香荷药条的制备工艺研究△
作者：杨柳 邓远辉 董玉珍
单位：杨柳；邓远辉 董玉珍 广东省中医院(广州510120)
关键词：香荷药条；制备工艺；小檗碱；正交试验
香荷药条的制备工艺研究 摘 要 以小檗碱含量、浸膏得率为指标，对不同提取方法进行考察，确定了香荷药条的制备工艺路线，并经正交试验优选了制备工艺条件。结果表明，以加10倍量65%乙醇，煎煮3次，每次提取2 h为最佳。
香荷药条由黄连、黄柏等多味中药配伍组成，具有清热燥湿、杀虫疗癣之功。经我院多年临床验证，对妇科阴道炎有良好疗效。它克服了传统外用洗剂使用、携带不便的弊病，独创以棉条为骨架物的阴道给药途径，达到了缓慢释药并自洁内环境的双重效果。从药材中提取出的小檗碱，是香荷抑菌消炎的主要有效成分[1]。笔者以小檗碱含量和浸膏得率为指标，对香荷药条的制备工艺进行研究，为其发展成一种方便有效的中药缓释制剂提供实验依据。
, 百拇医药
1 仪器与试药
仪器：SP8800高效液相色谱仪；盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供；实验用药材均购自广州市药材公司。
香荷药条由本院中心实验室提供。
试剂：乙腈、甲醇为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。
2 制备工艺路线的选择
经抑菌实验证明，黄连、黄柏中小檗碱是方中主要有效成分，故可以小檗碱的溶解性大小作为选择溶媒的标准。而在实际生产中，以水、乙醇为提取溶媒，安全易得。因此，初步拟定水和乙醇为提取溶媒，回流提取。经过预实验，我们选定水回流、水提醇沉及不同浓度乙醇回流6种方法提取。
2.1 浸膏得率测定方法
, 百拇医药
2.1.1 水回流法：称取处方量药材粗粉(20目)，加水5倍量，浸泡0.5 h，回流提取1 h，过滤、浓缩。置已干燥恒重的蒸发皿中，水溶浓缩至干，105℃干燥3 h，取出，移至干燥器中，冷却至室温，迅速精密称定重量。同法制备3份。计算浸膏得率，结果见表1。
2.1.2 水提醇沉法：称取处方量药材粗粉(20目)，加水5倍量，加95%乙醇调醇浓度至70%、80%，静置24 h使沉淀完全，倾取上清液，回收乙醇、浓缩，按水回流法操作。结果见表1。
表1 不同提取方法的小檗碱含量和浸膏得率
编号
提取方法
小檗碱含量(g)
浸膏得率(%)
, 百拇医药
A
水回流
0.0177
2.8150
B
水提醇沉(70%)
0.0153
1.7000
C
水提醇沉(85%)
0.0173
1.5033
D
, 百拇医药
45%乙醇回流
0.0101
2.9484
E
75%乙醇回流
0.1250
3.2042
F
95%乙醇回流
0.1227
3.6420
2.1.3 乙醇回流法：称取处方量药材粗粉(20目)，分别加45%、75%、95%乙醇5倍量，浸泡0.5 h，回流提取1 h，过滤，回收乙醇，浓缩，按水回流法操作。结果见表1。 2.2 小檗碱含量测定方法
, http://www.100md.com
2.2.1 色谱条件：ODS C18柱(4.9 mm×250 mm，5 μm)流动相为乙腈-水〔1∶1，1000 mL含KH2PO4 3.4 g，CH3(CH2)11SO4Na 1.7 g〕[2]，流速1 mL/min，柱温室温，小檗碱的检测波长为345 mm。
2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取已干燥至恒重的小檗碱适量，以甲醇为溶剂，配制0.28 mg/mL的溶液，作对照品溶液。
2.2.3 样品液的制备：精密称取适量已干燥至恒重的干浸膏，加入10 mL甲醇，超声振荡30 min，过滤，定容至25 mL，作为样品供试液。
2.2.4 线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL置于2 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后，进样10 μL，测定。同一浓度测定3次，取其平均值。以标准品的量(μg)为横坐标，小檗碱的峰面积为纵坐标，得回归方程：Y=1.41×105X+5.46×106，r=0.9999，线性范围：0.07～2.24 μg。
, http://www.100md.com
2.2.5 精密度试验：按上述色谱条件，用浓度为1.12×10-2 mg/mL的小檗碱标准品溶液进样6次，每次10 μL，分别测得各次峰面积，结果RSD值为1.12%。
2.2.6 样品测定：按上述方法精密吸取各供试品溶液10 μL，进样测定，结果见表1。
2.2.7 加样回收率试验：精取已知小檗碱含量的药材粗粉4份，其中3份加入小檗碱对照品0.12 mg，1份不加。按75%醇提样品溶液制备方法和样品测定项下操作，测得平均回收率为98.95%，RSD=2.71%。
参照各种提取工艺的小檗碱含量及浸膏得率，拟选择75%左右乙醇为溶媒的提取工艺。
3 制备工艺条件优选
采用正交法优选制备工艺条件，选定提取时间、次数、溶媒用量、乙醇浓度为正交因子，以小檗碱含量及浸膏得率为考察指标，选用L9(3)4正交表进行试验，因素水平安排见表2，测定结果的方差分析见表3、表4。
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表2 试验因素水平表
水
因素
平
A
B
C
D
提取(h)
次数
溶媒量(倍)
乙醇浓度(%)
1
, 百拇医药
0.75
1
8
65
2
1
2
10
75
3
2
3
12
85
, 百拇医药
表3 浸膏得率方差分析表
方差
离均差平方和
自由度
方差
F值
显著性
A
14.26
2
7.13
33.95
**
, http://www.100md.com
B
163.12
2
81.56
388.38
**
C
6.01
2
3.01
14.33
**
D
, http://www.100md.com
34.92
2
17.46
83.14
**
误差
3.72
18
0.21
表4 盐酸小檗碱含量方差分析表
方差
离均差平方和
自由度
, 百拇医药
方差
F值
显著性
A
0.45
2
0.23
59.14
**
B
1.46
2
0.73
, 百拇医药 187.71
**
C
0.07
2
0.03
7.71
**
D
0.23
2
0.11
28.29
, 百拇医药 **
误差
0.07
18
0.0038
结果表明，因素A、B、C、D均有显著性意义。以小檗碱含量作为评价指标时，各因素的最佳水平为B3A3D1C2，而以浸膏得率为评价指标时，各因素的最佳水平为B3D1A3C3，综合二项评估，我们选取B3A3D1C2作为最佳工艺条件，即10倍量65%乙醇，煎煮3次，每次提取2 h。 按照理论最佳工艺进行验证实验，结果小檗碱含量为1.94%，浸膏得率为18.79%，与正交试验结果基本一致。
, 百拇医药
4 小结与讨论
4.1 本文通过不同提取方法选择香荷药条的制备工艺，经正交法优选工艺条件，最终选用10倍量65%乙醇回流提取3次，每次2 h的制备工艺条件。该工艺流程简单，浸膏得率适宜，小檗碱含量高。
4.2 以浸膏得率为评价指标，可以反映提取的总体情况，而取小檗碱作为评价指标，则可反映出方中主药的提取情况，综合二项指标，可以既全面又有重点地考察方中诸药的提取效果，对本制剂工艺条件的优选具有客观合理的指导意义。
参 考 文 献
1 阴 健，等.中药现代研究与临床应用.上册.北京：学苑出版社，1994：523，588
2 潘 杨，等.南京中医药大学学报，1996，12(6)：25
(1998-12-18收稿), http://www.100md.com
单位：杨柳；邓远辉 董玉珍 广东省中医院(广州510120)
关键词：香荷药条；制备工艺；小檗碱；正交试验
香荷药条的制备工艺研究 摘 要 以小檗碱含量、浸膏得率为指标，对不同提取方法进行考察，确定了香荷药条的制备工艺路线，并经正交试验优选了制备工艺条件。结果表明，以加10倍量65%乙醇，煎煮3次，每次提取2 h为最佳。
香荷药条由黄连、黄柏等多味中药配伍组成，具有清热燥湿、杀虫疗癣之功。经我院多年临床验证，对妇科阴道炎有良好疗效。它克服了传统外用洗剂使用、携带不便的弊病，独创以棉条为骨架物的阴道给药途径，达到了缓慢释药并自洁内环境的双重效果。从药材中提取出的小檗碱，是香荷抑菌消炎的主要有效成分[1]。笔者以小檗碱含量和浸膏得率为指标，对香荷药条的制备工艺进行研究，为其发展成一种方便有效的中药缓释制剂提供实验依据。
, 百拇医药
1 仪器与试药
仪器：SP8800高效液相色谱仪；盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供；实验用药材均购自广州市药材公司。
香荷药条由本院中心实验室提供。
试剂：乙腈、甲醇为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。
2 制备工艺路线的选择
经抑菌实验证明，黄连、黄柏中小檗碱是方中主要有效成分，故可以小檗碱的溶解性大小作为选择溶媒的标准。而在实际生产中，以水、乙醇为提取溶媒，安全易得。因此，初步拟定水和乙醇为提取溶媒，回流提取。经过预实验，我们选定水回流、水提醇沉及不同浓度乙醇回流6种方法提取。
2.1 浸膏得率测定方法
, 百拇医药
2.1.1 水回流法：称取处方量药材粗粉(20目)，加水5倍量，浸泡0.5 h，回流提取1 h，过滤、浓缩。置已干燥恒重的蒸发皿中，水溶浓缩至干，105℃干燥3 h，取出，移至干燥器中，冷却至室温，迅速精密称定重量。同法制备3份。计算浸膏得率，结果见表1。
2.1.2 水提醇沉法：称取处方量药材粗粉(20目)，加水5倍量，加95%乙醇调醇浓度至70%、80%，静置24 h使沉淀完全，倾取上清液，回收乙醇、浓缩，按水回流法操作。结果见表1。
表1 不同提取方法的小檗碱含量和浸膏得率
编号
提取方法
小檗碱含量(g)
浸膏得率(%)
, 百拇医药
A
水回流
0.0177
2.8150
B
水提醇沉(70%)
0.0153
1.7000
C
水提醇沉(85%)
0.0173
1.5033
D
, 百拇医药
45%乙醇回流
0.0101
2.9484
E
75%乙醇回流
0.1250
3.2042
F
95%乙醇回流
0.1227
3.6420
2.1.3 乙醇回流法：称取处方量药材粗粉(20目)，分别加45%、75%、95%乙醇5倍量，浸泡0.5 h，回流提取1 h，过滤，回收乙醇，浓缩，按水回流法操作。结果见表1。 2.2 小檗碱含量测定方法
, http://www.100md.com
2.2.1 色谱条件：ODS C18柱(4.9 mm×250 mm，5 μm)流动相为乙腈-水〔1∶1，1000 mL含KH2PO4 3.4 g，CH3(CH2)11SO4Na 1.7 g〕[2]，流速1 mL/min，柱温室温，小檗碱的检测波长为345 mm。
2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取已干燥至恒重的小檗碱适量，以甲醇为溶剂，配制0.28 mg/mL的溶液，作对照品溶液。
2.2.3 样品液的制备：精密称取适量已干燥至恒重的干浸膏，加入10 mL甲醇，超声振荡30 min，过滤，定容至25 mL，作为样品供试液。
2.2.4 线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL置于2 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后，进样10 μL，测定。同一浓度测定3次，取其平均值。以标准品的量(μg)为横坐标，小檗碱的峰面积为纵坐标，得回归方程：Y=1.41×105X+5.46×106，r=0.9999，线性范围：0.07～2.24 μg。
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2.2.5 精密度试验：按上述色谱条件，用浓度为1.12×10-2 mg/mL的小檗碱标准品溶液进样6次，每次10 μL，分别测得各次峰面积，结果RSD值为1.12%。
2.2.6 样品测定：按上述方法精密吸取各供试品溶液10 μL，进样测定，结果见表1。
2.2.7 加样回收率试验：精取已知小檗碱含量的药材粗粉4份，其中3份加入小檗碱对照品0.12 mg，1份不加。按75%醇提样品溶液制备方法和样品测定项下操作，测得平均回收率为98.95%，RSD=2.71%。
参照各种提取工艺的小檗碱含量及浸膏得率，拟选择75%左右乙醇为溶媒的提取工艺。
3 制备工艺条件优选
采用正交法优选制备工艺条件，选定提取时间、次数、溶媒用量、乙醇浓度为正交因子，以小檗碱含量及浸膏得率为考察指标，选用L9(3)4正交表进行试验，因素水平安排见表2，测定结果的方差分析见表3、表4。
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表2 试验因素水平表
水
因素
平
A
B
C
D
提取(h)
次数
溶媒量(倍)
乙醇浓度(%)
1
, 百拇医药
0.75
1
8
65
2
1
2
10
75
3
2
3
12
85
, 百拇医药
表3 浸膏得率方差分析表
方差
离均差平方和
自由度
方差
F值
显著性
A
14.26
2
7.13
33.95
**
, http://www.100md.com
B
163.12
2
81.56
388.38
**
C
6.01
2
3.01
14.33
**
D
, http://www.100md.com
34.92
2
17.46
83.14
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误差
3.72
18
0.21
表4 盐酸小檗碱含量方差分析表
方差
离均差平方和
自由度
, 百拇医药
方差
F值
显著性
A
0.45
2
0.23
59.14
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B
1.46
2
0.73
, 百拇医药 187.71
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C
0.07
2
0.03
7.71
**
D
0.23
2
0.11
28.29
, 百拇医药 **
误差
0.07
18
0.0038
结果表明，因素A、B、C、D均有显著性意义。以小檗碱含量作为评价指标时，各因素的最佳水平为B3A3D1C2，而以浸膏得率为评价指标时，各因素的最佳水平为B3D1A3C3，综合二项评估，我们选取B3A3D1C2作为最佳工艺条件，即10倍量65%乙醇，煎煮3次，每次提取2 h。 按照理论最佳工艺进行验证实验，结果小檗碱含量为1.94%，浸膏得率为18.79%，与正交试验结果基本一致。
, 百拇医药
4 小结与讨论
4.1 本文通过不同提取方法选择香荷药条的制备工艺，经正交法优选工艺条件，最终选用10倍量65%乙醇回流提取3次，每次2 h的制备工艺条件。该工艺流程简单，浸膏得率适宜，小檗碱含量高。
4.2 以浸膏得率为评价指标，可以反映提取的总体情况，而取小檗碱作为评价指标，则可反映出方中主药的提取情况，综合二项指标，可以既全面又有重点地考察方中诸药的提取效果，对本制剂工艺条件的优选具有客观合理的指导意义。
参 考 文 献
1 阴 健，等.中药现代研究与临床应用.上册.北京：学苑出版社，1994：523，588
2 潘 杨，等.南京中医药大学学报，1996，12(6)：25
(1998-12-18收稿), http://www.100md.com