肝癌患者免疫功能变化及其影响因素
作者：彭贵勇 蔡景修 袁爱力
单位：彭贵勇 蔡景修 第三军医大学西南医院(400038)；袁爱力 第一军医大学南方医院 (400038)
关键词：
重庆医学990612 迄今研究表明，恶性肿瘤患者的IL-2活性、IL-2R表达及T细胞亚群可明显变化[1～2]。然而对原发性肝癌的研究报道较少。本文观察了原发性肝癌患者的IL-2活性、IL-2R表达及T细胞亚群变化及其影响因素，以进一步了解肝癌患者的细胞免疫功能状态，探讨其影响因素。
1 材料和方法
1.1 研究对象：原发性肝癌患者36例，男31例，女5例，年龄33～69岁，均经病理或临床确诊。其中AFP(+)23例，，AFP(-)13例；HBsAg(+)25例，HBsAg(-)11例；AFP(+)伴HBsAg(+)14例；肿瘤直径大于5cm24例，肿瘤直径小于或等于5cm12例；有远处转移19例，无远处转移17例。健康献血员30例作对照，男27例，女3例，年龄27～46岁。
, 百拇医药
1.2 IL-2的诱生：采用Ficoll-Hypaque密度梯度分离法分离外周血单个核细胞(PBMC)。取PBMC1×106/ml于24孔培养板中，再加入PHA(广州医药工业研究所)10μg。置于37℃、5%CO2孵育中培养48小时，取上清放入-20℃冰箱备用。细胞涂片测IL-2R。
1.3 IL-2活性检测：用CTLL细胞(本校免疫教研室提供)按Gillis方法进行[3]。用生长指数(GI)代表IL-2活性。
1.4 T细胞亚群及IL-2R表达的检测：采用ABC法，按杨荫昌方法进行[4]。鼠抗人淋巴细胞表面抗原单克隆抗体(CD3、CD4、CD8和Tac)为武汉生物制品研究所产品。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 肝癌患者及正常人IL-2活性、IL-2R及T细胞亚群比较：肝癌患者IL-2活性及IL-2R表达明显低下，T3、T4阳性细胞百分率降低，T8百分率升高，T4/T8比值下降，与正常人比均有明显差异，P<0.01。表1
表1 肝癌患者及正常IL-2活性、IL-2R及T细胞亚群比较(
±S)
n
IL-2活性(GI)
IL-2R(%)
T3(%)
T4(%)
, 百拇医药
T8
T4/T8
正常人
30
63.4±7.8
14.3±4.6
74.6±4.4
47.8±3.2
25.4±2.6
1.88±0.12
HCC
36
, 百拇医药
50.6±8.2△
8.4±3.7△
61.6±4.6△
31.8±4.4△
34.6±3.5△
0.91±0.16△
△：P<0.012.2 AFP和HBsAg与IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8的关系：AFP(+)组与AFP(-)组比及HBsAg(+)组与HBsAg(-)组比，此三个指标均无明显差异，P>0.05。AFP(+)伴HBsAg(+)组与上述四组比较，IL-2活性降低更明显，P<0.05，IL-2R表达及T4/T8比值无明显差异，P>0.05。表2
, http://www.100md.com
表2 AFP、HBsAg与肝癌患者IL-2活性、IL-2R及T4/T8的关系(±S)
n
IL-2活性(GI)
IL-2R(%)
T4/T8
AFP(+)组
23
49.8±7.4
8.2±3.8
, 百拇医药
0.93±0.14
AFP(-)组
13
51.3±8.6△
8.5±3.9△
0.89±0.17△
HBsAg(+)组
25
50.4±7.2
8.3±4.1
0.90±0.14
, 百拇医药
HBsAg(-)组
11
49.2±8.9▲
8.4±4.2▲
0.91±0.19▲
AFP(+)+HBsAg(+)组
14
43.4±6.7○
8.3±3.4●
0.88±0.18●
, 百拇医药
△：与AFP(+)比P>0.05；▲：与HBsAg(+)比P>0.05；○：与各组比P<0.05；●：与各组比P>0.05表3 肿瘤大小及远处转移与肝癌患者IL-2活性、IL-2R及T4/T8的关系(±S)
n
IL-2活性(GI)
IL-2R(%)
T4/T8
直径>5cm组(a)
24
47.4±7.2
, http://www.100md.com
7.9±3.5
0.81±0.14
直径≤5cm组(b)
12
55.6±7.5△
9.6±4.3△
1.04±0.15△
有远处转移组(c)
19
45.2±7.8
7.9±3.2
, 百拇医药
0.83±0.12
无远处转移组(d)
17
56.3±7.6△
9.5±3.9○
○1.02±0.14○
△：与a组比P<0.05；▲：与c组比P<0.01；○：与c组比P<0.052.3 肿瘤大小及有无远处转移与IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8的关系：肿瘤直径大于5cm组此三项指标明显低于肿瘤直径小于或等于5cm组，P<0.05。有远处转移组此三项指标也明显低于无远处转移组，P<0.01及0.05。表3
, 百拇医药
3 讨 论
一般认为T淋巴细胞在单核巨噬细胞的协助下，经T细胞刺激剂激活，细胞从G0相进入G1相，G1晚期相的细胞开始分泌IL-2或/和在细胞表面表达IL-2R。一旦细胞表面的IL-2R与IL-2结合，细胞便进入S相，合成DNA，细胞增殖。同时IL-2还可促进NK活性、诱生LAK细胞、促进B细胞分泌抗体。根据分化抗原不同，通常可将人T细胞分为T4和T8两个主要亚群，它们是主要的免疫调节细胞，对机体免疫应答的调控和维持免疫稳定具有重要作用。近年来对肿瘤患者细胞免疫功能研究较多，有资料表明肝癌患者的细胞免疫功能也明显低下[5～6]。本文同时观察了肝癌患者细胞免疫功能的三项指标，结果表明，肝癌患者IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8比值明显降低，进一步证明了肝癌患者细胞免疫功能全面低下。
, 百拇医药
现已发现许多肿瘤患者的血清中存在多种免疫抑制因子，肿瘤患者细胞免疫功能低下与这些免疫抑制因子的存在有关。目前对肝癌患者细胞免疫功能影响因素的研究较少。有人观察了AFP和HBsAg与肝癌患者IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8比值的关系，结果显示AFP及HBsAg单独对肝癌患者上述三项指标无进一步影响，二者共同作用则可进一步抑制IL-2活性。提示单个的免疫抑制因子对肝癌患者细胞免疫功能影响较弱，肝癌患者免疫功能低下可能是多种免疫抑制因子共同作用的结果。这方面的研究还有待于进一步深入。
细胞免疫功能制约着肿瘤的发生和发展，有人证实肝癌患者病情愈重、肿瘤直径愈大，则NK活性及T4/T8比值愈低[8]。因此我们还观察了小肝癌(直径≤5cm)和大肝癌(直径>5cm)的细胞免疫功能及肝癌远处转移与细胞免疫功能的关系。结果显示大肝癌患者及有远处转移的肝癌患者之IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8比值下降更明显。说明肝癌大小及有无远处转移与细胞免疫功能有密切关系。临床上的如何改善细胞免疫功能是肿瘤治疗的重要环节。
, 百拇医药
参考文献
1 Sahraoui Y.IL-2 production and IL-2R expression by human immature leukemic T cell.Leukemia，1992，6(10)：1025
2 沈丽英，苏成芝.特异性转移因子对肺癌的免疫治疗.解放军医学杂志，1990，3：198
3 Gillis S,Ferm M,Winny O,et al.T cell growth factor:Parameters of production and a quantitative microassay for activity.J Immunol，1978，120(6)：2027
4 杨荫昌，耿同超.应用单克隆抗体及ABC法检测淋巴细胞亚群.北京医学，1989，11(2)：94
, 百拇医药
5 Chang ML,Liu HW,Chang WY.Natural killer cell activity in patients with hepatocellular carinoma relative to early development and tumor invasion.Cancer,1990，65(4)：926
6 Saibara T,Onishi S,Sakaeda H,et al.Defective function of lymphodine activated killer cells in patients with hepatocellular carcinoma.Hapatology，1989，9(3)：471
7 许卫民，牛立国，王易伦，等.特异性转移因子对人AFP抑制鼠脾淋巴细胞生长的拮抗效应.中国免疫学杂志，1991，7(4)：235
8 郭亚军，吴孟超，刘广洛.肝癌患者外周血和癌组织中T细胞亚群、NK、ADCC效应变化及其相关性研究.临床肝胆病杂志，1990，6(2)：64, http://www.100md.com
单位：彭贵勇 蔡景修 第三军医大学西南医院(400038)；袁爱力 第一军医大学南方医院 (400038)
关键词：
重庆医学990612 迄今研究表明，恶性肿瘤患者的IL-2活性、IL-2R表达及T细胞亚群可明显变化[1～2]。然而对原发性肝癌的研究报道较少。本文观察了原发性肝癌患者的IL-2活性、IL-2R表达及T细胞亚群变化及其影响因素，以进一步了解肝癌患者的细胞免疫功能状态，探讨其影响因素。
1 材料和方法
1.1 研究对象：原发性肝癌患者36例，男31例，女5例，年龄33～69岁，均经病理或临床确诊。其中AFP(+)23例，，AFP(-)13例；HBsAg(+)25例，HBsAg(-)11例；AFP(+)伴HBsAg(+)14例；肿瘤直径大于5cm24例，肿瘤直径小于或等于5cm12例；有远处转移19例，无远处转移17例。健康献血员30例作对照，男27例，女3例，年龄27～46岁。
, 百拇医药
1.2 IL-2的诱生：采用Ficoll-Hypaque密度梯度分离法分离外周血单个核细胞(PBMC)。取PBMC1×106/ml于24孔培养板中，再加入PHA(广州医药工业研究所)10μg。置于37℃、5%CO2孵育中培养48小时，取上清放入-20℃冰箱备用。细胞涂片测IL-2R。
1.3 IL-2活性检测：用CTLL细胞(本校免疫教研室提供)按Gillis方法进行[3]。用生长指数(GI)代表IL-2活性。
1.4 T细胞亚群及IL-2R表达的检测：采用ABC法，按杨荫昌方法进行[4]。鼠抗人淋巴细胞表面抗原单克隆抗体(CD3、CD4、CD8和Tac)为武汉生物制品研究所产品。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 肝癌患者及正常人IL-2活性、IL-2R及T细胞亚群比较：肝癌患者IL-2活性及IL-2R表达明显低下，T3、T4阳性细胞百分率降低，T8百分率升高，T4/T8比值下降，与正常人比均有明显差异，P<0.01。表1
表1 肝癌患者及正常IL-2活性、IL-2R及T细胞亚群比较(
±S)n
IL-2活性(GI)
IL-2R(%)
T3(%)
T4(%)
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T8
T4/T8
正常人
30
63.4±7.8
14.3±4.6
74.6±4.4
47.8±3.2
25.4±2.6
1.88±0.12
HCC
36
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50.6±8.2△
8.4±3.7△
61.6±4.6△
31.8±4.4△
34.6±3.5△
0.91±0.16△
△：P<0.012.2 AFP和HBsAg与IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8的关系：AFP(+)组与AFP(-)组比及HBsAg(+)组与HBsAg(-)组比，此三个指标均无明显差异，P>0.05。AFP(+)伴HBsAg(+)组与上述四组比较，IL-2活性降低更明显，P<0.05，IL-2R表达及T4/T8比值无明显差异，P>0.05。表2
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表2 AFP、HBsAg与肝癌患者IL-2活性、IL-2R及T4/T8的关系(
±S)n
IL-2活性(GI)
IL-2R(%)
T4/T8
AFP(+)组
23
49.8±7.4
8.2±3.8
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0.93±0.14
AFP(-)组
13
51.3±8.6△
8.5±3.9△
0.89±0.17△
HBsAg(+)组
25
50.4±7.2
8.3±4.1
0.90±0.14
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HBsAg(-)组
11
49.2±8.9▲
8.4±4.2▲
0.91±0.19▲
AFP(+)+HBsAg(+)组
14
43.4±6.7○
8.3±3.4●
0.88±0.18●
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△：与AFP(+)比P>0.05；▲：与HBsAg(+)比P>0.05；○：与各组比P<0.05；●：与各组比P>0.05表3 肿瘤大小及远处转移与肝癌患者IL-2活性、IL-2R及T4/T8的关系(
±S)n
IL-2活性(GI)
IL-2R(%)
T4/T8
直径>5cm组(a)
24
47.4±7.2
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7.9±3.5
0.81±0.14
直径≤5cm组(b)
12
55.6±7.5△
9.6±4.3△
1.04±0.15△
有远处转移组(c)
19
45.2±7.8
7.9±3.2
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0.83±0.12
无远处转移组(d)
17
56.3±7.6△
9.5±3.9○
○1.02±0.14○
△：与a组比P<0.05；▲：与c组比P<0.01；○：与c组比P<0.052.3 肿瘤大小及有无远处转移与IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8的关系：肿瘤直径大于5cm组此三项指标明显低于肿瘤直径小于或等于5cm组，P<0.05。有远处转移组此三项指标也明显低于无远处转移组，P<0.01及0.05。表3
, 百拇医药
3 讨 论
一般认为T淋巴细胞在单核巨噬细胞的协助下，经T细胞刺激剂激活，细胞从G0相进入G1相，G1晚期相的细胞开始分泌IL-2或/和在细胞表面表达IL-2R。一旦细胞表面的IL-2R与IL-2结合，细胞便进入S相，合成DNA，细胞增殖。同时IL-2还可促进NK活性、诱生LAK细胞、促进B细胞分泌抗体。根据分化抗原不同，通常可将人T细胞分为T4和T8两个主要亚群，它们是主要的免疫调节细胞，对机体免疫应答的调控和维持免疫稳定具有重要作用。近年来对肿瘤患者细胞免疫功能研究较多，有资料表明肝癌患者的细胞免疫功能也明显低下[5～6]。本文同时观察了肝癌患者细胞免疫功能的三项指标，结果表明，肝癌患者IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8比值明显降低，进一步证明了肝癌患者细胞免疫功能全面低下。
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现已发现许多肿瘤患者的血清中存在多种免疫抑制因子，肿瘤患者细胞免疫功能低下与这些免疫抑制因子的存在有关。目前对肝癌患者细胞免疫功能影响因素的研究较少。有人观察了AFP和HBsAg与肝癌患者IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8比值的关系，结果显示AFP及HBsAg单独对肝癌患者上述三项指标无进一步影响，二者共同作用则可进一步抑制IL-2活性。提示单个的免疫抑制因子对肝癌患者细胞免疫功能影响较弱，肝癌患者免疫功能低下可能是多种免疫抑制因子共同作用的结果。这方面的研究还有待于进一步深入。
细胞免疫功能制约着肿瘤的发生和发展，有人证实肝癌患者病情愈重、肿瘤直径愈大，则NK活性及T4/T8比值愈低[8]。因此我们还观察了小肝癌(直径≤5cm)和大肝癌(直径>5cm)的细胞免疫功能及肝癌远处转移与细胞免疫功能的关系。结果显示大肝癌患者及有远处转移的肝癌患者之IL-2活性、IL-2R表达及T4/T8比值下降更明显。说明肝癌大小及有无远处转移与细胞免疫功能有密切关系。临床上的如何改善细胞免疫功能是肿瘤治疗的重要环节。
, 百拇医药
参考文献
1 Sahraoui Y.IL-2 production and IL-2R expression by human immature leukemic T cell.Leukemia，1992，6(10)：1025
2 沈丽英，苏成芝.特异性转移因子对肺癌的免疫治疗.解放军医学杂志，1990，3：198
3 Gillis S,Ferm M,Winny O,et al.T cell growth factor:Parameters of production and a quantitative microassay for activity.J Immunol，1978，120(6)：2027
4 杨荫昌，耿同超.应用单克隆抗体及ABC法检测淋巴细胞亚群.北京医学，1989，11(2)：94
, 百拇医药
5 Chang ML,Liu HW,Chang WY.Natural killer cell activity in patients with hepatocellular carinoma relative to early development and tumor invasion.Cancer,1990，65(4)：926
6 Saibara T,Onishi S,Sakaeda H,et al.Defective function of lymphodine activated killer cells in patients with hepatocellular carcinoma.Hapatology，1989，9(3)：471
7 许卫民，牛立国，王易伦，等.特异性转移因子对人AFP抑制鼠脾淋巴细胞生长的拮抗效应.中国免疫学杂志，1991，7(4)：235
8 郭亚军，吴孟超，刘广洛.肝癌患者外周血和癌组织中T细胞亚群、NK、ADCC效应变化及其相关性研究.临床肝胆病杂志，1990，6(2)：64, http://www.100md.com