血清酸性同工铁蛋白对原发性肝癌的诊断意义
作者：邹 岚 郝德治 蔡桂英 魏 玲
单位：邹 岚 郝德治 华西医科大学附一院肿瘤科(610041)；蔡桂英 魏 玲 华西医科大学基础生化教研室参考文献
关键词：血清酸性同工铁蛋白；原发性肝癌；酶联免疫吸附试验
血清酸性同工铁蛋白对原发性肝癌的诊断意义 摘 要 目的：研究血清酸性铁蛋白对原发性肝癌的诊断意义。方法：采用ELISA(双抗体夹心法)测定48例原发性肝细胞癌(HCC)，30例肝炎，28例肝硬化及33例正常人血清酸性同工铁蛋白(SAIF)水平。结果：HCC组与各组比较，均有显著差异。以SAIF≥250ug/L为临界值SAIF对HCC诊断的灵敏度为85.46%，特异度为86.81%。并且SAIF与AFP无相关性，AFP阳性与AFP阴性的患者中，SAIF灵敏度分别为90.92%和73.33%，两者差异无统计学意义。将SAIF与AFP联合检测，可将HCC检出率提高到91.6%，而特异度为96.7%。SAIF与肝癌大小无关。
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The Diagnostic Significance of Serum Acidic Isoferrintin in PatientsWith Primary Hepatocellular Carcinoma
Zou lan, Hao Dezhi,Cai Cuiying,Wei Ling
West China Medical University,Chengdu 610041
Abstract objective:To evaluate the diagnostic significance of serum acidic isoferrintin in patients with primary hepato cellular carcinoma.Methods: The leveis of serum acidic isoferritin (SAIF) in 48 cases of ptimary hepatocellular carcinoma (HCC),30 cases of hepatitis,28 cases of liver cirrihosis,as well as 33 healthy subjects were measured with ELISA (double-determinant).Results: With the cut-off point being 250ug/L, the sensitivity and specificity to HCC cases were 85.46% and 86.81% respectively. SAIF was not related to AFP in HCC cases. In AFP(+) and AFP (-) patients , the sensitivity of SAIF had no significant difference (90.92% , 73.33% ;P>0.05). The parallel test of AFP and SAIF can improve the dignosis of HCC . The valuses of SAIF were not related to the volumes of the tumors and the clinical stages. SAIF is a useful serum marker for the diagnosis of HCC.
, 百拇医药
Key wor :Serum acidic isofrerrtin Primary hepatocellulr carcinoma Enzyme-linked immunosbent assay
铁蛋白是和许多肿瘤的发生、发展有关的重要蛋白质[1]。根据其H和L亚基的比例不同形成一组同工体，其中以H亚基为主者等电点偏酸，称为酸性同工铁蛋白(AIF)。研究表明AIF较总铁蛋白对肝癌的诊断更有意义[2]。
由于AIF与碱性铁蛋白存在结构、功能、免疫性质上的差异，[3]故可用免疫学的方法测定之。本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA，双抗体夹心法)对原发性肝细胞癌(HCC，以下简称肝癌)及两种易与其混淆的疾病患者的血清AIF(Serum AIF SAIF)进行测定，探讨SAIF在HCC患者中的水平及其对HCC诊断的临床意义。
, 百拇医药 1 对象与方法
1.1 研究对象：全部病例106例均为华西医科大学附一院1994年9月～1996年6月期间住院病人。
肝癌的诊断按1991年出版《原发性肝癌诊断治疗规范》中的诊断标准，48例患者中有31例经手术后病理证实为肝细胞癌。所有患者均进行CT或MRI检查，手术病人术中测量肿瘤。
肝炎的诊断按1990年全国病毒性肝炎学术会议制定的标准，其中22例为急性肝炎，8例为慢性活动性肝炎。
肝硬化的诊断除有相应的临床表现以外，均有两项以上的实验室或影像学诊断佐证(白球蛋白比例倒置，凝血酶原时间延长，肝脏B超或CT提示肝硬化)。
所有病人均测定血清甲胎蛋白(AFP)。
正常对照组33例均为本院健康献血员。
, 百拇医药
1.2 主要材料与方法
1.2.1主要材料：人肝癌AIF及抗AIF血清由华西医科大学基础生化免疫室制备并提供。[4]辣根过氧化物酶为上海东风生化试剂厂生产(R Z=3)。酶标体系用过碘酸钠氧化法。固相载体为40孔聚苯乙烯塑料板。DC3022型酶标仪为南京电子管厂生产。主要药品均为分析纯。
1.2.2 主要方法：SAIF的测定用ELISA(双抗体夹心法)。血清AFP用放射免疫法测定。
SAIF值的比较用等级分组资料的秩和检验；临界值的选择用受试者工作曲线(ROC法)；[5]率的比较用X2检验；相关性检验用相关分析。
2 结 果
2.1 各组年龄、性别分布见表1。
, 百拇医药
表1 各组年龄、性别分布
组别
总例数
男
女
年龄范围(岁)
中位年龄(岁)
正常人
33
22
11
22-47
32
, 百拇医药
肝硬化
28
18
10
27-62
44
肝 炎
30
18
12
20-62
36
肝 癌
, http://www.100md.com 48
37
11
23-66
45
2.2 各组SAIF分布情况见表2。
2.3 各组SAIF比较结果。
用等级分组资料秩和检验对各组SAIF值进行分析，结果显示，肝癌组SAIF值较正常人、肝硬化、肝炎组均有显著差异(P值分析小于0.01，0.01，0.05)。肝炎组较正常组及肝硬化组增高(P值<0.05)。肝硬化组与正常组无差异(P>0.05)。
表2 各组SAIF值分布情况
, http://www.100md.com 组别
例数
SAIF值(ug/L)
<50
50～
100～
250～
400～
800～
正常人
33
12
18
, 百拇医药
2
1
肝硬化
28
7
10
11
肝 炎
30
2
8
11
8
2
, http://www.100md.com
1
肝 癌
48
7
15
18
18
合 计
139
21
34
31
24
20
, 百拇医药
9
2.4 SAIF对HCC的评价指标：以SAIF≥250ug/L为阳性。[5]计算得如下结果：
灵敏度=41/48=85.46%
特异度=79/91=86.81%
准确性=(41+79)/139=86.33%
2.5 与血清AFP比较：本文48例HCC中，有AFP(+)者15例，AFP灵敏度为68.75%，特异度为97.8%。与SAIF比较，两者灵敏度无显著差异(X2=3.50，P>0.05)。SAIF在AFP(+)和AFP(-)患者中的灵敏度分别为90.92%和73.33%，两者比较无显著差异(x2=2.55，P>0.05)。对AFP和SAIF进行联合检测(平行试验，既两者均阳性和任一项为阳性时诊断HCC，两者均阴性时排除HCC)，则灵敏度为91.6%(44/48)，特异度为96.7%(88/91)，其灵敏度优于单项检测AFP(X2=0.90，P=<0.05)，特异度优于单项检测SAIF(X2=6.08，P<0.05)。
, 百拇医药
2.6 SAIF与肝癌大小的关系：31例有手术及病理证实的HCC中，SAIF对大肝癌及小肝癌的检出灵敏度无差异(86.9%与75%，X2=2.73，P>0.05)。SAIF检出最大肿瘤体积为20cm×18cm×15cm(640ug/L)，最小者为3cm×2cm×2cm(440ug/L)，结果显示SAIF检测值与肿瘤大小无相关性(rs=0.082，P>0.05)。
3 讨 论
70年代，Alpert等发现肝癌及胎肝组织含有与正常肝组织铁蛋白不同的酸性成分，称为癌胚同工铁蛋白(Carcinofetal Isoferritin)[6]。以后有人用抗心、抗胎盘铁蛋白抗体对肝癌病人进行SAIF检测，由于检测方法和使用的抗体不同，阳性率在69.8%至86%之间[7-8]。
本文 采用从肝细胞肝癌组织中提取并纯化的同工铁蛋白为标准抗原，通过聚丙烯酰胺等电聚焦电泳鉴定，其pH值为4.5～4.43，较正常肝脏铁蛋白(pH5.8～4.85)明显偏酸。以之免疫动物获得的抗肝癌酸性同工铁蛋白抗体，经证实有高度的亲肝癌特性，[4]对SAIF更为敏感。本文结果显示：当SAIF≥250ug/L做为临界点时，该指标对HCC的灵敏度和特异度分别为85.46%和86.83%，准确率为86.33%。SAIF对HCC的灵敏度不低于AFP，且与AFP无关，可以认为该指标对HCC的诊断有一定的临床价值，尤其对于AFP阴性的患者，SAIF更有利于诊断。
, 百拇医药
肝癌时SAIF升高的原因尚不十分清楚，可能是多种因素互相影响，共同作用的结果。[9]这造成了SAIF与肿瘤大小无关的情况。由于一些小的亚临床肝癌即有可能引起SAIF的显著增高，故SAIF对肝癌的早期诊断是有价值的。
由于HCC的诊断的复杂性，提倡对HCC血清学标志物进行联合检测，本文对AFP和SAIF的平行检测，对HCC的灵敏度和特异度均达到90%以上，两者联合是有价值。但平行试验在提高诊断灵敏度的同时，特异度会有所降低，所以对这个联合试验的结果，在临床上应用时必须结合其它辅助检查结果加以判断，尤其应该注意与活动性肝炎加以鉴别。
1 钱洪流，王三锡.铁蛋白及其与肿瘤的关系.中华病理学杂志，1990,19:155
2 Drysdal JW. Human isoferritin in normal and diseases status. Semin Hematol , 1977,14:71
, 百拇医药
3 Worwood M.Ferritin . Blood Rev,1990,4:259
4 蔡桂英,蓝天鹤.薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳鉴定肝脏同工铁蛋白的研究.华西医科大学学报，1989，20(3):249
5 王家良主编.临床流行病学.上海:上海科学出版社,1983:43
6 Nittsu Y. Resum ferritin and malignancy. Jpn J Hema-tol,1980,21(8):1135
7 Takahashi K.Clincal significance of serum ferritin H and L subunit determinantion in various diease evaluation by enzymelinked immumosorbent assay. Hokkaido Igaku Zasshi,1994,69(4):1010
8 刘康达,汤钊猷.肝炎、肝硬化及肝癌病人血清同工铁蛋白测定.中华内科杂志,1986,25:643, 百拇医药
单位：邹 岚 郝德治 华西医科大学附一院肿瘤科(610041)；蔡桂英 魏 玲 华西医科大学基础生化教研室参考文献
关键词：血清酸性同工铁蛋白；原发性肝癌；酶联免疫吸附试验
血清酸性同工铁蛋白对原发性肝癌的诊断意义 摘 要 目的：研究血清酸性铁蛋白对原发性肝癌的诊断意义。方法：采用ELISA(双抗体夹心法)测定48例原发性肝细胞癌(HCC)，30例肝炎，28例肝硬化及33例正常人血清酸性同工铁蛋白(SAIF)水平。结果：HCC组与各组比较，均有显著差异。以SAIF≥250ug/L为临界值SAIF对HCC诊断的灵敏度为85.46%，特异度为86.81%。并且SAIF与AFP无相关性，AFP阳性与AFP阴性的患者中，SAIF灵敏度分别为90.92%和73.33%，两者差异无统计学意义。将SAIF与AFP联合检测，可将HCC检出率提高到91.6%，而特异度为96.7%。SAIF与肝癌大小无关。
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The Diagnostic Significance of Serum Acidic Isoferrintin in PatientsWith Primary Hepatocellular Carcinoma
Zou lan, Hao Dezhi,Cai Cuiying,Wei Ling
West China Medical University,Chengdu 610041
Abstract objective:To evaluate the diagnostic significance of serum acidic isoferrintin in patients with primary hepato cellular carcinoma.Methods: The leveis of serum acidic isoferritin (SAIF) in 48 cases of ptimary hepatocellular carcinoma (HCC),30 cases of hepatitis,28 cases of liver cirrihosis,as well as 33 healthy subjects were measured with ELISA (double-determinant).Results: With the cut-off point being 250ug/L, the sensitivity and specificity to HCC cases were 85.46% and 86.81% respectively. SAIF was not related to AFP in HCC cases. In AFP(+) and AFP (-) patients , the sensitivity of SAIF had no significant difference (90.92% , 73.33% ;P>0.05). The parallel test of AFP and SAIF can improve the dignosis of HCC . The valuses of SAIF were not related to the volumes of the tumors and the clinical stages. SAIF is a useful serum marker for the diagnosis of HCC.
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Key wor :Serum acidic isofrerrtin Primary hepatocellulr carcinoma Enzyme-linked immunosbent assay
铁蛋白是和许多肿瘤的发生、发展有关的重要蛋白质[1]。根据其H和L亚基的比例不同形成一组同工体，其中以H亚基为主者等电点偏酸，称为酸性同工铁蛋白(AIF)。研究表明AIF较总铁蛋白对肝癌的诊断更有意义[2]。
由于AIF与碱性铁蛋白存在结构、功能、免疫性质上的差异，[3]故可用免疫学的方法测定之。本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA，双抗体夹心法)对原发性肝细胞癌(HCC，以下简称肝癌)及两种易与其混淆的疾病患者的血清AIF(Serum AIF SAIF)进行测定，探讨SAIF在HCC患者中的水平及其对HCC诊断的临床意义。
, 百拇医药 1 对象与方法
1.1 研究对象：全部病例106例均为华西医科大学附一院1994年9月～1996年6月期间住院病人。
肝癌的诊断按1991年出版《原发性肝癌诊断治疗规范》中的诊断标准，48例患者中有31例经手术后病理证实为肝细胞癌。所有患者均进行CT或MRI检查，手术病人术中测量肿瘤。
肝炎的诊断按1990年全国病毒性肝炎学术会议制定的标准，其中22例为急性肝炎，8例为慢性活动性肝炎。
肝硬化的诊断除有相应的临床表现以外，均有两项以上的实验室或影像学诊断佐证(白球蛋白比例倒置，凝血酶原时间延长，肝脏B超或CT提示肝硬化)。
所有病人均测定血清甲胎蛋白(AFP)。
正常对照组33例均为本院健康献血员。
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1.2 主要材料与方法
1.2.1主要材料：人肝癌AIF及抗AIF血清由华西医科大学基础生化免疫室制备并提供。[4]辣根过氧化物酶为上海东风生化试剂厂生产(R Z=3)。酶标体系用过碘酸钠氧化法。固相载体为40孔聚苯乙烯塑料板。DC3022型酶标仪为南京电子管厂生产。主要药品均为分析纯。
1.2.2 主要方法：SAIF的测定用ELISA(双抗体夹心法)。血清AFP用放射免疫法测定。
SAIF值的比较用等级分组资料的秩和检验；临界值的选择用受试者工作曲线(ROC法)；[5]率的比较用X2检验；相关性检验用相关分析。
2 结 果
2.1 各组年龄、性别分布见表1。
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表1 各组年龄、性别分布
组别
总例数
男
女
年龄范围(岁)
中位年龄(岁)
正常人
33
22
11
22-47
32
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肝硬化
28
18
10
27-62
44
肝 炎
30
18
12
20-62
36
肝 癌
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37
11
23-66
45
2.2 各组SAIF分布情况见表2。
2.3 各组SAIF比较结果。
用等级分组资料秩和检验对各组SAIF值进行分析，结果显示，肝癌组SAIF值较正常人、肝硬化、肝炎组均有显著差异(P值分析小于0.01，0.01，0.05)。肝炎组较正常组及肝硬化组增高(P值<0.05)。肝硬化组与正常组无差异(P>0.05)。
表2 各组SAIF值分布情况
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例数
SAIF值(ug/L)
<50
50～
100～
250～
400～
800～
正常人
33
12
18
, 百拇医药
2
1
肝硬化
28
7
10
11
肝 炎
30
2
8
11
8
2
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1
肝 癌
48
7
15
18
18
合 计
139
21
34
31
24
20
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9
2.4 SAIF对HCC的评价指标：以SAIF≥250ug/L为阳性。[5]计算得如下结果：
灵敏度=41/48=85.46%
特异度=79/91=86.81%
准确性=(41+79)/139=86.33%
2.5 与血清AFP比较：本文48例HCC中，有AFP(+)者15例，AFP灵敏度为68.75%，特异度为97.8%。与SAIF比较，两者灵敏度无显著差异(X2=3.50，P>0.05)。SAIF在AFP(+)和AFP(-)患者中的灵敏度分别为90.92%和73.33%，两者比较无显著差异(x2=2.55，P>0.05)。对AFP和SAIF进行联合检测(平行试验，既两者均阳性和任一项为阳性时诊断HCC，两者均阴性时排除HCC)，则灵敏度为91.6%(44/48)，特异度为96.7%(88/91)，其灵敏度优于单项检测AFP(X2=0.90，P=<0.05)，特异度优于单项检测SAIF(X2=6.08，P<0.05)。
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2.6 SAIF与肝癌大小的关系：31例有手术及病理证实的HCC中，SAIF对大肝癌及小肝癌的检出灵敏度无差异(86.9%与75%，X2=2.73，P>0.05)。SAIF检出最大肿瘤体积为20cm×18cm×15cm(640ug/L)，最小者为3cm×2cm×2cm(440ug/L)，结果显示SAIF检测值与肿瘤大小无相关性(rs=0.082，P>0.05)。
3 讨 论
70年代，Alpert等发现肝癌及胎肝组织含有与正常肝组织铁蛋白不同的酸性成分，称为癌胚同工铁蛋白(Carcinofetal Isoferritin)[6]。以后有人用抗心、抗胎盘铁蛋白抗体对肝癌病人进行SAIF检测，由于检测方法和使用的抗体不同，阳性率在69.8%至86%之间[7-8]。
本文 采用从肝细胞肝癌组织中提取并纯化的同工铁蛋白为标准抗原，通过聚丙烯酰胺等电聚焦电泳鉴定，其pH值为4.5～4.43，较正常肝脏铁蛋白(pH5.8～4.85)明显偏酸。以之免疫动物获得的抗肝癌酸性同工铁蛋白抗体，经证实有高度的亲肝癌特性，[4]对SAIF更为敏感。本文结果显示：当SAIF≥250ug/L做为临界点时，该指标对HCC的灵敏度和特异度分别为85.46%和86.83%，准确率为86.33%。SAIF对HCC的灵敏度不低于AFP，且与AFP无关，可以认为该指标对HCC的诊断有一定的临床价值，尤其对于AFP阴性的患者，SAIF更有利于诊断。
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肝癌时SAIF升高的原因尚不十分清楚，可能是多种因素互相影响，共同作用的结果。[9]这造成了SAIF与肿瘤大小无关的情况。由于一些小的亚临床肝癌即有可能引起SAIF的显著增高，故SAIF对肝癌的早期诊断是有价值的。
由于HCC的诊断的复杂性，提倡对HCC血清学标志物进行联合检测，本文对AFP和SAIF的平行检测，对HCC的灵敏度和特异度均达到90%以上，两者联合是有价值。但平行试验在提高诊断灵敏度的同时，特异度会有所降低，所以对这个联合试验的结果，在临床上应用时必须结合其它辅助检查结果加以判断，尤其应该注意与活动性肝炎加以鉴别。
1 钱洪流，王三锡.铁蛋白及其与肿瘤的关系.中华病理学杂志，1990,19:155
2 Drysdal JW. Human isoferritin in normal and diseases status. Semin Hematol , 1977,14:71
, 百拇医药
3 Worwood M.Ferritin . Blood Rev,1990,4:259
4 蔡桂英,蓝天鹤.薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳鉴定肝脏同工铁蛋白的研究.华西医科大学学报，1989，20(3):249
5 王家良主编.临床流行病学.上海:上海科学出版社,1983:43
6 Nittsu Y. Resum ferritin and malignancy. Jpn J Hema-tol,1980,21(8):1135
7 Takahashi K.Clincal significance of serum ferritin H and L subunit determinantion in various diease evaluation by enzymelinked immumosorbent assay. Hokkaido Igaku Zasshi,1994,69(4):1010
8 刘康达,汤钊猷.肝炎、肝硬化及肝癌病人血清同工铁蛋白测定.中华内科杂志,1986,25:643, 百拇医药