HPV16、18 E6蛋白在乳腺癌组织中的表达
作者：任占平 黄健辉 石喆 陈蔚麟 阮伶 唐德艳 戴文斌
单位：任占平 石喆 陈蔚麟 阮伶 唐德艳 戴文斌(广西柳州市人民医院病理科，柳州 545001)；黄健辉(广西柳州市人民医院外科，柳州 545001)
关键词：乳腺肿瘤；乳头状瘤病毒；人；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990517摘要 目的：观察HPV16、18 E6蛋白在人乳腺癌中的表达并探讨HPV16、18感染与乳腺癌病因学的关系。方法：应用S-P免疫组化法，检测53例乳腺癌、20例正常乳腺组织中HPV16、18 E6蛋白的表达。结果：乳腺癌组织中HPV16、18 E6蛋白的阳性表达率为56.6%(30/53)，多种组织学类型的乳腺癌组织中有HPV16、18型感染的存在。结论：HPV16、18型感染可能与乳腺癌的病因学密切相关。
分类号 R737.9 文献标识码 A
, http://www.100md.com
文章编号 1001-7399(1999)05-0425-02
Expression of human papillomavirus 16、18 E6 protein in breast cancer
Ren Zhanping, Huang Jianhui, Shi Zhe et al
(Dept of Pathol, Liuzhou Peoples Hospital of Guangxi 545001)
ABSTRACT Purpose To observe the expression of human papillomavirus 16、18 E6 protein of human breast cancer and to assess the relationship between HPV 16、18 infection and breast carcinogenesis. Metheds Immunohistochemical S-P method was used to detect the expression of HPV 16、18 E6 protein in 53 cases of breast cancer and 20 cases of normal breast tissues. Results The positivity rates of HPV 16、18 E6 were 56.6%(30/53) in the cancer tissues. HPV 16、18 infection was confirmed in some types of breast cancer. Conclussion HPV16、18 infection may play an important role in pathogenesis of human breast cancer.
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KEY WORDS breast neoplasms; papillomavirus, human; immunohistochemistry
人乳头瘤病毒(HPV)感染与人腺上皮发生的恶性肿瘤之间的关系已愈来愈引起人们的关注〔1〕。为了解高危型HPV16、18感染与乳腺癌之间的相互关系，我们采用免疫组化方法，检测HPV16、18蛋白在乳腺组织中的表达，尝试探讨HPV16、18感染在乳腺癌发生中的作用。
1 材料和方法
1.1 标本 随机抽取我院1995～1997年手术切除后经病理诊断确诊的女性乳腺癌材料53例，年龄35～70岁，乳腺癌病理组织学分型参照《中国常见恶性肿瘤诊治规范*乳腺癌分册》提出的标准进行分型，其中单纯癌26例，浸润性导管癌10例，硬癌5例，粘液腺癌4例，导管内癌伴早期浸润3例，髓样癌2例，派杰病伴导管内癌2例，浸润性小叶癌1例。取同期20例乳腺纤维腺瘤旁正常乳腺组织材料为对照组。组织经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片。
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1.2 试剂 S-P试剂盒为Zymed公司产品，购自福州迈新生物技术公司。HPV16、18 E6单抗(HPV-C 1 P 5)为美国Santa Cruz公司产品，购自武汉博士德生物公司。
1.3 染色方法 采用免疫组化S-P法，具体操作方法按文献进行〔2〕。实验用已知宫颈鳞癌组织HPV16、18 DNA原位杂交阳性且HPV16、18 E6蛋白阳性的切片作阳性对照，用PBS液取代一抗作阴性对照。HPV16、18 E6单抗的工作浓度为1∶50。
1.4 结果判断 以细胞核内呈现棕黄色颗粒为阳性标记，无着色者为阴性。
2 结果
乳腺癌和正常乳腺组织中HPV16、18 E6免疫组化检测的情况见表1。结果表明，除1例浸润性小叶癌外，多种组织学类型的乳腺癌癌细胞核内均显示有HPV16、18 E6的阳性表达，阳性颗粒主要定位于细胞核，部分胞核阳性者胞浆也见到阳性反应。阳性细胞数个至弥漫分布(图1)，癌组中30例HPV16、18 E6阳性者有8例在癌旁组织内均见到伴有乳腺腺病改变，其中3例在其腺泡上皮细胞核内显示有E6阳性表达(图2)。2例乳头派杰病伴导管内癌者，1例在乳头下大导管内癌中的癌细胞核内见到E6阳性。此外，在20例正常乳腺腺泡上皮及导管上皮细胞核中3例显示有E6阳性表达。
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表1 乳腺癌和正常乳腺组织HPV16、18 E6蛋白表达的情况 组织学类型
n
HPV16、18 E6
阳性(%)
HPV16、18 E6
阴性(%)
乳腺癌
53
30(56.6)
23(43.4)
单纯癌
26
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16
10
浸润性导管癌
10
6
4
硬癌
5
2
3
粘液腺癌
4
2
2
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导管内癌伴早期浸润
3
2
1
髓样癌
2
1
1
乳头派杰病伴导管内癌
2
1
1
浸润性小叶癌
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1
0
1
正常乳腺组织
20
3(15.0)
17(85.0)
图1 乳腺单纯癌癌细胞核内见HPV16、18 E6阳性颗粒。S-P×400
图2 乳腺癌癌旁乳腺腺病的腺泡上皮细胞核内见HPV16、18 E6阳性颗粒。S-P×400
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3 讨论
1988年Tase等〔3〕采用分子原位杂交技术在宫颈腺癌和腺鳞癌中检出HPV16、18 DNA的存在，并以HPV18型感染占优势。随后的研究发现，在大肠腺癌组织中也存在着HPV16、18 DNA的序列〔4〕。这些研究表明，在起源于人腺上皮的肿瘤中，HPV感染作为病因学的因素是大大地增加了。自1993年Mansur等〔5〕报道HPV16的E6蛋白可转化人乳腺上皮细胞以来，国外一些研究对HPV与乳腺癌的关系进行了一些探讨，认为与宫颈癌密切相关的HPV16和18型可见于生殖道以外包括乳腺等许多上皮恶性病变中〔6，7〕。但一些检测报道未能证实乳腺癌组织中有HPV的存在。1992年Brastthauer等〔8〕采用分子生物学方法检测15例乳腺乳头状瘤，15例乳头状癌和13例浸润性导管癌，但没有HPV DNA片断被检出。Gopalkrishna等〔7〕检测26例乳腺癌细胞穿刺标本和4例乳腺癌手术活检标本，亦未能证实有HPV16、18型DNA的存在。目前有关HPV感染与乳腺癌的关系仍在探讨中。我们认为乳腺作为一个与人类生活密切相关的性征器官，其乳腺小叶的腺泡上皮通过各级导管最后与乳头皮肤的鳞状上皮相过渡并开口于外界，因而从理论上说，人乳腺腺泡上皮和导管上皮中HPV感染的机会应该说是存在的。此外，从我们的实际工作中体会到，外科切除的乳腺癌标本通常是连同切除的乳腺组织一块固定于福尔马林溶液内，由于癌组织多位于乳腺内，因而对癌组织的固定往往是不及时和不充分的，这对有效地保存癌组织内HPV DNA是十分不利的，因而可能影响了对乳腺癌中感染的HPV DNA的检测。我们认为，如选择有效地保存DNA的组织固定方法，或许将有助于对乳腺癌组织中PHV DNA的检测。
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在HPV16、18感染的宫颈癌组织细胞系中，HPV16、18的E6、E7基因是持续的表达和保存，其编码产生E6和E7癌病毒蛋白，HPV16、18 E6蛋白致癌的关键是E6可与细胞内野生型p53结合并导致p53的降解，使得p53对细胞周期相关因子p21WAF1，cyclins, cdks的调节作用丧失，细胞异常增殖并向恶性转化，此外，E6蛋白还可通过激活端粒酶而致正常细胞永生化〔1，5〕。HPV16、18 E6单抗可有效地检测出组织中感染的HPV16、18 E6蛋白且可用于福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中〔2〕。本组乳腺癌中HPV16、18 E6的阳性率达56.6%，在癌旁乳腺腺病的腺泡上皮细胞核内以及部分正常乳腺上皮细胞中均证实有HPV16、18 E6的存在，表明在乳腺组织中HPV16、18感染是存在的且可能与乳腺癌的病因学有着密切的联系。在1例派杰病伴导管内癌中，我们在乳头下大导管的导管内癌癌细胞核内证实有E6的阳性表达，这使我们想到乳头派杰病中派杰细胞是否就是HPV在乳头皮肤这个特殊的部位感染而表现出来的特征性的“挖空细胞”。采用分子生物学和免疫组化技术扩大对此类病变及乳腺导管上皮不典型性增生等癌前病变材料的检测，将有助于进一步揭示HPV16、18感染在乳腺癌病因学中所起的作用。
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基金项目：广西自然科学基金资助课题(No 9912043)
作者简介：任占平，男，43岁，副主任医师。研究方向：外科病理
参考文献
1，Arends MJ, Buckley CH, Wells M. Aetiology, pathologenesis and pathology of cervical neoplasia. J Clin Pathol,1998;51:96
2，任占平. HPV16、18 E6单抗S-P法染色体会. 临床与实验病理学杂志，1997；13(3)：284
3，Cooper K, Herrington CS, Lo E S-F et al. Integrtion of human papillomavirus types 16 and 18 in cervical adenocarcinoma. J Clin Pathol,1992;45:382
, http://www.100md.com
4，Dirgan D, Manalo P, Hall M et al. Association of human papillomavirus and colon neoplasms. Arch Surg,1990;125:862
5，陈华波，于修平. 人乳头瘤病毒E6及E7蛋白研究进展. 国外医学微生物学分册，1998；21(5)：11
6，Kowalzick L, Gross G, Ring J. Human papillomaviruses. Associated diseases of the breast. Hautarzt,1993;44(10):644
7，Gopalkrishna V, Singh UR, Sodhani P et al. Absence of human papillomavirus DNA in breast cancer as revealed by polymerase chain reaction. Breast Cancer Res Treat,1996;39(2):197
28，Bratthauer GL, Tavassoli FA, OLeary TJ. Etiology of breast carcinoma: no apparent role for popillomavirus types 6/11/16/18. Pathol Res Pract,1992;188(3):384
(图片见插页第64页)
收稿日期：1999-03-03
修回日期：1999-04-14, http://www.100md.com
单位：任占平 石喆 陈蔚麟 阮伶 唐德艳 戴文斌(广西柳州市人民医院病理科，柳州 545001)；黄健辉(广西柳州市人民医院外科，柳州 545001)
关键词：乳腺肿瘤；乳头状瘤病毒；人；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990517摘要 目的：观察HPV16、18 E6蛋白在人乳腺癌中的表达并探讨HPV16、18感染与乳腺癌病因学的关系。方法：应用S-P免疫组化法，检测53例乳腺癌、20例正常乳腺组织中HPV16、18 E6蛋白的表达。结果：乳腺癌组织中HPV16、18 E6蛋白的阳性表达率为56.6%(30/53)，多种组织学类型的乳腺癌组织中有HPV16、18型感染的存在。结论：HPV16、18型感染可能与乳腺癌的病因学密切相关。
分类号 R737.9 文献标识码 A
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文章编号 1001-7399(1999)05-0425-02
Expression of human papillomavirus 16、18 E6 protein in breast cancer
Ren Zhanping, Huang Jianhui, Shi Zhe et al
(Dept of Pathol, Liuzhou Peoples Hospital of Guangxi 545001)
ABSTRACT Purpose To observe the expression of human papillomavirus 16、18 E6 protein of human breast cancer and to assess the relationship between HPV 16、18 infection and breast carcinogenesis. Metheds Immunohistochemical S-P method was used to detect the expression of HPV 16、18 E6 protein in 53 cases of breast cancer and 20 cases of normal breast tissues. Results The positivity rates of HPV 16、18 E6 were 56.6%(30/53) in the cancer tissues. HPV 16、18 infection was confirmed in some types of breast cancer. Conclussion HPV16、18 infection may play an important role in pathogenesis of human breast cancer.
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KEY WORDS breast neoplasms; papillomavirus, human; immunohistochemistry
人乳头瘤病毒(HPV)感染与人腺上皮发生的恶性肿瘤之间的关系已愈来愈引起人们的关注〔1〕。为了解高危型HPV16、18感染与乳腺癌之间的相互关系，我们采用免疫组化方法，检测HPV16、18蛋白在乳腺组织中的表达，尝试探讨HPV16、18感染在乳腺癌发生中的作用。
1 材料和方法
1.1 标本 随机抽取我院1995～1997年手术切除后经病理诊断确诊的女性乳腺癌材料53例，年龄35～70岁，乳腺癌病理组织学分型参照《中国常见恶性肿瘤诊治规范*乳腺癌分册》提出的标准进行分型，其中单纯癌26例，浸润性导管癌10例，硬癌5例，粘液腺癌4例，导管内癌伴早期浸润3例，髓样癌2例，派杰病伴导管内癌2例，浸润性小叶癌1例。取同期20例乳腺纤维腺瘤旁正常乳腺组织材料为对照组。组织经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片。
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1.2 试剂 S-P试剂盒为Zymed公司产品，购自福州迈新生物技术公司。HPV16、18 E6单抗(HPV-C 1 P 5)为美国Santa Cruz公司产品，购自武汉博士德生物公司。
1.3 染色方法 采用免疫组化S-P法，具体操作方法按文献进行〔2〕。实验用已知宫颈鳞癌组织HPV16、18 DNA原位杂交阳性且HPV16、18 E6蛋白阳性的切片作阳性对照，用PBS液取代一抗作阴性对照。HPV16、18 E6单抗的工作浓度为1∶50。
1.4 结果判断 以细胞核内呈现棕黄色颗粒为阳性标记，无着色者为阴性。
2 结果
乳腺癌和正常乳腺组织中HPV16、18 E6免疫组化检测的情况见表1。结果表明，除1例浸润性小叶癌外，多种组织学类型的乳腺癌癌细胞核内均显示有HPV16、18 E6的阳性表达，阳性颗粒主要定位于细胞核，部分胞核阳性者胞浆也见到阳性反应。阳性细胞数个至弥漫分布(图1)，癌组中30例HPV16、18 E6阳性者有8例在癌旁组织内均见到伴有乳腺腺病改变，其中3例在其腺泡上皮细胞核内显示有E6阳性表达(图2)。2例乳头派杰病伴导管内癌者，1例在乳头下大导管内癌中的癌细胞核内见到E6阳性。此外，在20例正常乳腺腺泡上皮及导管上皮细胞核中3例显示有E6阳性表达。
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表1 乳腺癌和正常乳腺组织HPV16、18 E6蛋白表达的情况 组织学类型
n
HPV16、18 E6
阳性(%)
HPV16、18 E6
阴性(%)
乳腺癌
53
30(56.6)
23(43.4)
单纯癌
26
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16
10
浸润性导管癌
10
6
4
硬癌
5
2
3
粘液腺癌
4
2
2
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导管内癌伴早期浸润
3
2
1
髓样癌
2
1
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乳头派杰病伴导管内癌
2
1
1
浸润性小叶癌
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1
0
1
正常乳腺组织
20
3(15.0)
17(85.0)
图1 乳腺单纯癌癌细胞核内见HPV16、18 E6阳性颗粒。S-P×400
图2 乳腺癌癌旁乳腺腺病的腺泡上皮细胞核内见HPV16、18 E6阳性颗粒。S-P×400
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3 讨论
1988年Tase等〔3〕采用分子原位杂交技术在宫颈腺癌和腺鳞癌中检出HPV16、18 DNA的存在，并以HPV18型感染占优势。随后的研究发现，在大肠腺癌组织中也存在着HPV16、18 DNA的序列〔4〕。这些研究表明，在起源于人腺上皮的肿瘤中，HPV感染作为病因学的因素是大大地增加了。自1993年Mansur等〔5〕报道HPV16的E6蛋白可转化人乳腺上皮细胞以来，国外一些研究对HPV与乳腺癌的关系进行了一些探讨，认为与宫颈癌密切相关的HPV16和18型可见于生殖道以外包括乳腺等许多上皮恶性病变中〔6，7〕。但一些检测报道未能证实乳腺癌组织中有HPV的存在。1992年Brastthauer等〔8〕采用分子生物学方法检测15例乳腺乳头状瘤，15例乳头状癌和13例浸润性导管癌，但没有HPV DNA片断被检出。Gopalkrishna等〔7〕检测26例乳腺癌细胞穿刺标本和4例乳腺癌手术活检标本，亦未能证实有HPV16、18型DNA的存在。目前有关HPV感染与乳腺癌的关系仍在探讨中。我们认为乳腺作为一个与人类生活密切相关的性征器官，其乳腺小叶的腺泡上皮通过各级导管最后与乳头皮肤的鳞状上皮相过渡并开口于外界，因而从理论上说，人乳腺腺泡上皮和导管上皮中HPV感染的机会应该说是存在的。此外，从我们的实际工作中体会到，外科切除的乳腺癌标本通常是连同切除的乳腺组织一块固定于福尔马林溶液内，由于癌组织多位于乳腺内，因而对癌组织的固定往往是不及时和不充分的，这对有效地保存癌组织内HPV DNA是十分不利的，因而可能影响了对乳腺癌中感染的HPV DNA的检测。我们认为，如选择有效地保存DNA的组织固定方法，或许将有助于对乳腺癌组织中PHV DNA的检测。
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在HPV16、18感染的宫颈癌组织细胞系中，HPV16、18的E6、E7基因是持续的表达和保存，其编码产生E6和E7癌病毒蛋白，HPV16、18 E6蛋白致癌的关键是E6可与细胞内野生型p53结合并导致p53的降解，使得p53对细胞周期相关因子p21WAF1，cyclins, cdks的调节作用丧失，细胞异常增殖并向恶性转化，此外，E6蛋白还可通过激活端粒酶而致正常细胞永生化〔1，5〕。HPV16、18 E6单抗可有效地检测出组织中感染的HPV16、18 E6蛋白且可用于福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中〔2〕。本组乳腺癌中HPV16、18 E6的阳性率达56.6%，在癌旁乳腺腺病的腺泡上皮细胞核内以及部分正常乳腺上皮细胞中均证实有HPV16、18 E6的存在，表明在乳腺组织中HPV16、18感染是存在的且可能与乳腺癌的病因学有着密切的联系。在1例派杰病伴导管内癌中，我们在乳头下大导管的导管内癌癌细胞核内证实有E6的阳性表达，这使我们想到乳头派杰病中派杰细胞是否就是HPV在乳头皮肤这个特殊的部位感染而表现出来的特征性的“挖空细胞”。采用分子生物学和免疫组化技术扩大对此类病变及乳腺导管上皮不典型性增生等癌前病变材料的检测，将有助于进一步揭示HPV16、18感染在乳腺癌病因学中所起的作用。
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基金项目：广西自然科学基金资助课题(No 9912043)
作者简介：任占平，男，43岁，副主任医师。研究方向：外科病理
参考文献
1，Arends MJ, Buckley CH, Wells M. Aetiology, pathologenesis and pathology of cervical neoplasia. J Clin Pathol,1998;51:96
2，任占平. HPV16、18 E6单抗S-P法染色体会. 临床与实验病理学杂志，1997；13(3)：284
3，Cooper K, Herrington CS, Lo E S-F et al. Integrtion of human papillomavirus types 16 and 18 in cervical adenocarcinoma. J Clin Pathol,1992;45:382
, http://www.100md.com
4，Dirgan D, Manalo P, Hall M et al. Association of human papillomavirus and colon neoplasms. Arch Surg,1990;125:862
5，陈华波，于修平. 人乳头瘤病毒E6及E7蛋白研究进展. 国外医学微生物学分册，1998；21(5)：11
6，Kowalzick L, Gross G, Ring J. Human papillomaviruses. Associated diseases of the breast. Hautarzt,1993;44(10):644
7，Gopalkrishna V, Singh UR, Sodhani P et al. Absence of human papillomavirus DNA in breast cancer as revealed by polymerase chain reaction. Breast Cancer Res Treat,1996;39(2):197
28，Bratthauer GL, Tavassoli FA, OLeary TJ. Etiology of breast carcinoma: no apparent role for popillomavirus types 6/11/16/18. Pathol Res Pract,1992;188(3):384
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收稿日期：1999-03-03
修回日期：1999-04-14, http://www.100md.com