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编号:10245570
HBV基因高同源性是急性自限性乙型肝炎的主要特征*
http://www.100md.com 《世界华人消化杂志》 1999年第5期
     作者:张瑞 王洪莉 顾长海 王海涛

    单位:张瑞 顾长海 第三军医大学西南医院全军传染病专科中心 重庆市 400038; 王洪莉 (天津254医院传染科;王海涛 军事医学科学院

    关键词:主题词 肝炎,乙型;基因,病毒;乙型肝炎病毒

    Subject headings hepatitis B Subject headings hepatitis B; gene, viral; hepatitis B virus

    中国图书馆分类号 R 512.6

    有关HBV分子生物学研究已较多[1-4],本文用计算机对30个克隆1.5+万碱基进行了同源性分析、变异位点的插入和缺失突变现象的分析,并对各克隆间的遗传距离进行了初步研究.
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    1 材料和方法

    血清标本取自3例急性乙型肝炎患者(天津254医院1995-04/ 1995-07住院患者),按1996年全国制定标准诊断为急性自限性乙型肝炎,发病后3 mo复查HBsAg转阴,血清中HBVDNA多次检查阴性. 前S/ S基因PCR扩增所用引物为S1:5’-CGCGGTACCGGTCACCATATTCTTGGGAA-3’(2815~2835),划线处为KpnⅠ位点;S2:5’-TGCGACTGCAGTTAGGGTTTAATGTATACC-3’(842~832),划线处为PstⅠ位点;S3:5’-AAACTGCAGCCGTCCTGATGT(T/ G)(G/ A)TG(T/ C)TCTCCAT-3’(155~181),划线处为PstⅠ位点. 进行血清HBVDNA扩增和根据文献进行PCR产物的克隆和序列分析后,采用Goldkey软件(军事医学科学院吴加金等编制),对所有克隆进行同源性分析等. 进化树分析采用PHYLIP(3.57版)软件包中的DNADIST和NEIGBOR软件块,遗传距离算法采用JQININF方法.
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    2 结果

    2.1 采用Goldkey软件将所测每个序列与HBV同源性分析 与基因库中27条HBV序列比较,选用同源性最高者为假野生株,并经Goldkey排列核苷酸序列方阵(略). 其结果表明,3例急性自限性乙型肝炎患者中序列呈高度同源性,其中1例10个克隆完全一致,1例9个克隆一致,另一例8个克隆一致.

    2.2 遗传距离分析 将3个患者,30个克隆的HBV前S序列,用PHYLT35C软件中心,DNADIST计算出每条序列之间的遗传距离,(Jukes-cunkork距离系数)再用NEIGHBOR软件的NELGHBOR-JOINIG方法按遗传距离序列制出遗传距离图. U患者10个克隆的遗传距离较小,U2,U4,U5,U7,U8,U9,U10克隆在同一遗传距离上,克隆间最大的遗传距离仅0.028. L患者的10个克隆除L4外均在一个遗传距离上,克隆间的最大遗传距离为0.0058;W患者的10个克隆均在一个距离上,并且克隆间的遗传距离为0.
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    3 讨论

    研究发现急性自限性乙型肝炎患者体内HBV前S1/ S2各克隆间的序列的同源性最好,3个患者体内的病毒序列同源性为80%~100%,与野生株相比碱基的替代、缺失、插入率均低,所有患者体内各克隆的遗传距离一致或接近,克隆的最大的遗传距离为0.028,推测急性自限性乙型肝炎感染者体内的HBV病毒感染时毒株较单一,并且进入体内时间较短,机体通过正常的免疫机制很快将进入体内的病毒清除. 此外,我们的实验发现,急性自限性乙型肝炎患者体内各克隆的B细胞表位与野生株相比均无变化,推测此类患者体内HBV病毒CD4+,CD8+T细胞表位亦是恒定的(因为此种患者体内HBV前S1/ S2区的变异率较极低),因此已经致敏的CTL/ 或抗体能够很准确地攻击受染的肝细胞,从而清除病毒,机体在经过一过性的炎性损伤后,恢复痊愈. 通过我们的以上的研究对更好地了解慢性HBV携带及慢性重型乙型肝炎体内的HBV病毒株的状况,提供了对照资料,并从分子生物水平证实了急性自限性乙型肝炎的体内的病毒状况.
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    *本课题是国家自然基金资助,No.39270642

    通讯作者:张瑞

    4 参考文献

    [1] Junge U, Deinhardt F, Gerety RJ. Hepatitis B Aeademic press orlando, 1993:93-118

    [2] Askonas BA. Immunopathology and virus infectious. In: Thomas HC, Waters J eds. Immunology of liver disease, Kluwer, London, 1993:1-10

    [3] Phan BN, Klopchin K, Morigama T. Flow cytometry CD4+/ CD8+ ratio of liver-derived lymphocytes correlates with viral neplication in chronic hepatitis B. Clin Exp Immunol, 1994:97:403

    [4] Barnaba V, Franco A, Alberti A. Selective expansion of cytotoxic T lymphocytes with a CD4+, CD56+ surface phenotype and T helper type 1 profile of cytokine secretion in the liver of patients chronically infected with hepatitis B virus. J Immunol, 1994;152:3074

    收稿日期:1998-08-27, http://www.100md.com