消瘤丸的免疫调节作用
作者：郭鸣放 孟祥琴 谢彦华 宋建徽 李国义 郭芳 王丽莉 梁国
单位：河北医科大学基础医学院药理学教研室石家庄050017
关键词：消瘤丸/药物作用；免疫调节/药物疗效；小鼠
河北医科大学学报990515 摘 要 目的 探讨消瘤丸对荷瘤小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫作用。方法 利用碳粒廓清试验、二硝基氟苯法和血清溶血素法,观察消瘤丸对荷瘤小鼠吞噬细胞的吞噬功能、迟发型变态反应和抗体产生的作用。结果 消瘤丸灌胃给药,每日1次,连续2周,10 g/kg组荷瘤小鼠碳末吞噬指数显著升高(P<0.05);5和10 g/kg组荷瘤小鼠迟发型变态反应增强(P<0.01),半数溶血素明显升高(P<0.05)。结论 消瘤丸可增强小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能。
中图号 R979.1
, http://www.100md.com
THE IMMUNOMODULATING ACTIVITY OF XIAO-LIU-WAN
Guo Mingfang Meng Xiangqin Xie Yanhua Song Jianhui
Li Guoyi Guo Fang Wang Lili Liang Guo
Department of Pharmacology, the School of Basic Medical Sciences,Hebei Medical University(Shijiazhuang 050017)
ABSTRACT Objective To observe the regulatory effects of Xiao-Liu-Wan (XLW) on the reactions of nonspecific immunity,cellular immunity and humoral immunity in S180 bearing mice.Methods It studied the immunomodulating activity of XLW in S180 bearing mice by carbon clearance test,delayed type hypersensitive reaction (DTHR) induced by DNFB and hemolysin antibody test.Results In tumor-bearing mice,XLW 10 g/(kg . d)(for 14 d)significantly increased the carbon phagocytable index, 5 g/(kg . d) and 10 g/(kg . d) enhanced the DTHR and increased the content of serum hemolysin antibody markedly.Conclusion XLW enhances the nonspecific immunity,cellular immunity and humoral immunity in S180 bearing mice.
, 百拇医药
MeSH Xiao-Liu-Wan/drug eff;immunomodulation/drug ther;mice
消瘤丸为河北省巨鹿县中医肿瘤医院梁秀清老中医的经验处方,含有蚤休、光慈菇等中药,具有补气养血、清热解毒、活血化瘀和软坚散结等功能,香卫红等[1]已证实消瘤丸对大鼠子宫肌瘤有治疗作用。光慈菇的鳞茎中提取的有效成分之一秋水仙碱具有抗肿瘤与抗痛风的作用,蚤休“补血行气,壮精益肾,能消百毒”(《生草药性备要》)。为了探讨消瘤丸抗肿瘤作用机理,本文对其免疫调节作用进行了研究。
1 材料与方法
1.1 药物:消瘤丸,浅黄色粉末,由河北省巨鹿县中医肿瘤医院提供,临用时用水溶解制成混悬液。阳性对照药贞芪扶正冲剂,甘肃省定西制药厂产品,批号940430。
1.2 实验动物:昆明种小鼠,体质量20±2 g,雌雄各半,由河北省实验动物中心提供。
, 百拇医药
1.3 方法
1.3.1 对荷瘤小鼠非特异性免疫功能的影响:小鼠50只,随机分为5组,每组10只。消瘤丸分3个剂量组:2.5、5、和10 g/kg,阳性对照组给予贞芪扶正冲剂6 g/kg,对照组给予水。以上各组均灌胃给药,灌胃容积均为0.02 ml/(g*d),连续14 d。于给药第8 d,每鼠腋下接种S180肿瘤细胞2×106/0.2 ml。于末次给药后1h,尾静脉注射印度墨汁0.1 mg/kg,于注射后2 min和8 min分别从小鼠眼底静脉丛取血20 μl,加入0.1 %碳酸钠溶液2 ml中摇匀。用722分光光度计测定680 nm下光密度值(OD),分别以OD2和OD8表示2 min和8 min取样的光密度,以空白小鼠血与0.1%碳酸钠溶液混合液调零点。最后处死小鼠,取脾脏和肝脏称取质量,按下列公式计算廓清指数K和吞噬指数α值[2，3]。
, 百拇医药
1.3.2 对荷瘤小鼠迟发型变态反应的影响[4，8]:依上述方法将小鼠分组、给药、接种S180肿瘤细胞。给药后第10 d腹部去毛约3 cm×3 cm,在去毛部位涂1 %二硝基氟苯50 μl,于给药后第14 d以1 %二硝基氟苯10μl涂右耳,24 h后处死小鼠,用8 mm打孔器打取两耳相同部位的耳片,称质量,以左右耳片质量之差为肿胀度。
1.3.3 对荷瘤小鼠体液免疫的影响:同上法将小鼠分组、给药、接种。于给药后第10 d各组均腹腔注射20 %压积绵羊红细胞0.2 ml/只。末次给药后1 h,从小鼠眼底静脉丛取血,制备血清,取血清稀释,以稀释血清1 ml加5 %绵羊红细胞(SRBC)0.5 ml及1∶10稀释的豚鼠血清1 ml,37 ℃温育20 min,按比色法测定血清溶血素含量,并计算出各组的半数溶血值HC50[5，8]。
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2 结果
2.1 对荷瘤小鼠非特异性免疫功能的影响:消瘤丸5和10 g/kg组的吞噬指数(5.36±1.03与5.39±0.60)均高于对照组(4.62±0.81),消瘤丸10 g/kg组提高荷瘤小鼠碳粒吞噬指数的作用具有显著性( P<0.05),见表1。阳性对照药贞芪扶正冲剂也具有显著促进碳粒吞噬的作用。
表1 消瘤丸对荷瘤(S180)小鼠碳粒廓清的影响
Table 1 The effect of XLW on the carbon clearance in
S180-bearing mice
(n=10,
±s)
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Groups
Dose(g/kg)
Phagocytable index(α)
Control
-
4.62±0.81
XLW
2.5
4.28±0.81
5.0
5.36±1.03
10.0
, 百拇医药
5.39±0.60*
ZQFZCJ
6.0
5.93±0.93**
* P<0.05 ** P<0.01 vs control by t test
XLW:Xiao-Liu-Wan ZQFZCJ:Zhen Qi Fu Zheng Chong Ji
2.2 对荷瘤小鼠迟发型变态反应的影响:消瘤丸5和10 g/kg组小鼠耳肿胀度分别比对照组提高4.3倍与5.6倍,显著增加荷瘤小鼠耳肿胀度(P<0.01),见表2;阳性对照药贞芪扶正冲剂也明显增加二硝基氟苯所致小鼠的迟发型变态反应。
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表2 消瘤丸对荷瘤(S180)小鼠迟发型变态反应的影响
Table 2 The effect of XLW on the contact dermatitis in
S180-bearing mice induced by dinitrofluorobenzene
(n=10,±s)
Groups
Dose(g/kg)
Mass of ears(m/mg)
Control
, http://www.100md.com
-
0.56±0.44
XLW
2.5
0.55±0.63
5.0
2.43±1.69**
10.0
3.14±1.64**
ZQFZCJ
6.0
1.93±1.18**
, 百拇医药
** P<0.01 vs Control by t test
XLW:Xiao-Liu-Wan ZQFZCJ:Zhen Qi Fu Zheng Chong Ji
2.3 对荷瘤小鼠体液免疫的影响:消瘤丸2.5、5和10 g/kg组的血中溶血素含量(以HC50反映)比对照组分别提高122.0 %、176.8 %和175.7 %,5和10 g/kg组可显著提高半数溶血值HC50(P<0.05),见表3,阳性对照药贞芪扶正冲剂亦可显著提高HC50(P<0.01)。
表3 消瘤丸对荷瘤(S180)小鼠溶血素生成的影响
Table 3 The effect of XLW on the formation of serum
, 百拇医药
hemolysin in S180-bearing mice
(n=10,±s)
Groups
Dose(g/kg)
HC50
Control
-
97.6±59.5
XLW
2.5
, 百拇医药
119.9±58.4
5.0
172.6±70.2*
10.0
171.5±61.4*
ZQFZCJ
6.0
227.5±66.9**
* P<0.05 ** P<0.01 vs control by t test
XLW:Xiao-Liu-Wan ZQFZCJ:Zhen Qi Fu Zheng Chong Ji
, http://www.100md.com
3 讨论
鉴于恶性肿瘤患者免疫功能低下的特点,近年来提出改善肿瘤患者免疫功能状态,促进机体免疫功能,采用辅助治疗方法以达到防治肿瘤的目的。调节机体免疫功能的药物可作用于机体免疫反应的不同环节或不同细胞,复方贞芪汤对小鼠的单核巨噬细胞系统的非特异性吞噬功能、特异性体液免疫或细胞免疫均有促进作用[6]。碳粒廓清实验反映肝脏的枯否细胞和脾脏巨噬细胞的吞噬功能,免疫增强剂复合洋参多糖有明显增加碳末吞噬指数,表明对单核巨噬细胞系统吞噬功能有明显促进作用[7],消瘤丸同样具有此种作用。迟发型变态反应是依赖T细胞的反应,其主要特征是致敏机体,在抗原攻击部位出现迟发性炎症反应,在移植物排斥反应、自身免疫病和肿瘤免疫方面起着关键作用。SRBC初次免疫机体时,最早产生IgM,4～5 d后即达到高峰，其溶血性很强，与少量SRBC一起体外温育,在补体参与下,产生溶血反应,用分光光度计测定溶血程度可反映抗体水平。本实验的结果表明,消瘤丸有类似于养正合剂的作用[8],能显著增强荷瘤小鼠迟发型变态反应和小鼠半数溶血素值,说 明消瘤丸具有明显的扶正作用,可增强小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能,从而增强机体的防护能力,有利于对抗肿瘤。
, 百拇医药
参考文献
1.香卫红，谭光明，雷兰顿，等.消瘤丸对雌性激素负荷大鼠子宫肌层影响的实验研究.中医杂志，1998，39(6)：364
2.孙文娟,睢大员,于晓风,等.吉林枸杞糖蛋白的初步药理研究.白求恩医科大学学报,1996,22(5):486
3.徐叔云,卞如濂,陈修,等.药理实验方法学, 北京:人民卫生出版社.1991:1233,1226
4.王家葵,郑军,沈映君.太子参总提取物对环磷酰胺处理动物免疫功能及胸腺、脾脏核酸含量的影响.中药药理与临床,1996,12(6)16
5.万金志,罗上武,张均倡,等.肝丹对小鼠免疫功能影响的实验研究.中草药,1998,29(9):614
6.章新奇,刘淑俊,宛风玲,等.贞芪汤加味合并化疗对Ⅲ期多发性骨髓瘤的治疗及其T细胞亚群影响的研究.实用中西医结合杂志,1992,5(10):604
7.郑辉,赵乃坤,鲍琰,等.复合洋参多糖免疫增强剂对荷瘤小鼠免疫功能的影响.中药药理与临床,1992,8(特辑):8
8.曹于平,李明,柳晓泉,等.养正合剂对实验性肿瘤的治疗作用.中国药科大学学报,1994,25(6):353
收稿日期:1998-12-14, 百拇医药
单位：河北医科大学基础医学院药理学教研室石家庄050017
关键词：消瘤丸/药物作用；免疫调节/药物疗效；小鼠
河北医科大学学报990515 摘 要 目的 探讨消瘤丸对荷瘤小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫作用。方法 利用碳粒廓清试验、二硝基氟苯法和血清溶血素法,观察消瘤丸对荷瘤小鼠吞噬细胞的吞噬功能、迟发型变态反应和抗体产生的作用。结果 消瘤丸灌胃给药,每日1次,连续2周,10 g/kg组荷瘤小鼠碳末吞噬指数显著升高(P<0.05);5和10 g/kg组荷瘤小鼠迟发型变态反应增强(P<0.01),半数溶血素明显升高(P<0.05)。结论 消瘤丸可增强小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能。
中图号 R979.1
, http://www.100md.com
THE IMMUNOMODULATING ACTIVITY OF XIAO-LIU-WAN
Guo Mingfang Meng Xiangqin Xie Yanhua Song Jianhui
Li Guoyi Guo Fang Wang Lili Liang Guo
Department of Pharmacology, the School of Basic Medical Sciences,Hebei Medical University(Shijiazhuang 050017)
ABSTRACT Objective To observe the regulatory effects of Xiao-Liu-Wan (XLW) on the reactions of nonspecific immunity,cellular immunity and humoral immunity in S180 bearing mice.Methods It studied the immunomodulating activity of XLW in S180 bearing mice by carbon clearance test,delayed type hypersensitive reaction (DTHR) induced by DNFB and hemolysin antibody test.Results In tumor-bearing mice,XLW 10 g/(kg . d)(for 14 d)significantly increased the carbon phagocytable index, 5 g/(kg . d) and 10 g/(kg . d) enhanced the DTHR and increased the content of serum hemolysin antibody markedly.Conclusion XLW enhances the nonspecific immunity,cellular immunity and humoral immunity in S180 bearing mice.
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MeSH Xiao-Liu-Wan/drug eff;immunomodulation/drug ther;mice
消瘤丸为河北省巨鹿县中医肿瘤医院梁秀清老中医的经验处方,含有蚤休、光慈菇等中药,具有补气养血、清热解毒、活血化瘀和软坚散结等功能,香卫红等[1]已证实消瘤丸对大鼠子宫肌瘤有治疗作用。光慈菇的鳞茎中提取的有效成分之一秋水仙碱具有抗肿瘤与抗痛风的作用,蚤休“补血行气,壮精益肾,能消百毒”(《生草药性备要》)。为了探讨消瘤丸抗肿瘤作用机理,本文对其免疫调节作用进行了研究。
1 材料与方法
1.1 药物:消瘤丸,浅黄色粉末,由河北省巨鹿县中医肿瘤医院提供,临用时用水溶解制成混悬液。阳性对照药贞芪扶正冲剂,甘肃省定西制药厂产品,批号940430。
1.2 实验动物:昆明种小鼠,体质量20±2 g,雌雄各半,由河北省实验动物中心提供。
, 百拇医药
1.3 方法
1.3.1 对荷瘤小鼠非特异性免疫功能的影响:小鼠50只,随机分为5组,每组10只。消瘤丸分3个剂量组:2.5、5、和10 g/kg,阳性对照组给予贞芪扶正冲剂6 g/kg,对照组给予水。以上各组均灌胃给药,灌胃容积均为0.02 ml/(g*d),连续14 d。于给药第8 d,每鼠腋下接种S180肿瘤细胞2×106/0.2 ml。于末次给药后1h,尾静脉注射印度墨汁0.1 mg/kg,于注射后2 min和8 min分别从小鼠眼底静脉丛取血20 μl,加入0.1 %碳酸钠溶液2 ml中摇匀。用722分光光度计测定680 nm下光密度值(OD),分别以OD2和OD8表示2 min和8 min取样的光密度,以空白小鼠血与0.1%碳酸钠溶液混合液调零点。最后处死小鼠,取脾脏和肝脏称取质量,按下列公式计算廓清指数K和吞噬指数α值[2，3]。
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1.3.2 对荷瘤小鼠迟发型变态反应的影响[4，8]:依上述方法将小鼠分组、给药、接种S180肿瘤细胞。给药后第10 d腹部去毛约3 cm×3 cm,在去毛部位涂1 %二硝基氟苯50 μl,于给药后第14 d以1 %二硝基氟苯10μl涂右耳,24 h后处死小鼠,用8 mm打孔器打取两耳相同部位的耳片,称质量,以左右耳片质量之差为肿胀度。
1.3.3 对荷瘤小鼠体液免疫的影响:同上法将小鼠分组、给药、接种。于给药后第10 d各组均腹腔注射20 %压积绵羊红细胞0.2 ml/只。末次给药后1 h,从小鼠眼底静脉丛取血,制备血清,取血清稀释,以稀释血清1 ml加5 %绵羊红细胞(SRBC)0.5 ml及1∶10稀释的豚鼠血清1 ml,37 ℃温育20 min,按比色法测定血清溶血素含量,并计算出各组的半数溶血值HC50[5，8]。
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2 结果
2.1 对荷瘤小鼠非特异性免疫功能的影响:消瘤丸5和10 g/kg组的吞噬指数(5.36±1.03与5.39±0.60)均高于对照组(4.62±0.81),消瘤丸10 g/kg组提高荷瘤小鼠碳粒吞噬指数的作用具有显著性( P<0.05),见表1。阳性对照药贞芪扶正冲剂也具有显著促进碳粒吞噬的作用。
表1 消瘤丸对荷瘤(S180)小鼠碳粒廓清的影响
Table 1 The effect of XLW on the carbon clearance in
S180-bearing mice
(n=10,
±s), http://www.100md.com
Groups
Dose(g/kg)
Phagocytable index(α)
Control
-
4.62±0.81
XLW
2.5
4.28±0.81
5.0
5.36±1.03
10.0
, 百拇医药
5.39±0.60*
ZQFZCJ
6.0
5.93±0.93**
* P<0.05 ** P<0.01 vs control by t test
XLW:Xiao-Liu-Wan ZQFZCJ:Zhen Qi Fu Zheng Chong Ji
2.2 对荷瘤小鼠迟发型变态反应的影响:消瘤丸5和10 g/kg组小鼠耳肿胀度分别比对照组提高4.3倍与5.6倍,显著增加荷瘤小鼠耳肿胀度(P<0.01),见表2;阳性对照药贞芪扶正冲剂也明显增加二硝基氟苯所致小鼠的迟发型变态反应。
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表2 消瘤丸对荷瘤(S180)小鼠迟发型变态反应的影响
Table 2 The effect of XLW on the contact dermatitis in
S180-bearing mice induced by dinitrofluorobenzene
(n=10,
±s)Groups
Dose(g/kg)
Mass of ears(m/mg)
Control
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-
0.56±0.44
XLW
2.5
0.55±0.63
5.0
2.43±1.69**
10.0
3.14±1.64**
ZQFZCJ
6.0
1.93±1.18**
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** P<0.01 vs Control by t test
XLW:Xiao-Liu-Wan ZQFZCJ:Zhen Qi Fu Zheng Chong Ji
2.3 对荷瘤小鼠体液免疫的影响:消瘤丸2.5、5和10 g/kg组的血中溶血素含量(以HC50反映)比对照组分别提高122.0 %、176.8 %和175.7 %,5和10 g/kg组可显著提高半数溶血值HC50(P<0.05),见表3,阳性对照药贞芪扶正冲剂亦可显著提高HC50(P<0.01)。
表3 消瘤丸对荷瘤(S180)小鼠溶血素生成的影响
Table 3 The effect of XLW on the formation of serum
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hemolysin in S180-bearing mice
(n=10,
±s)Groups
Dose(g/kg)
HC50
Control
-
97.6±59.5
XLW
2.5
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119.9±58.4
5.0
172.6±70.2*
10.0
171.5±61.4*
ZQFZCJ
6.0
227.5±66.9**
* P<0.05 ** P<0.01 vs control by t test
XLW:Xiao-Liu-Wan ZQFZCJ:Zhen Qi Fu Zheng Chong Ji
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3 讨论
鉴于恶性肿瘤患者免疫功能低下的特点,近年来提出改善肿瘤患者免疫功能状态,促进机体免疫功能,采用辅助治疗方法以达到防治肿瘤的目的。调节机体免疫功能的药物可作用于机体免疫反应的不同环节或不同细胞,复方贞芪汤对小鼠的单核巨噬细胞系统的非特异性吞噬功能、特异性体液免疫或细胞免疫均有促进作用[6]。碳粒廓清实验反映肝脏的枯否细胞和脾脏巨噬细胞的吞噬功能,免疫增强剂复合洋参多糖有明显增加碳末吞噬指数,表明对单核巨噬细胞系统吞噬功能有明显促进作用[7],消瘤丸同样具有此种作用。迟发型变态反应是依赖T细胞的反应,其主要特征是致敏机体,在抗原攻击部位出现迟发性炎症反应,在移植物排斥反应、自身免疫病和肿瘤免疫方面起着关键作用。SRBC初次免疫机体时,最早产生IgM,4～5 d后即达到高峰，其溶血性很强，与少量SRBC一起体外温育,在补体参与下,产生溶血反应,用分光光度计测定溶血程度可反映抗体水平。本实验的结果表明,消瘤丸有类似于养正合剂的作用[8],能显著增强荷瘤小鼠迟发型变态反应和小鼠半数溶血素值,说 明消瘤丸具有明显的扶正作用,可增强小鼠的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能,从而增强机体的防护能力,有利于对抗肿瘤。
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参考文献
1.香卫红，谭光明，雷兰顿，等.消瘤丸对雌性激素负荷大鼠子宫肌层影响的实验研究.中医杂志，1998，39(6)：364
2.孙文娟,睢大员,于晓风,等.吉林枸杞糖蛋白的初步药理研究.白求恩医科大学学报,1996,22(5):486
3.徐叔云,卞如濂,陈修,等.药理实验方法学, 北京:人民卫生出版社.1991:1233,1226
4.王家葵,郑军,沈映君.太子参总提取物对环磷酰胺处理动物免疫功能及胸腺、脾脏核酸含量的影响.中药药理与临床,1996,12(6)16
5.万金志,罗上武,张均倡,等.肝丹对小鼠免疫功能影响的实验研究.中草药,1998,29(9):614
6.章新奇,刘淑俊,宛风玲,等.贞芪汤加味合并化疗对Ⅲ期多发性骨髓瘤的治疗及其T细胞亚群影响的研究.实用中西医结合杂志,1992,5(10):604
7.郑辉,赵乃坤,鲍琰,等.复合洋参多糖免疫增强剂对荷瘤小鼠免疫功能的影响.中药药理与临床,1992,8(特辑):8
8.曹于平,李明,柳晓泉,等.养正合剂对实验性肿瘤的治疗作用.中国药科大学学报,1994,25(6):353
收稿日期:1998-12-14, 百拇医药