凯息平口服液对H22荷瘤小鼠的抑瘤生长作用及抑瘤机理探讨
作者：张丽 严宣佐 周勇 葛东宇 赵离原 马学清 张文选
单位：北京中医药大学 北京100029
关键词：凯息平口服液；H22瘤株；移植瘤；腹水癌；细胞免疫；小鼠
北京中医药大学学报990524 摘要：凯息平口服液对小鼠移植性H22实体瘤有明显的抑瘤生长作用，27.0、18.0、9.0 g/kg剂量的抑瘤率分别47.6%、47.8%和33.8%；对H22腹水癌小鼠有一定的延长生存期的作用，强于阳性对照药复方天仙胶囊，且没有氟尿嘧啶(5-FU)所表现的毒副作用。对体外培养的H22细胞有一定程度的抑制作用，最低有效药物浓度可达25 mg/L，抑制作用可维持48 h以上。但对培养的脾T细胞，其剂量达800 mg/L时才表现出抑制增殖的作用。表明凯息平口服液对肿瘤细胞有独特的抑制作用，绝非细胞毒所致。实验还表明：凯息平口服液能增强荷瘤鼠的T、B淋巴细胞增殖能力；对自然杀伤细胞(NK)的活性也有明显的促进作用，同时明显增强腹腔巨噬细胞(MΦ)的吞噬活性，显示了其在抗肿瘤免疫中具有重要的作用。
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Discussion on the Tumor Growth Inhibition Action and Inhibitory
Mechanism of Kaixiping Oral Fluid on H22 Tumorigenic Mouse
Zhang Li(张 丽), Yan Xuanzuo(严宣佐), Zhou Yong(周 勇), et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT: Kaixiping oral fluid (KXP) has a markedly growth inhibition action on transplantation H22 tumor in mouse. The tumor inhibitory rates at the dosage of 27.0, 18.0 and 19.0g/kg are respectively 47.6%, 47.8%and 33.8%. The action of prolonging survival time of the mouse with H22 ascites tumor is stronger than the complex prescription "Tianxian" capsule which was taken as positive contrasting drug, and has no toxic_side effect expressed by 5-Fu. It has some inhibitory action on the H22 cell cultured in vitro, which the lowest effective drug concentration can reach 25mg/L and the time can last more than 48h. But for the T splenocyte, only when the dosage reaches 800mg/L does the proliferation inhibitory action work. It indicate that KXP has special inhibitory action on the tumor cell, which can not be induced by cytotoxicity. This experiment also show KXP can enhance proliferative ability of the T, B lymphocyte, markedly reinforce the activity of natural killer cell (NK) and the phagocytic activity of celiac macrophagocyte (MΦ), which prove KXP's importance in the antineoplastic immunity.
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KEY WORDS: Kaixiping oral fluid; H22 tumor cell; Transplantation tumor; Ascites tumor; Cellular immunity; Mouse
凯息平口服液是陕西省宝鸡市风翔肿瘤防治研究所研制开发的抗肿瘤纯中药制剂。动物实验表明其对小鼠S180肿瘤有明显的抑瘤生长作用[1]。本文进一步探讨凯息平口服液体内、体外对小鼠H22肿瘤的作用，并与化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)及抗肿瘤中药复方天仙胶囊进行疗效比较。
1 材料
1.1 动物
昆明种小鼠，雌性，体重18～22 g，卫生部生物制品研究所动物室提供。合格证号码：(京动字)880619037。本室动物室自然饲养。
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1.2 药物
凯息平口服液：由陕西省宝鸡市风翔肿瘤防治研究所提供，批号：930408；每mL含生药1.5 g；人平均用药量(生药)：0.9 g/kg(按人均为50 kg计算)；小鼠用药量定为4.5、9.0、18.0和27.0 g/kg，分别相当于临床人用药量的5、10、20、30倍；实验时无菌蒸馏水配制成所需剂量。复方天仙胶囊：中国吉林通化长白山制药厂出品，批号：930228；人平均用药量：0.06 g/kg(所含生药量不详)；小鼠用药量定为1.25 g/kg，相当于临床人用药量的20倍。氟尿嘧啶(5-FU)：上海海普药厂，批号：890704。
1.3 肿瘤细胞株
H22小鼠肝癌腹水型肿瘤细胞株：引自中日友好医院基础研究所。L929细胞株：小鼠纤维母细胞株，作为NK细胞的靶细胞。本室保存。
, 百拇医药
1.4 主要试剂
RPMI-1640培养液(Gibco产品)，LPS、ConA(均为Sigma产品)，3H-TdR(北京原子能研究所产品)，新生牛血清。
2 方法
2.1 动物分组
接种后[1]次日荷瘤小鼠随机分组，每组最少10只，除肿瘤对照组(经胃灌服等量蒸馏水)外，设复方天仙胶囊对照组或5-FU组、3个不同剂量的凯息平口服液治疗组，各组分别灌胃给予相应的药物，5-FU采用腹腔注射(ip)。每日1次，连续10 d。
2.2 抑瘤率、生命延长率及免疫器官指数
方法见文献[1]。
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2.3 体外实验
将凯息平口服液配至一定浓度，5 mol/L NaOH调pH至7.2，8磅20 min高压灭菌后用完全培养液配置到所需浓度。传代第7天的H22腹水癌细胞用RPMI-1640培养液调至2×108 L-1；脾细胞调细胞浓度至5×109 L-1。测T细胞功能时加ConA使其终浓度为5 mg/L。上述细胞0.1 mL/孔，加入96孔培养板中，实验孔补加一定浓度的凯息平药液0.1 mL，对照孔补加完全1640培养液0.1 mL，各设3复孔。肿瘤细胞培养至0、18、42 h，脾细胞、T细胞培养至64 h时，每孔加入3H-TdR(1μCi)，肿瘤细胞6 h，脾细胞、T细胞8 h后收集细胞，液闪计数仪测CPM值。
2.4 抗肿瘤免疫功能测定
荷瘤鼠取瘤称重之日，无菌制备脾细胞、巨噬细胞(MΦ)悬液，用加10%胎牛血清的RPMI-1640培养液将之配至一定浓度，采用细胞培养技术及3H-TdR掺入方法，参照文献[2]方法测定T、B细胞功能及NK细胞功能、MΦ吞噬功能。
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3 结果
3.1 凯息平口服液体内抗肿瘤作用的研究
3.1.1 凯息平口服液与5-FU抗肿瘤作用比较
实验结果表明：随着凯息平口服液应用剂量的增大，肿瘤周围出血、水肿现象逐渐减轻，肿瘤浸润范围及深度逐渐缩小、局限，瘤体易剥离，肿瘤重量明显减轻，抑瘤率逐渐提高；同时对小鼠的体重增长、活动状态，重要的免疫器官(胸腺、脾脏等)均无明显的影响。化疗药5-FU表现出十分明显的抑瘤作用，抑瘤率达74.9%，但小鼠体重明显减轻，胸腺、脾脏明显萎缩，指数下降,其毒副作用明显高于凯息平各剂量组(见表1、表2)。
表1 凯息平与5-FU对小鼠H22移植瘤抑瘤作用的比较(
±s) 组 别
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剂量/g/kg
给药途径及次数
动物数/只
瘤 重/g
抑瘤率/%
开始
结束
肿瘤对照组
灌胃0.5 mL×10
16
16
1.359±0.667
凯息平组
, 百拇医药
18.0
灌胃0.5 mL×10
16
16
0.765±0.261**
43.7
凯息平组
9.0
灌胃0.5 mL×10
16
16
0.927±0.453*
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31.8
凯息平组
4.5
灌胃0.5 mL×10
16
16
1.114±0.589
18.0
5-FU组
0.025
ip 0.5 mL×10
16
16
, 百拇医药
0.342±0.132***
74.9
注：与肿瘤对照组比较 *P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001表2 凯息平口服液对H22移植瘤小鼠体重及免疫器官的影响(±s) 组 别
剂量/g/kg
体重/g
脾脏指数
胸腺指数
开始
结束
, 百拇医药
肿瘤对照组
20.71±1.61
27.86±2.87
7.62±1.65
4.18±0.83
凯息平组
18.0
20.69±1.49
27.47±1.50
6.82±1.72
4.21±0.78
凯息平组
, 百拇医药
9.0
20.63±1.82
27.28±2.22
6.47±0.81
4.16±0.96
凯息平组
4.5
21.03±1.59
28.21±2.00
7.48±1.51
4.29±0.75
5-FU组
, 百拇医药
0.025
20.58±2.00
20.97±3.13**
4.23±0.65**
0.84±0.45**
注:与肿瘤对照组比较 **P<0.013.1.2 凯息平口服液与复方天仙胶囊对小鼠H22移植瘤的抑制作用比较
本实验共重复3次，凯息平3个剂量均有较明显地抑制H22移植瘤生长的作用，各治疗组均与肿瘤对照组有显著性差异。天仙胶囊对H22移植瘤也有一定的抑制作用，但与凯息平中剂量组比仍有显著性差异。提示凯息平口服液抑制H22肿瘤的效果明显强于复方天仙胶囊。见表3。
, 百拇医药
表3 凯息平口服液与天仙胶囊对H22移植瘤的抑瘤作用比较(±s) 组 别
剂量/g/kg
动物数/只
体重/g
瘤重/g
抑瘤率%
开始
结束
开始
结束
肿瘤对照组
, 百拇医药
30
30
20.82
26.58
1.543±0.785
凯息平组
27.0
30
29
20.27
27.16
0.808±0.344**
, http://www.100md.com 47.6
凯息平组
18.0
30
30
20.72
26.04
0.806±0.509**△
47.8
凯息平组
9.0
30
30
, 百拇医药
20.73
26.48
1.022±0.499**
33.8
天仙胶囊组
1.25
30
30
20.60
25.78
1.119±0.448*
27.5
, 百拇医药
注:与肿瘤对照组比 *P<0.05 **P<0.01；与天仙胶囊组比△P<0.053.1.3 凯息平口服液与复方天仙胶囊对H22腹水癌小鼠生存期影响的比较
凯息平口服液能不同程度地延长腹水癌小鼠的生存期，最佳一次生命延长率达38.4%，三批实验平均生命延长率见表4；天仙胶囊也有延长其生存期的作用，但不如凯息平口服液明显。
表4 凯息平口服液对H22腹水癌小鼠生命存活期的影响(±s) 组 别
剂量
动物数/只
体重/g
生存天数/d
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生命延长率/%
g/kg
开始
结束
开始
停药时
肿瘤对照组
32
31
17.61±1.10
35.03±4.96
14.90±2.83
凯息平组
, 百拇医药
27.0
32
31
17.42±0.81
34.89±5.10
16.87±3.19*
13.2
凯息平组
18.0
32
32
17.26±0.81
, http://www.100md.com
35.40±3.00
17.75±4.82**
14.3
凯息平组
9.0
31
30
17.59±1.17
35.41±2.67
15.45±2.55
3.7
天仙胶囊组
, 百拇医药
1.25
32
30
17.82±1.51
36.67±3.75
16.47±3.01*
10.5
注:与肿瘤对照组比 *P<0.05 **P<0.013.2 凯息平口服液对培养细胞的影响
3.2.1 凯息平口服液对培养的H22肿瘤细胞的作用
凯息平口服液对体外培养的H22肿瘤细胞有明显的抑制作用。浓度为400.00 mg/L时，各时间段肿瘤细胞的抑制率分别为23.8%、16.0%和22.8%。最低有效药物浓度低于25 mg/L。抑制作用可维持48 h以上。见表5。
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表5 凯息平口服液对H22腹水癌细胞的抑制作用(CPM值；±s) 组 别
剂量/mg/L
CPM值
6 h
24 h
48 h
凯息平组
400.00
13498±313**
61626±2290**
, 百拇医药
37875±2226**
凯息平组
200.00
13542±1141**
61920±908**
39070±3333*
凯息平组
100.00
13701±1079**
59141±1301**
, 百拇医药
42636±1725**
凯息平组
50.00
15745±227**
64265±208**
44509±2096*
凯息平组
25.00
16015±1628**
62296±3343**
, 百拇医药
46956±1765
凯息平组
12.50
16290±101*
—
—
凯息平组
6.25
16351±539
—
—
肿瘤对照组
—
, 百拇医药
17710±539
73402±1859
49089±684
注:与肿瘤对照组比 *P<0.05 **P<0.013.2.2 凯息平口服液对培养的脾脏淋巴细胞的作用
结果表明当凯息平口服液的最终浓度加大至400.00 mg/L时其对体外培养的脾脏淋巴细胞仍无明显的影响,当浓度进一步增大后对脾T细胞增殖有明显的抑制作用，药物浓度达1600.00 mg/L时，其对T细胞增殖的抑制率达45.65%。见表6。
表6 凯息平口服液对脾脏淋巴细胞的影响(CPM值；±s) 组 别
剂量/mg/L
, 百拇医药
脾脏细胞自然转化
脾脏T细胞转化
凯息平组
1600.00
404±64
44272±5331**
凯息平组
800.00
405±95
68630±2914*
凯息平组
400.00
, 百拇医药
510±181
80071±14936
凯息平组
200.00
423±55
74671±4105
凯息平组
100.00
466±44
81638±8354
凯息平组
50.00
, 百拇医药
401±48
85187±3799
凯息平组
25.00
366±32
80046±5394
凯息平组
12.50
447±72
84717±11838
凯息平组
6.25
, http://www.100md.com
498±71
82705±11831
T细胞组
—
414±48
81326±4493
注:与T细胞组比 *P<0.05 **P<0.013.3 凯息平口服液对荷瘤动物免疫功能的影响
结果表明，荷瘤组的T、B淋巴细胞转化功能明显低下，而凯息平口服液的3个剂量均能明显提高荷瘤小鼠的T、B细胞增殖能力；并明显增强荷瘤小鼠的NK细胞活性、腹腔MΦ的吞噬能力。见表7、表8。
表7 凯息平口服液对荷瘤小鼠T、B细胞的增强作用(CPM值；±s) 组 别
, 百拇医药
剂量/g/kg
n
T细胞增殖
B细胞增殖
正常对照组
-
8
11024±4287
7422±832
肿瘤对照组
-
10
295±22△△
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655±106△△
凯息平组
9
9
2049±287**
1241±137**
凯息平组
18
10
1644±233**
1043±121**
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凯息平组
27
11
5398±800**
1082±98**
注:与肿瘤对照组比 **P<0.01；与正常对照组比 △△P<0.01表8 凯息平口服液对荷瘤小鼠NK细胞、MΦ细胞活性的增强作用(±s) 组 别
剂量/g/kg
n
NK细胞活性
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(OD值)
杀伤率/%
MΦ细胞活性
(OD值)
L929细胞对照
0.145±0.009
肿瘤对照组
-
10
0.118±0.018△△
18.6
0.630±0.103
, http://www.100md.com
凯息平组
9
9
0.096±0.023***
33.8
1.013±0.119**
凯息平组
18
10
0.091±0.005***
37.2
1.216±0.189**
, http://www.100md.com
凯息平组
27
11
0.078±0.021***
46.2
0.829±0.202**
注:与肿瘤对照组比 **P<0.01 ***P<0.001;与L929细胞对照比 △△P<0.014 讨论
通过对小鼠肝癌细胞株的抑瘤实验证明，凯息平口服液有以下抗肿瘤作用：
(1)凯息平抑瘤作用强且稳定：体内用药可明显抑制移植瘤的生长，抑瘤作用稳定，重复性好；能不同程度地延长腹水癌小鼠的生存期。其作用虽不及5-FU但强于天仙胶囊。体外抗肿瘤实验表明其有明显抑制肿瘤细胞生长的作用。在1.25～400 mg/L的剂量范围内均明显抑制肿瘤细胞的繁殖。而相同的剂量却对正常小鼠脾脏细胞的自然转化和脾细胞对ConA的增殖能力无明显的影响。说明凯息平体外抑制肿瘤细胞生长的作用绝非药物的毒性作用。凯息平口服液在明显抑制肿瘤生长的同时不降低体重，对荷瘤动物的免疫器官指数无明显影响，明显优于化疗药物，病人可长期服用，有利于荷瘤机体的治疗。
, 百拇医药
(2)凯息平体外虽没有刺激T细胞增殖的作用但能明显增强荷瘤机体抗肿瘤免疫的功能：实验结果表明荷瘤小鼠的T、B淋巴细胞功能明显低下，这与文献报道一致[3]。一般认为随着肿瘤的不断增大，宿主淋巴细胞产生IL-2的能力不断下降，淋巴细胞对ConA的增殖反应能力也逐渐下降，而抑制性巨噬细胞和抑制性淋巴细胞功能增强，导致宿主细胞免疫功能的下降[4]，有学者认为是肿瘤诱发产生了抑制性巨噬细胞,它们抑制了机体的免疫功能[5，6]，而只有活化的巨噬细胞才有肿瘤杀伤功能[7]。本研究在检测荷瘤小鼠的T、B细胞功能时发现，肿瘤对照组培养系统中有大量的巨噬细胞存在，经凯息平治疗后培养系统中的巨噬细胞明显减少，而腹腔巨噬细胞功能明显增强，荷瘤小鼠的T、B细胞增殖能力明显增强，自然杀伤细胞的杀伤力明显增强，再一次表现出与5-FU的明显不同，展现了良好的临床应用开发前景。
本方中的汉三七、山豆根、山慈菇等具有清热解毒、活血化瘀、消散结、抑制肿瘤的作用；黄芪、红参具有大补元气、祛邪扶正的功效，诸药合用有可能通过激活免疫系统，促进机体的抗肿瘤效应。
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陕西省星火计划课题
作者简介：张丽，女，41岁，副研究员
参考文献
1 张 丽，周 勇，严宣佐，等.凯息平口服液对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用.北京中医药大学学报，1996，19(增刊)：71～73
2 张 丽，周 勇，马学清，等.防风多糖JBO-6对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用的实验研究.中国实验临床免疫学杂志，1997，9(5)：53～56
3 彭贵勇，袁爱力，蔡景修.荷瘤小鼠脾细胞淋转、NK和LAK活性.上海免疫学杂志，1994，14(4)：196～198
4 李义文，林云璐.带瘤小鼠淋巴细胞产生IL-2能力的动态变化及其机理.上海医科大学学报，1990，17(4)：241～246
, http://www.100md.com
5 Elgert KD， Farra WL. Supperressor cell activity in tumor-bearing mice: I Dualistic inhibition by supprressor T lymphocytes and macrophages.J Immunol,1987,120(4):1345
6 North J L.Down regulation of the antitumor immune response.Adv Cancer Res,1985,45:1
7 陆德源.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社.1995.209
收稿日期：1998-06-26, http://www.100md.com
单位：北京中医药大学 北京100029
关键词：凯息平口服液；H22瘤株；移植瘤；腹水癌；细胞免疫；小鼠
北京中医药大学学报990524 摘要：凯息平口服液对小鼠移植性H22实体瘤有明显的抑瘤生长作用，27.0、18.0、9.0 g/kg剂量的抑瘤率分别47.6%、47.8%和33.8%；对H22腹水癌小鼠有一定的延长生存期的作用，强于阳性对照药复方天仙胶囊，且没有氟尿嘧啶(5-FU)所表现的毒副作用。对体外培养的H22细胞有一定程度的抑制作用，最低有效药物浓度可达25 mg/L，抑制作用可维持48 h以上。但对培养的脾T细胞，其剂量达800 mg/L时才表现出抑制增殖的作用。表明凯息平口服液对肿瘤细胞有独特的抑制作用，绝非细胞毒所致。实验还表明：凯息平口服液能增强荷瘤鼠的T、B淋巴细胞增殖能力；对自然杀伤细胞(NK)的活性也有明显的促进作用，同时明显增强腹腔巨噬细胞(MΦ)的吞噬活性，显示了其在抗肿瘤免疫中具有重要的作用。
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Discussion on the Tumor Growth Inhibition Action and Inhibitory
Mechanism of Kaixiping Oral Fluid on H22 Tumorigenic Mouse
Zhang Li(张 丽), Yan Xuanzuo(严宣佐), Zhou Yong(周 勇), et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT: Kaixiping oral fluid (KXP) has a markedly growth inhibition action on transplantation H22 tumor in mouse. The tumor inhibitory rates at the dosage of 27.0, 18.0 and 19.0g/kg are respectively 47.6%, 47.8%and 33.8%. The action of prolonging survival time of the mouse with H22 ascites tumor is stronger than the complex prescription "Tianxian" capsule which was taken as positive contrasting drug, and has no toxic_side effect expressed by 5-Fu. It has some inhibitory action on the H22 cell cultured in vitro, which the lowest effective drug concentration can reach 25mg/L and the time can last more than 48h. But for the T splenocyte, only when the dosage reaches 800mg/L does the proliferation inhibitory action work. It indicate that KXP has special inhibitory action on the tumor cell, which can not be induced by cytotoxicity. This experiment also show KXP can enhance proliferative ability of the T, B lymphocyte, markedly reinforce the activity of natural killer cell (NK) and the phagocytic activity of celiac macrophagocyte (MΦ), which prove KXP's importance in the antineoplastic immunity.
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KEY WORDS: Kaixiping oral fluid; H22 tumor cell; Transplantation tumor; Ascites tumor; Cellular immunity; Mouse
凯息平口服液是陕西省宝鸡市风翔肿瘤防治研究所研制开发的抗肿瘤纯中药制剂。动物实验表明其对小鼠S180肿瘤有明显的抑瘤生长作用[1]。本文进一步探讨凯息平口服液体内、体外对小鼠H22肿瘤的作用，并与化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)及抗肿瘤中药复方天仙胶囊进行疗效比较。
1 材料
1.1 动物
昆明种小鼠，雌性，体重18～22 g，卫生部生物制品研究所动物室提供。合格证号码：(京动字)880619037。本室动物室自然饲养。
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1.2 药物
凯息平口服液：由陕西省宝鸡市风翔肿瘤防治研究所提供，批号：930408；每mL含生药1.5 g；人平均用药量(生药)：0.9 g/kg(按人均为50 kg计算)；小鼠用药量定为4.5、9.0、18.0和27.0 g/kg，分别相当于临床人用药量的5、10、20、30倍；实验时无菌蒸馏水配制成所需剂量。复方天仙胶囊：中国吉林通化长白山制药厂出品，批号：930228；人平均用药量：0.06 g/kg(所含生药量不详)；小鼠用药量定为1.25 g/kg，相当于临床人用药量的20倍。氟尿嘧啶(5-FU)：上海海普药厂，批号：890704。
1.3 肿瘤细胞株
H22小鼠肝癌腹水型肿瘤细胞株：引自中日友好医院基础研究所。L929细胞株：小鼠纤维母细胞株，作为NK细胞的靶细胞。本室保存。
, 百拇医药
1.4 主要试剂
RPMI-1640培养液(Gibco产品)，LPS、ConA(均为Sigma产品)，3H-TdR(北京原子能研究所产品)，新生牛血清。
2 方法
2.1 动物分组
接种后[1]次日荷瘤小鼠随机分组，每组最少10只，除肿瘤对照组(经胃灌服等量蒸馏水)外，设复方天仙胶囊对照组或5-FU组、3个不同剂量的凯息平口服液治疗组，各组分别灌胃给予相应的药物，5-FU采用腹腔注射(ip)。每日1次，连续10 d。
2.2 抑瘤率、生命延长率及免疫器官指数
方法见文献[1]。
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2.3 体外实验
将凯息平口服液配至一定浓度，5 mol/L NaOH调pH至7.2，8磅20 min高压灭菌后用完全培养液配置到所需浓度。传代第7天的H22腹水癌细胞用RPMI-1640培养液调至2×108 L-1；脾细胞调细胞浓度至5×109 L-1。测T细胞功能时加ConA使其终浓度为5 mg/L。上述细胞0.1 mL/孔，加入96孔培养板中，实验孔补加一定浓度的凯息平药液0.1 mL，对照孔补加完全1640培养液0.1 mL，各设3复孔。肿瘤细胞培养至0、18、42 h，脾细胞、T细胞培养至64 h时，每孔加入3H-TdR(1μCi)，肿瘤细胞6 h，脾细胞、T细胞8 h后收集细胞，液闪计数仪测CPM值。
2.4 抗肿瘤免疫功能测定
荷瘤鼠取瘤称重之日，无菌制备脾细胞、巨噬细胞(MΦ)悬液，用加10%胎牛血清的RPMI-1640培养液将之配至一定浓度，采用细胞培养技术及3H-TdR掺入方法，参照文献[2]方法测定T、B细胞功能及NK细胞功能、MΦ吞噬功能。
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3 结果
3.1 凯息平口服液体内抗肿瘤作用的研究
3.1.1 凯息平口服液与5-FU抗肿瘤作用比较
实验结果表明：随着凯息平口服液应用剂量的增大，肿瘤周围出血、水肿现象逐渐减轻，肿瘤浸润范围及深度逐渐缩小、局限，瘤体易剥离，肿瘤重量明显减轻，抑瘤率逐渐提高；同时对小鼠的体重增长、活动状态，重要的免疫器官(胸腺、脾脏等)均无明显的影响。化疗药5-FU表现出十分明显的抑瘤作用，抑瘤率达74.9%，但小鼠体重明显减轻，胸腺、脾脏明显萎缩，指数下降,其毒副作用明显高于凯息平各剂量组(见表1、表2)。
表1 凯息平与5-FU对小鼠H22移植瘤抑瘤作用的比较(
±s) 组 别, http://www.100md.com
剂量/g/kg
给药途径及次数
动物数/只
瘤 重/g
抑瘤率/%
开始
结束
肿瘤对照组
灌胃0.5 mL×10
16
16
1.359±0.667
凯息平组
, 百拇医药
18.0
灌胃0.5 mL×10
16
16
0.765±0.261**
43.7
凯息平组
9.0
灌胃0.5 mL×10
16
16
0.927±0.453*
, http://www.100md.com
31.8
凯息平组
4.5
灌胃0.5 mL×10
16
16
1.114±0.589
18.0
5-FU组
0.025
ip 0.5 mL×10
16
16
, 百拇医药
0.342±0.132***
74.9
注：与肿瘤对照组比较 *P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001表2 凯息平口服液对H22移植瘤小鼠体重及免疫器官的影响(
±s) 组 别剂量/g/kg
体重/g
脾脏指数
胸腺指数
开始
结束
, 百拇医药
肿瘤对照组
20.71±1.61
27.86±2.87
7.62±1.65
4.18±0.83
凯息平组
18.0
20.69±1.49
27.47±1.50
6.82±1.72
4.21±0.78
凯息平组
, 百拇医药
9.0
20.63±1.82
27.28±2.22
6.47±0.81
4.16±0.96
凯息平组
4.5
21.03±1.59
28.21±2.00
7.48±1.51
4.29±0.75
5-FU组
, 百拇医药
0.025
20.58±2.00
20.97±3.13**
4.23±0.65**
0.84±0.45**
注:与肿瘤对照组比较 **P<0.013.1.2 凯息平口服液与复方天仙胶囊对小鼠H22移植瘤的抑制作用比较
本实验共重复3次，凯息平3个剂量均有较明显地抑制H22移植瘤生长的作用，各治疗组均与肿瘤对照组有显著性差异。天仙胶囊对H22移植瘤也有一定的抑制作用，但与凯息平中剂量组比仍有显著性差异。提示凯息平口服液抑制H22肿瘤的效果明显强于复方天仙胶囊。见表3。
, 百拇医药
表3 凯息平口服液与天仙胶囊对H22移植瘤的抑瘤作用比较(
±s) 组 别剂量/g/kg
动物数/只
体重/g
瘤重/g
抑瘤率%
开始
结束
开始
结束
肿瘤对照组
, 百拇医药
30
30
20.82
26.58
1.543±0.785
凯息平组
27.0
30
29
20.27
27.16
0.808±0.344**
, http://www.100md.com 47.6
凯息平组
18.0
30
30
20.72
26.04
0.806±0.509**△
47.8
凯息平组
9.0
30
30
, 百拇医药
20.73
26.48
1.022±0.499**
33.8
天仙胶囊组
1.25
30
30
20.60
25.78
1.119±0.448*
27.5
, 百拇医药
注:与肿瘤对照组比 *P<0.05 **P<0.01；与天仙胶囊组比△P<0.053.1.3 凯息平口服液与复方天仙胶囊对H22腹水癌小鼠生存期影响的比较
凯息平口服液能不同程度地延长腹水癌小鼠的生存期，最佳一次生命延长率达38.4%，三批实验平均生命延长率见表4；天仙胶囊也有延长其生存期的作用，但不如凯息平口服液明显。
表4 凯息平口服液对H22腹水癌小鼠生命存活期的影响(
±s) 组 别剂量
动物数/只
体重/g
生存天数/d
, http://www.100md.com
生命延长率/%
g/kg
开始
结束
开始
停药时
肿瘤对照组
32
31
17.61±1.10
35.03±4.96
14.90±2.83
凯息平组
, 百拇医药
27.0
32
31
17.42±0.81
34.89±5.10
16.87±3.19*
13.2
凯息平组
18.0
32
32
17.26±0.81
, http://www.100md.com
35.40±3.00
17.75±4.82**
14.3
凯息平组
9.0
31
30
17.59±1.17
35.41±2.67
15.45±2.55
3.7
天仙胶囊组
, 百拇医药
1.25
32
30
17.82±1.51
36.67±3.75
16.47±3.01*
10.5
注:与肿瘤对照组比 *P<0.05 **P<0.013.2 凯息平口服液对培养细胞的影响
3.2.1 凯息平口服液对培养的H22肿瘤细胞的作用
凯息平口服液对体外培养的H22肿瘤细胞有明显的抑制作用。浓度为400.00 mg/L时，各时间段肿瘤细胞的抑制率分别为23.8%、16.0%和22.8%。最低有效药物浓度低于25 mg/L。抑制作用可维持48 h以上。见表5。
, http://www.100md.com
表5 凯息平口服液对H22腹水癌细胞的抑制作用(CPM值；
±s) 组 别剂量/mg/L
CPM值
6 h
24 h
48 h
凯息平组
400.00
13498±313**
61626±2290**
, 百拇医药
37875±2226**
凯息平组
200.00
13542±1141**
61920±908**
39070±3333*
凯息平组
100.00
13701±1079**
59141±1301**
, 百拇医药
42636±1725**
凯息平组
50.00
15745±227**
64265±208**
44509±2096*
凯息平组
25.00
16015±1628**
62296±3343**
, 百拇医药
46956±1765
凯息平组
12.50
16290±101*
—
—
凯息平组
6.25
16351±539
—
—
肿瘤对照组
—
, 百拇医药
17710±539
73402±1859
49089±684
注:与肿瘤对照组比 *P<0.05 **P<0.013.2.2 凯息平口服液对培养的脾脏淋巴细胞的作用
结果表明当凯息平口服液的最终浓度加大至400.00 mg/L时其对体外培养的脾脏淋巴细胞仍无明显的影响,当浓度进一步增大后对脾T细胞增殖有明显的抑制作用，药物浓度达1600.00 mg/L时，其对T细胞增殖的抑制率达45.65%。见表6。
表6 凯息平口服液对脾脏淋巴细胞的影响(CPM值；
±s) 组 别剂量/mg/L
, 百拇医药
脾脏细胞自然转化
脾脏T细胞转化
凯息平组
1600.00
404±64
44272±5331**
凯息平组
800.00
405±95
68630±2914*
凯息平组
400.00
, 百拇医药
510±181
80071±14936
凯息平组
200.00
423±55
74671±4105
凯息平组
100.00
466±44
81638±8354
凯息平组
50.00
, 百拇医药
401±48
85187±3799
凯息平组
25.00
366±32
80046±5394
凯息平组
12.50
447±72
84717±11838
凯息平组
6.25
, http://www.100md.com
498±71
82705±11831
T细胞组
—
414±48
81326±4493
注:与T细胞组比 *P<0.05 **P<0.013.3 凯息平口服液对荷瘤动物免疫功能的影响
结果表明，荷瘤组的T、B淋巴细胞转化功能明显低下，而凯息平口服液的3个剂量均能明显提高荷瘤小鼠的T、B细胞增殖能力；并明显增强荷瘤小鼠的NK细胞活性、腹腔MΦ的吞噬能力。见表7、表8。
表7 凯息平口服液对荷瘤小鼠T、B细胞的增强作用(CPM值；
±s) 组 别, 百拇医药
剂量/g/kg
n
T细胞增殖
B细胞增殖
正常对照组
-
8
11024±4287
7422±832
肿瘤对照组
-
10
295±22△△
, http://www.100md.com
655±106△△
凯息平组
9
9
2049±287**
1241±137**
凯息平组
18
10
1644±233**
1043±121**
, http://www.100md.com
凯息平组
27
11
5398±800**
1082±98**
注:与肿瘤对照组比 **P<0.01；与正常对照组比 △△P<0.01表8 凯息平口服液对荷瘤小鼠NK细胞、MΦ细胞活性的增强作用(
±s) 组 别剂量/g/kg
n
NK细胞活性
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(OD值)
杀伤率/%
MΦ细胞活性
(OD值)
L929细胞对照
0.145±0.009
肿瘤对照组
-
10
0.118±0.018△△
18.6
0.630±0.103
, http://www.100md.com
凯息平组
9
9
0.096±0.023***
33.8
1.013±0.119**
凯息平组
18
10
0.091±0.005***
37.2
1.216±0.189**
, http://www.100md.com
凯息平组
27
11
0.078±0.021***
46.2
0.829±0.202**
注:与肿瘤对照组比 **P<0.01 ***P<0.001;与L929细胞对照比 △△P<0.014 讨论
通过对小鼠肝癌细胞株的抑瘤实验证明，凯息平口服液有以下抗肿瘤作用：
(1)凯息平抑瘤作用强且稳定：体内用药可明显抑制移植瘤的生长，抑瘤作用稳定，重复性好；能不同程度地延长腹水癌小鼠的生存期。其作用虽不及5-FU但强于天仙胶囊。体外抗肿瘤实验表明其有明显抑制肿瘤细胞生长的作用。在1.25～400 mg/L的剂量范围内均明显抑制肿瘤细胞的繁殖。而相同的剂量却对正常小鼠脾脏细胞的自然转化和脾细胞对ConA的增殖能力无明显的影响。说明凯息平体外抑制肿瘤细胞生长的作用绝非药物的毒性作用。凯息平口服液在明显抑制肿瘤生长的同时不降低体重，对荷瘤动物的免疫器官指数无明显影响，明显优于化疗药物，病人可长期服用，有利于荷瘤机体的治疗。
, 百拇医药
(2)凯息平体外虽没有刺激T细胞增殖的作用但能明显增强荷瘤机体抗肿瘤免疫的功能：实验结果表明荷瘤小鼠的T、B淋巴细胞功能明显低下，这与文献报道一致[3]。一般认为随着肿瘤的不断增大，宿主淋巴细胞产生IL-2的能力不断下降，淋巴细胞对ConA的增殖反应能力也逐渐下降，而抑制性巨噬细胞和抑制性淋巴细胞功能增强，导致宿主细胞免疫功能的下降[4]，有学者认为是肿瘤诱发产生了抑制性巨噬细胞,它们抑制了机体的免疫功能[5，6]，而只有活化的巨噬细胞才有肿瘤杀伤功能[7]。本研究在检测荷瘤小鼠的T、B细胞功能时发现，肿瘤对照组培养系统中有大量的巨噬细胞存在，经凯息平治疗后培养系统中的巨噬细胞明显减少，而腹腔巨噬细胞功能明显增强，荷瘤小鼠的T、B细胞增殖能力明显增强，自然杀伤细胞的杀伤力明显增强，再一次表现出与5-FU的明显不同，展现了良好的临床应用开发前景。
本方中的汉三七、山豆根、山慈菇等具有清热解毒、活血化瘀、消散结、抑制肿瘤的作用；黄芪、红参具有大补元气、祛邪扶正的功效，诸药合用有可能通过激活免疫系统，促进机体的抗肿瘤效应。
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陕西省星火计划课题
作者简介：张丽，女，41岁，副研究员
参考文献
1 张 丽，周 勇，严宣佐，等.凯息平口服液对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用.北京中医药大学学报，1996，19(增刊)：71～73
2 张 丽，周 勇，马学清，等.防风多糖JBO-6对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用的实验研究.中国实验临床免疫学杂志，1997，9(5)：53～56
3 彭贵勇，袁爱力，蔡景修.荷瘤小鼠脾细胞淋转、NK和LAK活性.上海免疫学杂志，1994，14(4)：196～198
4 李义文，林云璐.带瘤小鼠淋巴细胞产生IL-2能力的动态变化及其机理.上海医科大学学报，1990，17(4)：241～246
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5 Elgert KD， Farra WL. Supperressor cell activity in tumor-bearing mice: I Dualistic inhibition by supprressor T lymphocytes and macrophages.J Immunol,1987,120(4):1345
6 North J L.Down regulation of the antitumor immune response.Adv Cancer Res,1985,45:1
7 陆德源.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社.1995.209
收稿日期：1998-06-26, http://www.100md.com