维生素E乳剂对大鼠急性肝坏死的防治作用
作者：毛青 李奇芬 吴纯清 丁明权 王洪
单位：第三军医大学西南医院全军传染病中心 重庆市 400038
关键词：肝炎/ 治疗；维生素E；疾病模型，动物
世界华人消化杂志990557 Subject headings hepatitis/ therapy; vitamin E; disease models, animal
中国图书馆分类号 R 512.6
自由基及脂质过氧化在各型肝炎的发病中起着重要作用[1]. D-氨基半乳糖(D-Gal)致大鼠肝坏死是目前公认较好的暴发性肝坏死动物模型[2]. 实验证明，使用较大剂量自由基清除剂维生素E(VE)对其有显著的治疗效果[3]. 本研究通过观察静脉给予VE乳剂对D-Gal致大鼠肝坏死的疗效，探讨VE乳剂对肝坏死的保护作用，为VE乳剂用于临床提供理论及实验依据.
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1 材料和方法
1.1 材料 VE乳剂：由重庆制药厂提供. 模型制作：健康Wistar大鼠24只(雌雄各半，体重220 g±30.5 g)，随机分组，同时腹腔一次注射不同剂量D-Gal，观察10 d内存活情况. 结果最适亚致死量为250 mg/ g，致死量为1.0 g/ kg.
1.2 方法 实验分组：健康Wistar大鼠35只(雌雄各半，体重225 g±32.5 g)，随机分为5组. ①正常对照组，不作任何处理；②VE乳剂预防组，于注射D-Gal前12 h从尾静脉注射100 mg/ kg VE乳剂；③VE乳剂治疗组，于注射D-Gal后12，24，36 h各从尾静脉注射VE乳剂100 mg/ kg；④空白乳组，按治疗组方法给予空白乳；⑤生理盐水组，按治疗组方法静脉注射生理盐水. 各组均于注射D-Gal后24，48 h采心血，分离血清，-20℃保存备检，并于48 h活杀取肝组织常规福尔马林固定，石蜡包埋、切片、HE染色、光镜下观察肝脏病理改变. 检测指标：血清鸟氨酸氨甲酰转移酶(OCT)用比色法测定[4]，血清丙二醛(MDA)用硫代巴比妥酸法检测[5]，血清超氧化物歧化酶(SOD)用化学发光法检测.
, 百拇医药
2 结果
2.1 各组不同时相MDA的变化 见表1.
表1 各组不同时相MDA的变化
(
±s,nmol/ mL) 时间
(h)
正常对照组
VE预防组
VE治疗组
空白乳组
生理盐水组
24
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46.0±0.33
3.36±0.41ac
36.1±0.37ab
6.46±0.81a
6.14±0.97a
48
3.43±0.33ac
2.93±0.26ac
6.79±0.75a
6.50±0.72a
, 百拇医药
aP<0.01，bP<0.05，vs正常对照组；cP<0.01，vs 空白乳组和生理盐水组.
2.2 各组不同时相SOD的变化 见表2.
表2 各组不同时相SOD的变化
(±s, nmol/ mL) 时间
(h)
正常对照组
VE预防组
VE治疗组
空白乳组
, http://www.100md.com
生理盐水组
24
917.1±119.0
923.4±145.6c
769.4±103.8b
693.0±87.9a
706.1±79.0a
48
949.6±133.4d
934.6±126.7d
, http://www.100md.com
785.3±84.0
760.0±89.5b
aP<0.01，bP<0.05，vs 正常对照组；cP<0.01，dP<0.05，vs 空白乳组和生理盐水组.
2.3 各组不同时相OCT的变化 见表3.
表3 各组不同时相OCT的变化
(±s,μ/ mL) 时间
(h)
正常对照组
, 百拇医药
VE预防组
VE治疗组
空白乳组
生理盐水组
24
9.56±0.91
13.86±1.01ab
21.03±0.86ab
30.5±1.36a
30.09±1.12a
48
, 百拇医药
11.41±1.09
10.41±1.31b
15.2±0.61a
16.19±0.93a
aP<0.01，vs 正常对照组；bP<0.01，vs 空白乳组和生理盐水组.
2.4 肝组织病理改变 造模48 h两对照组的肝组织明显充血，肝细胞大片坏死，弥漫性细胞浸润，并伴广泛出血；VE预防组及治疗组病变明显轻于两对照组，预防组又轻于治疗组，仅见轻度充血，点状坏死及少量炎细胞浸润.
3 讨论
自由基反应是许多疾病和损伤的病理基础，脂质过氧化作为自由基损伤的重要方式之一在肝损伤中起着重要作用[6]. 研究表明组织中VE的含量与脂质过氧化水平呈显著的负相关，已有报道用VE治疗D-Gal致大肝坏死有较好疗效[3]. 本研究结果显示，VE预防组和治疗组血MDA水平显著低于其他各组，且连续静注VE后MDA下降更为显著，相反，空白乳及生理盐水组MDA水平则显著增高. 这一结果与文献报道基本一致，此外，未给予VE的两组大鼠在D-Gal中毒后自由清除系统受到严重损害，SOD水平显著降低，肝损伤的严重程度与肝脂质过氧化的增强相一致. VE预防组24 h时相SOD水平高于治疗组，而OCT水平则低于治疗组，说明动物体内在含有较高水平的VE时可更好地保护肝脏[7]，此与用富含VE的食物包头饲养大鼠所作的研究基本相符[8]，提示VE对大鼠肝脏具有很好的保护作用，这种保护作用可能是通过提高组织内VE水平，抑制脂质过氧化反应，较好地维持SOD等的含量而实现的. VE治疗后大鼠MDA水平明显降低，SOD和OCT复常快速，亦说明VE对D-Gal致大鼠肝坏死有良好的治疗作用.
, 百拇医药
本研究初步验证了VE乳剂与油剂有同样药效，由于乳剂可经静脉大剂量用药，更有利于临床使用.
通讯作者：毛青
4 参考文献
[1] Arthur MJP. Reactive oxygen intermediates and liver injury. J Hepatol, 1988;6:125
[2] Okawa M, Hayashi H, Chaudry IH, Clemens MG, Baue AE. Effects of regenerating liver cytosol on drug-induced hepatic failure. Surgery, 1985;97:455
[3] 张永明，向居正，李奇芬，李平，吴力克，何长伦，郝飞. 脂质过氧化在D-氨基半乳糖致大鼠肝坏死中的意义及维生素E的治疗作用. 第三军医大学学报, 1990；12：295
, 百拇医药
[4] Ohshia M, Takeda H, Kamiyama Y, Ozawa K, Honjo I. Adirect method for the estimation of ornithinc carbamoyltransferase activity in serum. Chin Chem Acta, 1976;67:145
[5] Yagi K. Assay for blood plasma to serum. Method Enzymol, 1984;105:328
[6] Duthie GG. Liprd peroxidation. Eur J Clin Nutr, 1993;47:759
[7] Yao T, Degli Esposti SD, Huang L, Arnon R, Spangenberger A, Zeern M. Inhibition of carbon tecrachloride-induced liver injury by liposomes containing vitamin E. Am J Physiol, 1994;267:Gd476
[8] 张永明，李奇芬，李平，吴力克. 不同维生素E含量饲料对D-氨基半乳糖致大鼠肝坏死的影响. 营养学报，1991；13：25
收稿日期：1998-09-17 修回日期：1998-12-30, 百拇医药
单位：第三军医大学西南医院全军传染病中心 重庆市 400038
关键词：肝炎/ 治疗；维生素E；疾病模型，动物
世界华人消化杂志990557 Subject headings hepatitis/ therapy; vitamin E; disease models, animal
中国图书馆分类号 R 512.6
自由基及脂质过氧化在各型肝炎的发病中起着重要作用[1]. D-氨基半乳糖(D-Gal)致大鼠肝坏死是目前公认较好的暴发性肝坏死动物模型[2]. 实验证明，使用较大剂量自由基清除剂维生素E(VE)对其有显著的治疗效果[3]. 本研究通过观察静脉给予VE乳剂对D-Gal致大鼠肝坏死的疗效，探讨VE乳剂对肝坏死的保护作用，为VE乳剂用于临床提供理论及实验依据.
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1 材料和方法
1.1 材料 VE乳剂：由重庆制药厂提供. 模型制作：健康Wistar大鼠24只(雌雄各半，体重220 g±30.5 g)，随机分组，同时腹腔一次注射不同剂量D-Gal，观察10 d内存活情况. 结果最适亚致死量为250 mg/ g，致死量为1.0 g/ kg.
1.2 方法 实验分组：健康Wistar大鼠35只(雌雄各半，体重225 g±32.5 g)，随机分为5组. ①正常对照组，不作任何处理；②VE乳剂预防组，于注射D-Gal前12 h从尾静脉注射100 mg/ kg VE乳剂；③VE乳剂治疗组，于注射D-Gal后12，24，36 h各从尾静脉注射VE乳剂100 mg/ kg；④空白乳组，按治疗组方法给予空白乳；⑤生理盐水组，按治疗组方法静脉注射生理盐水. 各组均于注射D-Gal后24，48 h采心血，分离血清，-20℃保存备检，并于48 h活杀取肝组织常规福尔马林固定，石蜡包埋、切片、HE染色、光镜下观察肝脏病理改变. 检测指标：血清鸟氨酸氨甲酰转移酶(OCT)用比色法测定[4]，血清丙二醛(MDA)用硫代巴比妥酸法检测[5]，血清超氧化物歧化酶(SOD)用化学发光法检测.
, 百拇医药
2 结果
2.1 各组不同时相MDA的变化 见表1.
表1 各组不同时相MDA的变化
(
±s,nmol/ mL) 时间(h)
正常对照组
VE预防组
VE治疗组
空白乳组
生理盐水组
24
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46.0±0.33
3.36±0.41ac
36.1±0.37ab
6.46±0.81a
6.14±0.97a
48
3.43±0.33ac
2.93±0.26ac
6.79±0.75a
6.50±0.72a
, 百拇医药
aP<0.01，bP<0.05，vs正常对照组；cP<0.01，vs 空白乳组和生理盐水组.
2.2 各组不同时相SOD的变化 见表2.
表2 各组不同时相SOD的变化
(
±s, nmol/ mL) 时间(h)
正常对照组
VE预防组
VE治疗组
空白乳组
, http://www.100md.com
生理盐水组
24
917.1±119.0
923.4±145.6c
769.4±103.8b
693.0±87.9a
706.1±79.0a
48
949.6±133.4d
934.6±126.7d
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785.3±84.0
760.0±89.5b
aP<0.01，bP<0.05，vs 正常对照组；cP<0.01，dP<0.05，vs 空白乳组和生理盐水组.
2.3 各组不同时相OCT的变化 见表3.
表3 各组不同时相OCT的变化
(
±s,μ/ mL) 时间(h)
正常对照组
, 百拇医药
VE预防组
VE治疗组
空白乳组
生理盐水组
24
9.56±0.91
13.86±1.01ab
21.03±0.86ab
30.5±1.36a
30.09±1.12a
48
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11.41±1.09
10.41±1.31b
15.2±0.61a
16.19±0.93a
aP<0.01，vs 正常对照组；bP<0.01，vs 空白乳组和生理盐水组.
2.4 肝组织病理改变 造模48 h两对照组的肝组织明显充血，肝细胞大片坏死，弥漫性细胞浸润，并伴广泛出血；VE预防组及治疗组病变明显轻于两对照组，预防组又轻于治疗组，仅见轻度充血，点状坏死及少量炎细胞浸润.
3 讨论
自由基反应是许多疾病和损伤的病理基础，脂质过氧化作为自由基损伤的重要方式之一在肝损伤中起着重要作用[6]. 研究表明组织中VE的含量与脂质过氧化水平呈显著的负相关，已有报道用VE治疗D-Gal致大肝坏死有较好疗效[3]. 本研究结果显示，VE预防组和治疗组血MDA水平显著低于其他各组，且连续静注VE后MDA下降更为显著，相反，空白乳及生理盐水组MDA水平则显著增高. 这一结果与文献报道基本一致，此外，未给予VE的两组大鼠在D-Gal中毒后自由清除系统受到严重损害，SOD水平显著降低，肝损伤的严重程度与肝脂质过氧化的增强相一致. VE预防组24 h时相SOD水平高于治疗组，而OCT水平则低于治疗组，说明动物体内在含有较高水平的VE时可更好地保护肝脏[7]，此与用富含VE的食物包头饲养大鼠所作的研究基本相符[8]，提示VE对大鼠肝脏具有很好的保护作用，这种保护作用可能是通过提高组织内VE水平，抑制脂质过氧化反应，较好地维持SOD等的含量而实现的. VE治疗后大鼠MDA水平明显降低，SOD和OCT复常快速，亦说明VE对D-Gal致大鼠肝坏死有良好的治疗作用.
, 百拇医药
本研究初步验证了VE乳剂与油剂有同样药效，由于乳剂可经静脉大剂量用药，更有利于临床使用.
通讯作者：毛青
4 参考文献
[1] Arthur MJP. Reactive oxygen intermediates and liver injury. J Hepatol, 1988;6:125
[2] Okawa M, Hayashi H, Chaudry IH, Clemens MG, Baue AE. Effects of regenerating liver cytosol on drug-induced hepatic failure. Surgery, 1985;97:455
[3] 张永明，向居正，李奇芬，李平，吴力克，何长伦，郝飞. 脂质过氧化在D-氨基半乳糖致大鼠肝坏死中的意义及维生素E的治疗作用. 第三军医大学学报, 1990；12：295
, 百拇医药
[4] Ohshia M, Takeda H, Kamiyama Y, Ozawa K, Honjo I. Adirect method for the estimation of ornithinc carbamoyltransferase activity in serum. Chin Chem Acta, 1976;67:145
[5] Yagi K. Assay for blood plasma to serum. Method Enzymol, 1984;105:328
[6] Duthie GG. Liprd peroxidation. Eur J Clin Nutr, 1993;47:759
[7] Yao T, Degli Esposti SD, Huang L, Arnon R, Spangenberger A, Zeern M. Inhibition of carbon tecrachloride-induced liver injury by liposomes containing vitamin E. Am J Physiol, 1994;267:Gd476
[8] 张永明，李奇芬，李平，吴力克. 不同维生素E含量饲料对D-氨基半乳糖致大鼠肝坏死的影响. 营养学报，1991；13：25
收稿日期：1998-09-17 修回日期：1998-12-30, 百拇医药