微波在肾活检组织染色中的应用
作者：朱茂艳 陈惠萍
单位：南京军区南京总医院 解放军肾脏病研究所(南 京，210002)
关键词：微波；肾活检组织；染色
肾脏病与透析肾移值杂志990527
肾活检组织病理(光镜)检查在肾活检病理诊断中具有重要价值，通过特殊染色可以显现标本中特殊的物质如基底膜、免疫复合物等，然而，常规的特殊染色制作比较费时，尤其是过碘酸六胺银(Periodic Acid-Silver Methenamine，PASM)染色，控制不好往往失败。我们将微波辐射技术应用于肾活检组织的过碘酸Schiff反应(Periodic Acid-Schiff Reaction，PAS)及PASM染色中，证明具有快速省时，染色效果好，不易脱片等优点，现介绍如下：
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 肾组织(肾穿刺获得)，58℃纯净石蜡；松下NN-5208型微波炉(输出功率600W)。
1.2 试剂
1.2.1 Schiff液：同常规Schiff液配制。
1.2.2 环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)：
5%硝酸银20.0ml
3%环六亚甲基四胺液400.0ml
环六亚甲基四胺-硝酸银液(工作液)：
环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)45.0ml，5%硼砂液5.0ml
1.2.3 混合红染液：
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变色酸2R(chicmolocps 2R) 0.6g
亮绿SF 0.3g
蒸馏水 100ml
磷钨酸 0.8g
冰醋酸 1.0ml
1%酸性品红 少许(需染片后确定)
1.3 方法
1.3.1 制片 肾穿刺组织经升汞-苦味酸混合固定液固定后，常规酒精脱水、氯仿透明、石蜡浸透、包埋，切片厚2μm。
1.3.2 染色
(1)PAS染色[1]：①染色前将切片置微波辐射，中档2～3min，再入70～80℃烤箱中5min，常规脱蜡入水；②切片入0.5%过碘酸液，放入带气孔的塑料染色缸中置微波高档30s；③蒸馏水轻洗，入Schiff液中，置微波炉中档30s；④流水冲洗10min(切片转为玫瑰红色)；④蒸馏水轻洗切片，苏木素复染30s～2min，水洗兰化(必要时以1%盐酸酒精分化)；⑤常规脱水、透明、封片。
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(2)PASM染色：①同PAS法的步骤①；②切片入30%含碘(3%)酒精5min以脱汞，蒸馏水洗，入5%硫代硫酸钠5min以脱碘；③蒸馏水洗，入1%过碘酸氧化15min(室温)；④蒸馏水洗，入环六亚甲基四胺-硝酸银工作液，微波中档1min左右(染色过程镜下控制，可在温蒸馏水中轻洗切片以便光镜下检查)；⑤蒸馏水轻洗(如银过染，则室温下以0.25%的氯化金调色10s)，入3%的硫代硫酸钠溶液中数秒～2min；⑥蒸馏水轻洗，1%醋酸中过一下，入混合红液20min，1%醋酸水洗，入1%亮绿液，镜下控制，快速脱水(甩片)；⑦常规透明、封片。
2 结 果
PAS染色：基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性(玻璃样)、淀粉样物质等可显示阳性反应，呈紫红色。
PASM染色：基底膜及系膜基质呈棕黑色，免疫复合物呈红色。
与常规法相比组织切片颜色鲜艳，背景清晰。
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3 讨 论
微波是一种高频电磁波，近来已成功地应用于光镜、电镜及免疫学的研究，特别是在组织固定、脱水及免疫组织化学技术中的应用已日益广泛[2～6]。我们采用微波辐射技术与常规PAS、PASM染色相结合的方法，在肾活检组织的特殊染色中也取得了良好的效果。与常规法相比，微波染色具有以下优点：①防止脱片。肾组织特殊染色时切片常易脱落，特别在PASM染色时，因银染时间过长常导致组织掉片，造成制片失败。采用微波辐射技术进行烤片，则可避免此类现象的发生；②标本制备时间缩短，包括烤片及染色时间。采用微波技术后，烤片时间可由40min缩短至7min左右；由于微波辐射使分子运动速度加快，产生大量的热，促进组织内试剂的扩散，从而使染色时间也缩短，PAS染色可缩短20min左右，PASM染色则将时间缩短了40min左右；③改进染色效果。经微波辐射染色的组织切片背景十分清晰，颜色鲜艳，且易着色。总之，微波辐射用于肾组织特殊染色具有快速简便、染色效果好、背景清晰、不易脱片等优点，易于推广应用。
, 百拇医药
实践中我们体会到制片过程中需注意以下几点：①Schiff液用于PAS微波染色后应丢弃；②环六亚甲基四胺-硝酸银(贮备液)应贮存在4℃冰箱中，最多保留一星期，工作液应新鲜配制，并在使用前混合；③如银过染可用氯化金调色，氯化金溶液可反复使用，贮存于4℃冰箱；④采用耐微波的塑料染色缸，盖子上留有一小孔，入微波炉时将盖子拧松，以防密封使染色缸爆炸。
参考文献
1 Brinn NT.Rapid metallic histolog ical staining using the microwave oven.J Histotechnol，1983，6：125
2 徐光鼎.微波技术在石蜡病理组织块制备中的应用.中华病理学杂志，1988， 17：110
3 Mayers CP.Histological fixation by mic rowave heating.J Clin Pathol，1970，23：273
, http://www.100md.com
4 Leong AS，Daymon ME，Milios J et al.M icrowave irradiati on as a form of fixation for light and e lectron microscopy.J Pathol，1985，146：313
5 Boon ME，Kok LP，Ouwerkerk NE et al.Mic rowave-stimulated diffusion for fast processing of tissue：R educed dehydrating，clearing and impregnating times.Histopathology，1986，10：303
6 马大烈，詹溶洲，黄 玲.快速微波免疫组织化学染色技术.中华病理学杂志，1992，21(1)：56
(1999-09-09收稿), http://www.100md.com
单位：南京军区南京总医院 解放军肾脏病研究所(南 京，210002)
关键词：微波；肾活检组织；染色
肾脏病与透析肾移值杂志990527
肾活检组织病理(光镜)检查在肾活检病理诊断中具有重要价值，通过特殊染色可以显现标本中特殊的物质如基底膜、免疫复合物等，然而，常规的特殊染色制作比较费时，尤其是过碘酸六胺银(Periodic Acid-Silver Methenamine，PASM)染色，控制不好往往失败。我们将微波辐射技术应用于肾活检组织的过碘酸Schiff反应(Periodic Acid-Schiff Reaction，PAS)及PASM染色中，证明具有快速省时，染色效果好，不易脱片等优点，现介绍如下：
1 材料和方法
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1.1 材料 肾组织(肾穿刺获得)，58℃纯净石蜡；松下NN-5208型微波炉(输出功率600W)。
1.2 试剂
1.2.1 Schiff液：同常规Schiff液配制。
1.2.2 环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)：
5%硝酸银20.0ml
3%环六亚甲基四胺液400.0ml
环六亚甲基四胺-硝酸银液(工作液)：
环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)45.0ml，5%硼砂液5.0ml
1.2.3 混合红染液：
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变色酸2R(chicmolocps 2R) 0.6g
亮绿SF 0.3g
蒸馏水 100ml
磷钨酸 0.8g
冰醋酸 1.0ml
1%酸性品红 少许(需染片后确定)
1.3 方法
1.3.1 制片 肾穿刺组织经升汞-苦味酸混合固定液固定后，常规酒精脱水、氯仿透明、石蜡浸透、包埋，切片厚2μm。
1.3.2 染色
(1)PAS染色[1]：①染色前将切片置微波辐射，中档2～3min，再入70～80℃烤箱中5min，常规脱蜡入水；②切片入0.5%过碘酸液，放入带气孔的塑料染色缸中置微波高档30s；③蒸馏水轻洗，入Schiff液中，置微波炉中档30s；④流水冲洗10min(切片转为玫瑰红色)；④蒸馏水轻洗切片，苏木素复染30s～2min，水洗兰化(必要时以1%盐酸酒精分化)；⑤常规脱水、透明、封片。
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(2)PASM染色：①同PAS法的步骤①；②切片入30%含碘(3%)酒精5min以脱汞，蒸馏水洗，入5%硫代硫酸钠5min以脱碘；③蒸馏水洗，入1%过碘酸氧化15min(室温)；④蒸馏水洗，入环六亚甲基四胺-硝酸银工作液，微波中档1min左右(染色过程镜下控制，可在温蒸馏水中轻洗切片以便光镜下检查)；⑤蒸馏水轻洗(如银过染，则室温下以0.25%的氯化金调色10s)，入3%的硫代硫酸钠溶液中数秒～2min；⑥蒸馏水轻洗，1%醋酸中过一下，入混合红液20min，1%醋酸水洗，入1%亮绿液，镜下控制，快速脱水(甩片)；⑦常规透明、封片。
2 结 果
PAS染色：基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性(玻璃样)、淀粉样物质等可显示阳性反应，呈紫红色。
PASM染色：基底膜及系膜基质呈棕黑色，免疫复合物呈红色。
与常规法相比组织切片颜色鲜艳，背景清晰。
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3 讨 论
微波是一种高频电磁波，近来已成功地应用于光镜、电镜及免疫学的研究，特别是在组织固定、脱水及免疫组织化学技术中的应用已日益广泛[2～6]。我们采用微波辐射技术与常规PAS、PASM染色相结合的方法，在肾活检组织的特殊染色中也取得了良好的效果。与常规法相比，微波染色具有以下优点：①防止脱片。肾组织特殊染色时切片常易脱落，特别在PASM染色时，因银染时间过长常导致组织掉片，造成制片失败。采用微波辐射技术进行烤片，则可避免此类现象的发生；②标本制备时间缩短，包括烤片及染色时间。采用微波技术后，烤片时间可由40min缩短至7min左右；由于微波辐射使分子运动速度加快，产生大量的热，促进组织内试剂的扩散，从而使染色时间也缩短，PAS染色可缩短20min左右，PASM染色则将时间缩短了40min左右；③改进染色效果。经微波辐射染色的组织切片背景十分清晰，颜色鲜艳，且易着色。总之，微波辐射用于肾组织特殊染色具有快速简便、染色效果好、背景清晰、不易脱片等优点，易于推广应用。
, 百拇医药
实践中我们体会到制片过程中需注意以下几点：①Schiff液用于PAS微波染色后应丢弃；②环六亚甲基四胺-硝酸银(贮备液)应贮存在4℃冰箱中，最多保留一星期，工作液应新鲜配制，并在使用前混合；③如银过染可用氯化金调色，氯化金溶液可反复使用，贮存于4℃冰箱；④采用耐微波的塑料染色缸，盖子上留有一小孔，入微波炉时将盖子拧松，以防密封使染色缸爆炸。
参考文献
1 Brinn NT.Rapid metallic histolog ical staining using the microwave oven.J Histotechnol，1983，6：125
2 徐光鼎.微波技术在石蜡病理组织块制备中的应用.中华病理学杂志，1988， 17：110
3 Mayers CP.Histological fixation by mic rowave heating.J Clin Pathol，1970，23：273
, http://www.100md.com
4 Leong AS，Daymon ME，Milios J et al.M icrowave irradiati on as a form of fixation for light and e lectron microscopy.J Pathol，1985，146：313
5 Boon ME，Kok LP，Ouwerkerk NE et al.Mic rowave-stimulated diffusion for fast processing of tissue：R educed dehydrating，clearing and impregnating times.Histopathology，1986，10：303
6 马大烈，詹溶洲，黄 玲.快速微波免疫组织化学染色技术.中华病理学杂志，1992，21(1)：56
(1999-09-09收稿), http://www.100md.com