新公司。
1.3 方法 全部病例活检组织均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，常规HE染色后按WHO分类法分型。采用免疫组化S-P法，微波抗原修复，PBS代替一抗作为阴性对照。
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1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 结果判定 阳性细胞胞浆呈棕黄色。阳性细胞大于10%为阳性，小于10%为阴性。
2.2 VEGF，nm23与NPC患者生存时间、转移、复发的关系 结果见表1。生存时间大于5年组的VEGF，nm23阳性表达率为39.21%和58.82%，小于5年组为VEGF阳性71.15%，nm23阳性表达为30.76%，复发、转移时间大于5年组的VEGF，nm23阳性表达率为37.03%和59.25%，小于5年组VEGF阳性表达率为71.79%，nm23阳性为30.75%。组间检验差异均有显著性(P<0.01，P<0.05)。
2.2 VEGF，nm23表达与NPC组织学类型关系 检验无差异(P>0.05)。
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表1 103例NPC VEGF，nm23的表达与其预后和组织学类型关系 组别
n
VEGF
P值
nm23
P值
+(%)
-
+(%)
1
生存期
>5年
<5年
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51
52
20(39.21)
37(71.15)
31
15
<0.01
30(58.82)
16(30.76)
21
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<0.01
转移
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>5年
<5年
27
39
10(37.03)
28(71.79)
17
11
<0.01
16(59.25)
12(30.76)
11
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<0.05
组织学类型
鳞状细胞癌
27
15(55.55)
12
13(48.14)
14
非角化鳞癌
47
20(42.55)
27
>0.05
, 百拇医药
26(55.31)
20
>0.05
未分化癌
29
15(51.72)
14
17(58.62)
11
3 讨论
鼻咽粘膜组织淋巴管、血管丰富，且通透性高，虽然鼻咽癌原发灶很小，但癌细胞常易早期经淋巴道转移，在同侧颈部形成肿块，或经血道转移至肝、肺和骨。故60%以上NPC患者首次就医,已发生局部转移。VEGF首先是从正常垂体滤泡细胞中分离出来的一种能选择作用于血管内皮细胞的蛋白质〔1，2〕。通过旁分泌机制刺激血管内皮细胞分裂，增生。VEGF的受体分别是位于肿瘤血管内皮细胞的fit(fms-like tyrosine kinase)蛋白和flk(fetal liver kinase)蛋白。属RTK(receptor tyrosine kinase)家族。flk和fit蛋白均能与VEGF发生特异性，高亲和力结合。VEGF通过与这两种受体结合，促使血管内皮细胞增值，并增加血管的通透性，使肿瘤组织的血流供应增多，而影响肿瘤的生长，转移等生物学特征。Lawrence等〔2，3〕用原位杂交和免疫组化技术对乳腺癌和胃，肠道肿瘤的VEGF表达研究认为：VEGF的高表达与肿瘤患者的生存期，转移等有关。即VEGF高表达者生存期短，易转移。本组结果表明与上述报道一致。亦说明VEGF可作为判断NPC预后的一项有实用价值的预测指标。但本研究发现，在正常鳞状上皮细胞胞浆亦可见VEGF表达，和Lawrence报道正常上皮细胞VEGF不表达相反。
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nm23是一种与恶性肿瘤有关的转移抑制基因。它通过调节某些蛋白质的合成或激发某些蛋白质的聚合，解聚，而参与肿瘤形成的转移过程的调节。现已发现：nm23基因在某些具有转移特性的人类肿瘤基因组中存在，丢失，扩增和突变与其转移相关。Cohn和Leone等〔3，4〕在乳腺癌、肺癌、肾癌及大肠癌的研究中发现：nm23的低表达与肿瘤术后发生远处转移有关。本研究亦支持这一结果。说明nm23和VEGF联合检测，其低表达不但可判断NPC 5年生存期，也可用来预测具有高危复发、转移的病例。
我们研究发现：虽然NPC有不同组织学形态，但各类型VEGF，nm23的表达无差异，临床可以根据NPC的VEGF、nm23的表达特征，考虑如何优化目前NPC的综合治疗方案，以提高NPC患者的远期生存率。
基金项目：湖北省教委自然科学类重点资助项目(No 97A051)
参考文献
, 百拇医药
1，Berse B,Brown L,Van DW et al. Vascular permeability gene is expressed dirrerentially in nomal tissues,macrophages,and tumors. Mol Biol Cell, 1992;3(1):211
2，Lawrece BF,Brygida B,Robert WJ et al. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptor in adenocarcinomas of the gastrointestinal tract. Cancer Res, 1993;53(3):4727
3，Cohn KH, Wang HS, Fidelina DL et al. Association of nm23-Hallelic deletions with distant metastasis in colorectal carcinoma. Lancet, 1991;388(1):722
4，Leone A, Mc Bride OW .Somatic allelic deletion of nm23 in human. Cancer Res, 1991;51:2490
收稿日期：1999-02-10, 百拇医药