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编号:10231017
清开灵和654-2对谷氨酸神经毒性脑水肿的影响
http://www.100md.com 《中草药》 1999年第5期
     作者:岳少杰 罗自强 邓世林 虞佩兰 夏令伟

    单位:岳少杰 罗自强 邓世林 虞佩兰 夏令伟 湖南医科大学湘雅医院儿科(长沙410008)

    关键词:岳少杰;罗自强;邓世林;虞佩兰;夏令伟

    清开灵和654 摘 要 采用侧脑室注射谷氨酸诱发脑水肿,观察清开灵和654-2对谷氨酸神 经毒性脑水肿的影响,结果发现:侧脑室注射谷氨酸可引起双侧大脑弥漫性脑组织水和钠含 量增加,而伊文思蓝含量无明显的变化;大剂量清开灵可减轻谷氨酸所致脑组织水及钠含量 的增加,而小剂量清开灵和654-2无明显作用,提示清开灵具有直接抗谷氨酸神经毒性作用 ,其作用与其剂量有关。

    Effect of Qingkailing and 654-2 on Cerebral

    Edema Induce d by Glutamate in Rat
, 百拇医药
    Yue Shaojie, Luo Ziqiang, Deng Shilin, et al.

    (Department of Pe diatrics, Xiangya Hospital, Hunan

    University of Medical Sciences, Changsha 410 008)

    Abstract Rat cerebral edema models were prepared by lat eral ventricular injection of glutamic acid which induced dispersive bilateral c erebral edema causing water retention and increase of sodium content. Large dos e s of Qingkailing (an injection made from Chinese crude drugs with the original p rescription of Angongniuhuang Pill used in the treatment of cerebral blood vesse l disease) (30 mL/kg) can alleviate the accummulation of water and increase of s odium ion in the brain tissues, but lower doses (20 mL/kg) of Qingkailing and 65 4-2 were without effects.This result suggested that the anti-glutamate induce d neurotoxi-
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    city of Qingkailing was dose dependent.

    Key words cerebral edema glutamate 654-2 Qingkailin g

    谷氨酸是中枢神经系统中一种重要的兴奋性神经递质,但当其细胞外浓度过高时,可产生兴 奋性神经毒性,造成神经元的损伤。近年来的研究表明,谷氨酸的兴奋性神经毒性在多种脑 损伤中起着重要的作用[1,2]。因此,寻找有效的抗谷氨酸神经毒性的中西药物是 目前脑损伤防治研究的活跃领域。我们在谷氨酸神经毒性脑水肿的模型上,观察了清开灵和 654-2对谷氨酸神经毒性的影响,以探讨清开灵和654-2的脑保护机制,为临床小儿脑水肿 的防治探索新的途径。

    1 材料

    SD大鼠由我校实验动物中心提供。清开灵注射液(北京中医学院实验药厂,批号:9103102) 主要组成:牛黄、水牛角、黄芩、银花、栀子等。谷氨酸钠(Sigma公司)。654-2注射液(北 京制药厂,批号:90062224)。
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    2 方法

    2.1 谷氨酸神经毒性脑水肿动物模型制备:SD大鼠ip 20%乌拉坦(0.5 mL/100g)麻醉, 用 立体定位仪固定头部,在冠状缝向后旁开2 mm,矢状缝旁开3.5 mm处钻一2 mm的小孔,垂 直进针4 mm,进入右侧脑室内,注入谷氨酸50 μmol,诱发谷氨酸神经毒性脑水肿。对照组 同法注射等体积NaCl液50 μmol。各组均于实验前iv 2%伊文思蓝生理盐水溶液0.2 mL/k g,作为血脑屏障通透性指示剂,4 h后断头取脑,观察脑组织的蓝染范围和程度,并取左、 右大脑半球备用。

    2.2 动物分组:SD大鼠48只,雌雄不拘,体重200~260 g,随机分为5组:对照组(n=14)、谷氨酸组(n=11)、清开灵Ⅰ组(n=6) 、清开灵Ⅱ组(n=11)、654-2组(n=6)。清开灵Ⅰ组, 取清开灵7 mL/kg分3次分别于侧脑室注谷氨酸前30 min、注谷氨酸后1和2 h ip。清开灵Ⅱ 组,取清开灵7 mL/kg,于侧脑室注射谷氨酸前30 min 1次ip,并于注谷氨酸后2 h追加半量 ,总量为10.5 mL/kg。654-2组于注射谷氨酸前30 min ip 654-2 20 mg/kg,以后每隔30 min注射654-2 10 mg/kg,共8次。谷氨酸组ip等量生理盐水作为对照。
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    2.3 脑组织含水量测定:取脑组织100 mg置105℃烤箱内,48 h至恒重,称干重计算脑水 含量。

    2.4 脑组织伊文思蓝含量测定:取左、右大脑半球前半部全层脑组织约100 mg,分别加入 3 mL甲酰胺,45℃水浴48 h后,632 nm比色,计算伊文思蓝含量。

    2.5 脑组织钠、钾含量测定:取脑组织先后加入浓硝酸和高氯酸,加热消化至清亮,用原子吸收分光光度计测定钠、钾含量。

    2.6 统计处理:实验结果用(x±s )表示,组间比较采用t检验;组内比较采用配对t检验 。

    3 结果

    3.1 谷氨酸对脑组织的含水量、钠、钾及伊文思蓝含量的影响:见表1。显示右侧脑室内 注入谷氨酸可致双侧脑皮质的含水量及钠含量均明显高于对照组(P<0.0 1),且左右半球无差异(P>0.05)。两组大脑半球均未见蓝染,脑组织钾 、钙及伊文思蓝含量无明显差异(P>0.05)。
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    表1 谷氨酸对脑组织水、钠、钾及伊文思蓝含量的影 响(Image2.gif (850 bytes)±s)

    组别

    n

    含水量(%)

    钠(mg/g干重)

    钾(mg /g干 重)

    钙(mg/g干重)

    伊文思蓝

    (ng/g湿重)

, http://www.100md.com     左

    右

    左

    右

    左

    右

    左

    右

    左

    右

    对照组

    14

    79.75±0.45

    79.98±0.33
, 百拇医药
    4.24±0.45

    4.48±0.33

    16.49±0.83

    16.28±1.29

    0.450±0.041

    0.492±0.062

    0.077± 0.014

    0.073±0.015

    谷氨酸组

    11

    81.46±0.79
, 百拇医药
    81.60±0.81

    5.46±0.91

    5.99±0.62

    16.63±1.07

    16.05±0.96

    0.452±0.095

    0.495± 0.061

    0.074±0.014

    0.072±0.013

    和对照组比:P<0.01
, 百拇医药
    3.2 清开灵和654-2对谷氨酸神经毒性所致脑水肿的影响:清开灵Ⅱ组脑含水量及钠含量 明显低于谷氨酸组(P<0.01),且与对照组无明显差异(P>0.05);而清开灵Ⅰ和654-2组的脑水及钠含量与谷氨酸组相比无明显的差异(P>0.05),明显高于对照组(P<0.01)。清开灵两组的脑组 织钾含量均高于对照组(P<0.01)。各组钙含量无明显的差异(见表2)。

    表2 清开灵和654-2对谷氨酸神经毒性脑水肿的影响(Image2.gif (850 bytes)±s)

    组 别

    n

    含水量(%)

, 百拇医药     钠(mg/g干重)

    钾(mg/ g干重)

    钙(mg/g干重)

    对照组

    14

    79.75±0.45

    4.24±0.45

    16.49±0.83

    0.450±0.041

    谷氨酸组

    11

    81.46±0.79▲▲
, 百拇医药
    5.46±0.91▲▲

    16.63±1 .07

    0.452±0.095

    清开灵Ⅰ组

    6

    81.26±0.92▲▲

    5.64±0.98▲▲

    17.48± 0.82

    0.451±0.048

    清开灵Ⅱ组

    11
, 百拇医药
    80.12±0.92△△★★

    4.29±0.36△△★★

    17.29±0.68

    0.426±0.045

    654-2组

    6

    81.78±0.67▲▲

    5.07±0.80

    16.99±2.74

    0.455±0.087
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    和对照组比:P<0.05 ▲▲P <0.01; 和谷氨酸组比:△△P<0.01; 和清开灵Ⅰ组 比:★★P<0.01 4 讨论

    谷氨酸的兴奋性神经毒性在多种脑损伤中起着重要作用[1,2]。本研究结果也显示 侧脑室注射谷氨酸可引起脑组织中水、钠含量的增加,表明侧脑室注射谷氨酸可引起弥漫性 脑水肿,证实谷氨酸神经的毒性在脑水肿的产生中起着重要作用。但作为血脑屏障通透性指 示剂的伊文思蓝含量在谷氨酸组和对照组之间并无明显的差异,提示谷氨酸引起脑水肿时并 无明显的血脑屏障损伤。本研究并未发现谷氨酸组脑组织钙含量的增加,可能与本实验观察 时间较短有关。

    654-2为人工合成的阿托品类抗胆碱能受体阻断剂,对感染性休克有显著疗效。对实验性大 肠杆菌脑膜炎的脑损伤及百日咳菌液脑水肿也有保护作用[3,4],并能抑制百日咳 菌液脑水肿时脑组织谷氨酸含量的降低[4]。提示654-2可通过抑制谷氨酸的大量 释放而发挥其抗脑水肿作用。654-2具有细胞保护作用[5],本实验结果发现654- 2并不能减轻对谷氨酸神经毒性所致脑组织水、钠含量的增加,表明654-2对谷氨酸的神经 毒性脑水肿无保护作用,不能直接拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒性。
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    清开灵注射液系安宫牛黄丸衍化的一种纯中药复方针剂,具有清热解毒、镇静安神、化 痰祛瘀、醒脑开窍之功效。自1975年研制成功以来已广泛地应用于小儿病毒性脑炎等颅内外 感染时高热惊厥、昏迷及成人急性脑血管疾病、肝昏迷等多种疾病的临床治疗[6] 。动物实验也证实,清开灵对缺血性[7]及感染性[8]脑损伤均有保护作用 ,但其抗脑损伤的具体机制尚未完全清楚。有动物实验显示清开灵可影响脑内乙酰胆碱酯酶 活性和谷氨酸含量[7,9],提示清开灵的作用机制可能与脑内中枢神经递质有关。 为此,本研究观察了清开灵对谷氨酸兴奋性神经毒性的影响,以探讨其镇静安神、醒脑开窍 的脑保护机制。结果显示ip大剂量清开灵,可以明显地减轻谷氨酸神经毒性所致脑水及 钠含量的增加,首次显示清开灵具有直接抗谷氨酸神经毒性作用,这为临床应用清开灵防治 多种中枢神经系统损伤提供了新的线索。小剂量清开灵对谷氨酸神经毒性脑水肿无明显疗效 ,表明清开灵的脑保护作用与其所用剂量有关,这提示临床应用清开灵防治脑损伤时剂量不 宜太小。结果还提示清开灵可促进脑细胞对K+的重摄取,提高脑组织钾含量,但其机制尚 有待进一步研究。
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    参 考 文 献

    1 岳少杰.国外医学-神经病学神经外科分册,1994,12(4):205

    2 岳少杰,等.湖南医科大学学报,1995,20(3):247

    3 刘一心,等.中华医学杂志,1993,73(5):289

    4 Yue Shaojie, et al. Chinese J Integrated Traditional a nd Western Medicine,1997,3(1):51

    5 孙秉庸,等主编.病理生理学进展(五).北京:科学技术文献出版社,1993:1[ ZK)〗

    6 杨建华.中成药,1994,16(12):20

    7 蒋玉凤,等.北京中医药大学学报,1996,19(3):33

    8 刘 涛,等.江苏中医杂志,1987,6:33

    9 朱培纯,等.北京中医学院学报,1980,3:24

    (1998-07-14 收稿), 百拇医药