小肠气囊肿症一例
作者：杨丽敏 孔丽丽 刘德勤
单位：110031 辽宁省邮电医院(杨丽敏、孔丽丽)；武警辽宁总队医院(刘德勤)
关键词：
中国医科990506 摘要 目的：建立一种提取小肠上皮内淋巴细胞的改良方法，对其功能进行初步研究。方法：采用机械分离法和Percoll非连续密度梯度离心法提取小肠上皮内淋巴细胞，经间接免疫荧光染色后用流式细胞仪检测表型。应用乳酸脱氢酶法检测其自然杀伤功能。结果：应用本方法可获得小鼠小肠上皮内淋巴细胞2～4×106个/只鼠，活力测定>95%。抗原表型中73.8%以上表达CD8分子，TCRγδ为43.8%。而且自然杀伤活性明显高于脾中淋巴细胞。结论：应用机械分离法和Percoll非连续密度梯度离心法提取小肠上皮内淋巴细胞的方法有效，IEL具有自然杀伤活性，Studies on Isolation Phonotype and Natural Cytotoxicity of Murine Intraepithelial Lymphocytes
, 百拇医药
Ye Wei, Zhou Zhengren, Ye Xiaohui, et al
Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, China Medical University, Shenyang, 110001
ABSTRACT Objective:This paper was to construct a method for isolating murine intraepithelial lymphocyte and analyze its main function. Methods：Murine intestinal intraepithelial lymphocyte was isolated by a mechnical technique and Percoll discontinous density gradient centrigugation. Its surface antigens were mesured by using indirect immunoflurescence. Its natural killing activity was examined by LDH methods. Results:2～4×106 IELs were acquired per mouse by using this method. Its activity >95%. Surface antigen showed that CD+8 cell was larger than 73.8% CTRγδ was 43.8%. IEL's natural killing activity was higher than PBMCs.Conclusion:This Method is effective of isolating IELs. IELs has natural killing activity.
, 百拇医药
KEY WORDS intestine; intraepithelial lymphocyte; natural killing activity; phenotype
小肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocyte, iIEL)主要见于小肠粘膜绒毛上皮细胞之间，95.2%位于上皮基底部，3.7%在上皮层，1.1%在顶端。iIEL是一群异质性的淋巴细胞。它在位置、表型、功能等方面均与外周血淋巴细胞具有独特性[1]。我们采用机械分离法和Percoll非连续密度梯度离心法提取iIEL，对其抗原表型进行鉴定，并对iIEL细胞的自然杀伤活性进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1 实验动物和传代细胞株
正常BAL B/C鼠，雌性，4～8周。普通环境下饲养。由中国医科大学实验动物部提供。YAC-1细胞株，即小鼠T淋巴瘤细胞株，由中国医科大学微生物学教研室传代保存。
, 百拇医药
1.2 抗体系列试剂
1.2.1 McAb 145-2Cll抗CE3抗体(仓鼠抗小鼠)；GK 1.5抗CD4抗体(大鼠抗小鼠)；TLB 1.5抗CD8抗体(大鼠抗小鼠)；H 57-597抗αβTCR抗体(仓鼠抗小鼠)；3A10抗γδTCR抗体(仓鼠抗小鼠)。多克隆抗体：FITC标记抗仓鼠IgG；FITC标记抗大鼠IgG。以上由日本庆应大学免疫学教研室石川博通博士惠赠。
1.2.2 淋巴细胞分离液
Ficoll-Urografin(比重1.089)分离液的配制：甲液：9%Ficoll双蒸水液。乙液：33.9%Urografin，取20 ml 60% Urografin加入双蒸水15.38 ml。
取甲、乙液按体积比约2∶1的比例混合，用1.05～1.10的密度计测定，比重不符时加入甲液或乙液调整。
, http://www.100md.com
Percoll连续密度梯度液的配制：Percoll原液：比重(1.130±0.005)，PHARMACIA，购自北京华美生物工程公司。Percoll储存液：Percoll原液与10倍体积浓缩的CMF按体积比为9∶1的比例混合，比重调至1.123 g/ml，此液为100% Percoll，4℃保存。Percoll工作液：在4℃条件下用含5%FCS的RPMI-1640液稀释100%Percoll，按体积比分别制成45%和70%的Percoll。
梯度的制备：取70%Percoll 2 ml充填在15 ml离心管底部，再取45%Percoll 2 ml轻轻重层在70%Percoll之上，可分离3 ml约含4×107个细胞悬液。
1.3 iIEL细胞的制备
1.3.1 小肠上皮层的解离[2，3]：
, 百拇医药
取3只小鼠，处死后立即剪开腹腔，剥离去除肠系膜和脂肪，切取全套小肠，每段约15cm。用冷的加抗菌素的Hanks液冲洗肠腔，纵向剖开小肠，切除肠系膜淋巴结(Peyers Patch, PP)，再用Hanks液漂洗。将小肠切成1cm左右的片段，加入15ml含2%FCS的RPMI-1640液，置37℃水浴振荡30min，取出后再用力振荡15s静置片刻后待肠片下沉，用巴氏吸管轻吸上面澄清的液体。剩余的肠片再添加含2%FCS的RPMI-1640液，37℃水浴振荡30min，移出上清，直到液体不再混浊，收集所有液体。用150目钢网过滤2次后，收集滤液，准备纯化。
1.3.2 iIEL细胞的纯化：
将上述滤液装入事先制好的尼龙毛柱中流过。尼龙毛柱制备：尼龙毛(日本产)300mg，松散均匀地充填在20ml注射器内，尼龙毛柱高度约占注射器体积的3/4，注射器细管接一段硅胶管，用以控制流速和流量，用PBS空流洗柱5min后包好，高压灭菌，使用前先用RPMI-1640液50～60ml洗柱，控制流速15ml/min，即为制备好的尼龙毛柱。将滤液连续过滤3次，用含5%FCS的RPMI-1640液50ml洗柱，收集所有滤过的液体，(浓缩制成2×107个/ml的单细胞悬液。将此单细胞悬液用500 r/min离心5min以去除混杂的上皮细胞，再经45%和70%Percoll制成的梯度分离液离心600 g，25℃，20min)，收取45%与70%界面层细胞，用含5%FCS的RPMI-1640液洗3次，备用。取少量细胞悬液进行台盼蓝染色和镜检以观察活力且计数。
, 百拇医药
1.4 外周血单个核细胞(PBML)和脾淋巴细胞(SPL)的制备
摘取小鼠眼球，留取眼眶血，抗凝处理，即为外周血。将鼠颈椎脱臼处死。取脾脏放入盛有Hanks液的平皿中，在100目钢网上研磨，收得滤过的细胞悬液即为脾细胞。分别将稀释两部的外周血和脾细胞重层于比重为1.089g/ml的Ficoll-Urografin之上，离心20min(2000r/min，4℃)，收取界面层细胞，用Hanks液洗2次，再用含5%FCS的RPMI-1640液重新悬起细胞，备用。取少量细胞悬液进行台盼蓝染色以观察活力。
1.5 免疫荧光染色
将待测细胞悬液(iIEL,SPL,PBML)用0.1%NaN3-PBS调至浓度为1×107个/ml。各取100μl细胞悬液分别与McAb按适当稀释度等体积混合，设阴性对照，以PBS代替McAb，置4℃作用45min(每10min混合1次)，洗细胞2次，吸弃上清，再加入相应的FITC标记的多克隆抗体，置4℃避光作用45min，洗细胞2次。染好的细胞加1%聚甲醛1.5ml/tp ,FCM检测。
, 百拇医药
1.6 自然杀伤活性的测定：乳酸脱氢酶(LDH)释放法[4，5]
采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法，靶细胞为Yac-l，效应细胞分别为iIEL和SPL，效靶比为50∶1，效靶作用时间为4h，上清液与LDH底物作用时间为1h，酶标检测仪测定490nm OD值，计算其自然杀伤活性。
2 结果
2.1 iIEL的分离和纯化
经过孵育后获得的细胞悬液主要有iIEL、上皮细胞以及一些死细胞，另外混有组织残渣及粘液，经过连续3次的尼龙毛柱的分离滤过，可以除去大部分的组织残渣和细胞团块进而形成单细胞悬液，再经Percoll的分离，每只鼠得到活的iIEL 2×106～4×106，活力测定>95%。
, 百拇医药 2.2 iIEL的表型特征
从正常BALB/C鼠小肠提取的iIEL，经间接免疫荧光染色大约85%(85.1±2.8)的iIEL是CD+3，74%(73.8±2.7)是CD+8，只有14%(13.5±2.3)的iIEL是CD+4，CD+4与CD+8比值大约为0.2。
αβTCR和γδTCR的表达：我们用FCM分析iIEL、SPL、PBML三种不同来源的淋巴细胞中αβTCR和γδTCR的表达。结果是：αβTCR和γδTCR细胞分别占iIEL的40.6%和43.8%，SPL和PBML中以αβTCR细胞为主，iIEL中γδTCR细胞的比例高于SPL、PBML中γδTCR细胞的比例。
, http://www.100md.com 2.3 NK活性的测定
选用普通环境条件下饲养的6周龄BAL B/C鼠，首先用LDH法测定小肠iIEL和SPL的NK活性，SPL的细胞毒活性为(28.6±2.7)%(n=12)。iIEL的细胞毒活性为(35.9±3.0)%(n=12)。iIEL表现出比SPL高的NK活性(P<0.05)。
3 讨论
近年来，国外学者建立了一些从鼠小肠制备iIEL的方法[6～8]。由于肠粘膜淋巴细胞可以来自上皮层和固有层等不同组织部位，而且95%的iIEL分布在上皮基底部，上方为两个上皮细胞的紧密连接，下方为基底膜，因而为了制备数量大、纯度高的小肠iIEL需要考虑两方面的问题。一方面，为了完整体现iIEL的性质，应尽可能使上皮层完全解离以获得全部的iIEL；另一方面，要避免小肠内部其它细胞尤其是固有层淋巴细胞的混入。我们参照Davies[2]介绍的机械法，在用振荡水浴孵育小肠片段的过程中，未使用磁力搅拌棒，也未加入酶和裂解剂。我们认为这样可以避免细胞的破损，有利于细胞功能活性保持，同时有效的控制了固有层细胞的混入。
, http://www.100md.com
Percoll是一种新型的密度梯度离心分离剂，无毒、无刺激性，用于iIEL的纯化效果优于Ficoll分离液。我们利用Percoll制成的双层密度梯度分离液除去了绝大多数与iIEL混杂在一起的其他细胞达到了纯化的目的。
有报道认为，iIEL中很少或完全没有B细胞的存在[9]。多次尼龙毛柱的滤过不会造成iIEL中T细胞组分的丢失，不影响T细胞亚群的比例。据此我们将过滤的次数增加到3次，并保证滤柱的充分洗脱，分离的效果得到明显改善，每只鼠可获得活的iIEL2×106～4×106个，活力达95%以上。
许多证据表明了鼠小肠iIEL膜表面抗原表达的独特性。几乎所有的iIEL含有T细胞抗原(CD+3)，CD+8的IEL达75%或更多，只有5%～15%的iIEL是CD+4。而外周血、肠系膜淋巴组织、固有层淋巴细胞中主要是CD+4T细胞。我们提取的iIEL中有85%是CD+3T细胞，CD+8T细胞占74%，含有很少CD+4T细胞(14%)，结合文献报道，我们提取的iIEL具有与文献所述相一致的表型特征[9]，从而证明我们制备小肠iIEL方法的可靠性。
, 百拇医药
对于iIEL功能上的研究表明，它是具有多种功能的细胞群，大约25%人类iIEL，40%～45%鼠类iIEL有与细胞毒性T细胞相似的胞浆颗粒，如硫酸粘多糖、丝氨酸酯酶、穿孔素等物质，均具有很强的细胞毒作用[1]。因此iIEL可以通过自发细胞毒作用及抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用发挥杀伤活性。我们应用乳酸脱氢酶释放法检测出正常BAL B/C鼠小肠iIEL具有高于SPL的NK活性，初步证明了iIEL有与文献相一致的功能特性。
参考文献
1 赖燕来.有关小肠粘膜上皮内淋巴细胞的研究进展.国外医学免疫分册，1995，4：207—209
2 Davies MDJ, Parrott DMV. Preparation and purification of lumpjocutes from the epithelium and lamina propria of murine small intestion. GUT, 1981,22:481_484
, http://www.100md.com
3 Mosley RL, Klein JR. A rapid method for isolating murine intestine intraepithelial lymphocytes with high yield and pruity. J Immunol method, 1992,156:19
4 Carol K, Callewert DM, An enzyme-release assay for natural cytotoxicity. J Immunol method, 1983,64:313_314
5 曹艳英，杨晓临，周正任，等.检测IL-2活性的新方法—LDH改良法.中华微生物学和免疫学杂志，1992,12(3)：192—194
6 Tagliabue A, Befu AD. Characteristics of natural killer cells in the murine intestinal epithelium and lamina propria. J Exp Med, 1982,155:1785_1787
, 百拇医药
7 Leventon GS, Kulkarni SS, Meiserich ML, et al. Isolation of small bowel intraepithelial lymphocytes. J Immunol Method, 1983,63:35_37
8 Van der heijden PJ, Stok W. Improved procedure for the isolation of functionally active lymphoid cells from the murine intestine. J Immunol Method, 1987,103:161_163
9 Taguchi T, Aicher WK, Fujihashi K. Novel function for intestinal intraepithelial lymphocyte. Journal of Immunol, 1991,147:3736_3738
1998-09-03收稿, 百拇医药
单位：110031 辽宁省邮电医院(杨丽敏、孔丽丽)；武警辽宁总队医院(刘德勤)
关键词：
中国医科990506 摘要 目的：建立一种提取小肠上皮内淋巴细胞的改良方法，对其功能进行初步研究。方法：采用机械分离法和Percoll非连续密度梯度离心法提取小肠上皮内淋巴细胞，经间接免疫荧光染色后用流式细胞仪检测表型。应用乳酸脱氢酶法检测其自然杀伤功能。结果：应用本方法可获得小鼠小肠上皮内淋巴细胞2～4×106个/只鼠，活力测定>95%。抗原表型中73.8%以上表达CD8分子，TCRγδ为43.8%。而且自然杀伤活性明显高于脾中淋巴细胞。结论：应用机械分离法和Percoll非连续密度梯度离心法提取小肠上皮内淋巴细胞的方法有效，IEL具有自然杀伤活性，Studies on Isolation Phonotype and Natural Cytotoxicity of Murine Intraepithelial Lymphocytes
, 百拇医药
Ye Wei, Zhou Zhengren, Ye Xiaohui, et al
Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, China Medical University, Shenyang, 110001
ABSTRACT Objective:This paper was to construct a method for isolating murine intraepithelial lymphocyte and analyze its main function. Methods：Murine intestinal intraepithelial lymphocyte was isolated by a mechnical technique and Percoll discontinous density gradient centrigugation. Its surface antigens were mesured by using indirect immunoflurescence. Its natural killing activity was examined by LDH methods. Results:2～4×106 IELs were acquired per mouse by using this method. Its activity >95%. Surface antigen showed that CD+8 cell was larger than 73.8% CTRγδ was 43.8%. IEL's natural killing activity was higher than PBMCs.Conclusion:This Method is effective of isolating IELs. IELs has natural killing activity.
, 百拇医药
KEY WORDS intestine; intraepithelial lymphocyte; natural killing activity; phenotype
小肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocyte, iIEL)主要见于小肠粘膜绒毛上皮细胞之间，95.2%位于上皮基底部，3.7%在上皮层，1.1%在顶端。iIEL是一群异质性的淋巴细胞。它在位置、表型、功能等方面均与外周血淋巴细胞具有独特性[1]。我们采用机械分离法和Percoll非连续密度梯度离心法提取iIEL，对其抗原表型进行鉴定，并对iIEL细胞的自然杀伤活性进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1 实验动物和传代细胞株
正常BAL B/C鼠，雌性，4～8周。普通环境下饲养。由中国医科大学实验动物部提供。YAC-1细胞株，即小鼠T淋巴瘤细胞株，由中国医科大学微生物学教研室传代保存。
, 百拇医药
1.2 抗体系列试剂
1.2.1 McAb 145-2Cll抗CE3抗体(仓鼠抗小鼠)；GK 1.5抗CD4抗体(大鼠抗小鼠)；TLB 1.5抗CD8抗体(大鼠抗小鼠)；H 57-597抗αβTCR抗体(仓鼠抗小鼠)；3A10抗γδTCR抗体(仓鼠抗小鼠)。多克隆抗体：FITC标记抗仓鼠IgG；FITC标记抗大鼠IgG。以上由日本庆应大学免疫学教研室石川博通博士惠赠。
1.2.2 淋巴细胞分离液
Ficoll-Urografin(比重1.089)分离液的配制：甲液：9%Ficoll双蒸水液。乙液：33.9%Urografin，取20 ml 60% Urografin加入双蒸水15.38 ml。
取甲、乙液按体积比约2∶1的比例混合，用1.05～1.10的密度计测定，比重不符时加入甲液或乙液调整。
, http://www.100md.com
Percoll连续密度梯度液的配制：Percoll原液：比重(1.130±0.005)，PHARMACIA，购自北京华美生物工程公司。Percoll储存液：Percoll原液与10倍体积浓缩的CMF按体积比为9∶1的比例混合，比重调至1.123 g/ml，此液为100% Percoll，4℃保存。Percoll工作液：在4℃条件下用含5%FCS的RPMI-1640液稀释100%Percoll，按体积比分别制成45%和70%的Percoll。
梯度的制备：取70%Percoll 2 ml充填在15 ml离心管底部，再取45%Percoll 2 ml轻轻重层在70%Percoll之上，可分离3 ml约含4×107个细胞悬液。
1.3 iIEL细胞的制备
1.3.1 小肠上皮层的解离[2，3]：
, 百拇医药
取3只小鼠，处死后立即剪开腹腔，剥离去除肠系膜和脂肪，切取全套小肠，每段约15cm。用冷的加抗菌素的Hanks液冲洗肠腔，纵向剖开小肠，切除肠系膜淋巴结(Peyers Patch, PP)，再用Hanks液漂洗。将小肠切成1cm左右的片段，加入15ml含2%FCS的RPMI-1640液，置37℃水浴振荡30min，取出后再用力振荡15s静置片刻后待肠片下沉，用巴氏吸管轻吸上面澄清的液体。剩余的肠片再添加含2%FCS的RPMI-1640液，37℃水浴振荡30min，移出上清，直到液体不再混浊，收集所有液体。用150目钢网过滤2次后，收集滤液，准备纯化。
1.3.2 iIEL细胞的纯化：
将上述滤液装入事先制好的尼龙毛柱中流过。尼龙毛柱制备：尼龙毛(日本产)300mg，松散均匀地充填在20ml注射器内，尼龙毛柱高度约占注射器体积的3/4，注射器细管接一段硅胶管，用以控制流速和流量，用PBS空流洗柱5min后包好，高压灭菌，使用前先用RPMI-1640液50～60ml洗柱，控制流速15ml/min，即为制备好的尼龙毛柱。将滤液连续过滤3次，用含5%FCS的RPMI-1640液50ml洗柱，收集所有滤过的液体，(浓缩制成2×107个/ml的单细胞悬液。将此单细胞悬液用500 r/min离心5min以去除混杂的上皮细胞，再经45%和70%Percoll制成的梯度分离液离心600 g，25℃，20min)，收取45%与70%界面层细胞，用含5%FCS的RPMI-1640液洗3次，备用。取少量细胞悬液进行台盼蓝染色和镜检以观察活力且计数。
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1.4 外周血单个核细胞(PBML)和脾淋巴细胞(SPL)的制备
摘取小鼠眼球，留取眼眶血，抗凝处理，即为外周血。将鼠颈椎脱臼处死。取脾脏放入盛有Hanks液的平皿中，在100目钢网上研磨，收得滤过的细胞悬液即为脾细胞。分别将稀释两部的外周血和脾细胞重层于比重为1.089g/ml的Ficoll-Urografin之上，离心20min(2000r/min，4℃)，收取界面层细胞，用Hanks液洗2次，再用含5%FCS的RPMI-1640液重新悬起细胞，备用。取少量细胞悬液进行台盼蓝染色以观察活力。
1.5 免疫荧光染色
将待测细胞悬液(iIEL,SPL,PBML)用0.1%NaN3-PBS调至浓度为1×107个/ml。各取100μl细胞悬液分别与McAb按适当稀释度等体积混合，设阴性对照，以PBS代替McAb，置4℃作用45min(每10min混合1次)，洗细胞2次，吸弃上清，再加入相应的FITC标记的多克隆抗体，置4℃避光作用45min，洗细胞2次。染好的细胞加1%聚甲醛1.5ml/tp ,FCM检测。
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1.6 自然杀伤活性的测定：乳酸脱氢酶(LDH)释放法[4，5]
采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法，靶细胞为Yac-l，效应细胞分别为iIEL和SPL，效靶比为50∶1，效靶作用时间为4h，上清液与LDH底物作用时间为1h，酶标检测仪测定490nm OD值，计算其自然杀伤活性。
2 结果
2.1 iIEL的分离和纯化
经过孵育后获得的细胞悬液主要有iIEL、上皮细胞以及一些死细胞，另外混有组织残渣及粘液，经过连续3次的尼龙毛柱的分离滤过，可以除去大部分的组织残渣和细胞团块进而形成单细胞悬液，再经Percoll的分离，每只鼠得到活的iIEL 2×106～4×106，活力测定>95%。
, 百拇医药 2.2 iIEL的表型特征
从正常BALB/C鼠小肠提取的iIEL，经间接免疫荧光染色大约85%(85.1±2.8)的iIEL是CD+3，74%(73.8±2.7)是CD+8，只有14%(13.5±2.3)的iIEL是CD+4，CD+4与CD+8比值大约为0.2。
αβTCR和γδTCR的表达：我们用FCM分析iIEL、SPL、PBML三种不同来源的淋巴细胞中αβTCR和γδTCR的表达。结果是：αβTCR和γδTCR细胞分别占iIEL的40.6%和43.8%，SPL和PBML中以αβTCR细胞为主，iIEL中γδTCR细胞的比例高于SPL、PBML中γδTCR细胞的比例。
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选用普通环境条件下饲养的6周龄BAL B/C鼠，首先用LDH法测定小肠iIEL和SPL的NK活性，SPL的细胞毒活性为(28.6±2.7)%(n=12)。iIEL的细胞毒活性为(35.9±3.0)%(n=12)。iIEL表现出比SPL高的NK活性(P<0.05)。
3 讨论
近年来，国外学者建立了一些从鼠小肠制备iIEL的方法[6～8]。由于肠粘膜淋巴细胞可以来自上皮层和固有层等不同组织部位，而且95%的iIEL分布在上皮基底部，上方为两个上皮细胞的紧密连接，下方为基底膜，因而为了制备数量大、纯度高的小肠iIEL需要考虑两方面的问题。一方面，为了完整体现iIEL的性质，应尽可能使上皮层完全解离以获得全部的iIEL；另一方面，要避免小肠内部其它细胞尤其是固有层淋巴细胞的混入。我们参照Davies[2]介绍的机械法，在用振荡水浴孵育小肠片段的过程中，未使用磁力搅拌棒，也未加入酶和裂解剂。我们认为这样可以避免细胞的破损，有利于细胞功能活性保持，同时有效的控制了固有层细胞的混入。
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Percoll是一种新型的密度梯度离心分离剂，无毒、无刺激性，用于iIEL的纯化效果优于Ficoll分离液。我们利用Percoll制成的双层密度梯度分离液除去了绝大多数与iIEL混杂在一起的其他细胞达到了纯化的目的。
有报道认为，iIEL中很少或完全没有B细胞的存在[9]。多次尼龙毛柱的滤过不会造成iIEL中T细胞组分的丢失，不影响T细胞亚群的比例。据此我们将过滤的次数增加到3次，并保证滤柱的充分洗脱，分离的效果得到明显改善，每只鼠可获得活的iIEL2×106～4×106个，活力达95%以上。
许多证据表明了鼠小肠iIEL膜表面抗原表达的独特性。几乎所有的iIEL含有T细胞抗原(CD+3)，CD+8的IEL达75%或更多，只有5%～15%的iIEL是CD+4。而外周血、肠系膜淋巴组织、固有层淋巴细胞中主要是CD+4T细胞。我们提取的iIEL中有85%是CD+3T细胞，CD+8T细胞占74%，含有很少CD+4T细胞(14%)，结合文献报道，我们提取的iIEL具有与文献所述相一致的表型特征[9]，从而证明我们制备小肠iIEL方法的可靠性。
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对于iIEL功能上的研究表明，它是具有多种功能的细胞群，大约25%人类iIEL，40%～45%鼠类iIEL有与细胞毒性T细胞相似的胞浆颗粒，如硫酸粘多糖、丝氨酸酯酶、穿孔素等物质，均具有很强的细胞毒作用[1]。因此iIEL可以通过自发细胞毒作用及抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用发挥杀伤活性。我们应用乳酸脱氢酶释放法检测出正常BAL B/C鼠小肠iIEL具有高于SPL的NK活性，初步证明了iIEL有与文献相一致的功能特性。
参考文献
1 赖燕来.有关小肠粘膜上皮内淋巴细胞的研究进展.国外医学免疫分册，1995，4：207—209
2 Davies MDJ, Parrott DMV. Preparation and purification of lumpjocutes from the epithelium and lamina propria of murine small intestion. GUT, 1981,22:481_484
, http://www.100md.com
3 Mosley RL, Klein JR. A rapid method for isolating murine intestine intraepithelial lymphocytes with high yield and pruity. J Immunol method, 1992,156:19
4 Carol K, Callewert DM, An enzyme-release assay for natural cytotoxicity. J Immunol method, 1983,64:313_314
5 曹艳英，杨晓临，周正任，等.检测IL-2活性的新方法—LDH改良法.中华微生物学和免疫学杂志，1992,12(3)：192—194
6 Tagliabue A, Befu AD. Characteristics of natural killer cells in the murine intestinal epithelium and lamina propria. J Exp Med, 1982,155:1785_1787
, 百拇医药
7 Leventon GS, Kulkarni SS, Meiserich ML, et al. Isolation of small bowel intraepithelial lymphocytes. J Immunol Method, 1983,63:35_37
8 Van der heijden PJ, Stok W. Improved procedure for the isolation of functionally active lymphoid cells from the murine intestine. J Immunol Method, 1987,103:161_163
9 Taguchi T, Aicher WK, Fujihashi K. Novel function for intestinal intraepithelial lymphocyte. Journal of Immunol, 1991,147:3736_3738
1998-09-03收稿, 百拇医药