ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化的关系研究
作者:王振国 裘亚红 曾宪端
单位:王振国 裘亚红:解放军第四军医大学附属松花江医院(吉林 132011); 曾宪端:衡阳医学院附属第一医院(衡阳 421001)
关键词:葡萄胎,侵蚀性;基因,ras;突变;分化
湖南医学990604 摘要 目的 探讨ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化之间的关系。方法 采用聚合酶链反应—单链DNA构象多态性分析法,对30例侵蚀性葡萄胎石蜡包埋组织Ha-ras基因ExonⅠ突变情况进行了检测。结果 侵蚀性葡萄胎组织分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级,Ha-ras基因第一外显子点突变率依次为15.4%,40.0%,71.4%,经秩和检验,差异有显著性(P<0.01)。结论 ras基因突变与侵蚀性葡萄胎恶性程度有关,恶性程度越高,ras基因突变率越高;提示ras基因突变对疾病预后有负影响。
Relationship Between the ras Gene Mutation and Tissue Differentiation in the Invasive Hydatidiform Mole
, 百拇医药
WANG Zhenguo,QIU Yahong,ZENG Xianduan*
Department of the Obstetric and Gynecology,The Affiliated Songhua River Hospital
of the Fourth Military Medical University,Ji Lin City,132011
(*The First Affiliated Hospital of Hengyang Medical College,Hengyang,421001)
Abstract Objective To investigate the relationship between the mutation of ras gene and the tissue differentiation in the invasive hydatidiform mole (IHM).Methods Paraffin-embedded archival specimens collected from 30 cases of IHM were analysed by polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) method,detecting the mutation of exon I in Ha-ras gene.Results In Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ grade of tissue differentiation of IHM,the point mutation rates of HA-ras exon Ⅰ were 15.4%,40.0% and 71.4% respectively (rank sum test:P<0.01).Conclusion ras gene mutation is related to the degree of malignancy in IHM. The higher the malignancy,the higher will be the mutation rate of Ha-ras exon Ⅰ,suggesting that ras gene mutation has a negative effect on prognosis of invasive hydatidiform mole.
, 百拇医药
Key words hydatidiform mole,invasive;genes,ras;mutation;differentiation
ras基因作为致癌基因,在许多肿瘤恶变过程中起一定的作用。为了解其与侵蚀性葡萄胎组织分化之间的关系及影响,采用聚合酶链反应—单链DNA构象多态性分析(PCR-SSCP)法,对侵蚀性葡萄胎组织Ha-ras基因ExonⅠ突变情况进行了检测。
1 资料与方法
1.1 组织来源 取自衡阳医学院附属第一、二医院病理存档石蜡包埋组织,侵蚀性葡萄胎30例,根据文献分级标准[1],重新由两名病理学专家复核确诊。
1.2 分子生物学方法 ①引物生成:Ha-ras基因ExonⅠ引物序列见文献[2],上游引物为第12位密码子正链上游非编码区的第52~71个核苷酸之间的序列;下游引物为第12位密码子负链下游第46~66个核苷酸之间的序列;引物由衡阳医学院分子生物中心合成。②PCR-SSCP法:组织DNA提取法见文献[2],PCR扩增片段长度170 bp,总体积50 μl,反应物终浓度:10×PCR Buffer(含1.5 mM MgCl2),dNTP 2 mM,引物(上、下)各25 pg,基因组DNA 0.5 μg,Taq DNA聚合酶2 u,加水至50 μl,封上石蜡油 50 μl。条件:94 ℃ 40 s,55 ℃30s,72 ℃ 60s,共35个循环,72 ℃延伸5 min,得PCR产物。6%中性聚丙烯酰凝胶垂直电泳6~8 h,电泳强度10 V/cm。银染显色,判断结果。
, 百拇医药
1.3 统计学方法 采用等级资料两样本比较的秩和检验。
2 结果
侵蚀性葡萄胎组织分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级,ras基因突变率依次为15.4%,40.0%,71.4%,经秩和检验,差异有显著性意义(Uc=2.3994,P<0.01)见附表。
附表 ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化关系 组织分化
n
ras基因突变
阳性
阴性
Ⅰ级
13
, 百拇医药
2(15.4)
11(84.6)
Ⅱ级
10
4(40.0)
6(60.0)
Ⅲ级
7
5(71.4)
2(28.6)
合计
30
11(36.7)
, 百拇医药
19(63.3)
3 讨论
ras基因是人们最先证实与肿瘤发生有关的基因之一,分布广泛,没有组织特异性,成员包括Ha-ras,Ki-ras和N-ras,分别位于11,12和1号染色体短臂,其编码的蛋白质位于细胞内表面,具GTP酶活性,在细胞信息传导过程中起着极其重要的作用。通常情况下,ras基因处于失活状态,不具组织增殖活性,当受到某种因素影响被激活时,便转变为具有致癌活性的癌基因,导致细胞恶性增殖[3]。
活性的H-ras基因同肿瘤的细胞增殖、侵袭及转移密切相关[4,5],导致H-ras基因激活的主要方式之一是点突变,该突变多见于ExonⅠ第12位密码子。侵蚀性葡萄胎是以滋养细胞异常增殖和极具侵蚀性为突出特点的恶性肿瘤,现已证实H-ras基因ExonⅠ第12位密码子突变与葡萄胎发生发展有关[2]。H-ras基因点突变与组织学变化的关系也已有许多论述[6~9],在膀胱癌Ha-ras基因第12密码子点突变率就高达32%~60%,且随癌的级别、期别升高而升高[10]。笔者在对侵蚀性葡萄胎组织Ha-ras基因第一外显子突变研究中发现,其突变率也高达36.7%,且组织细胞分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级中的表达,依次为15.4%,40.0%,71.4%,随级别升高而升高,经检验差异有显著性(P<0.01)。而组织细胞分化程度与其恶性程度密切相关,由此可以认为,ras基因突变与侵蚀性葡萄胎恶性程度有关,且恶性程度越高,ras基因突变率越高,提示ras基因突变对疾病预后有负影响。
, 百拇医药
参考文献
1 刘复生,刘彤华主编.肿瘤病理学.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1997.1489~1492
2 王振国,裘亚红,曾宪端.ras基因突变及p21蛋白表达与葡萄胎关系的研究.中华现代实用医学杂志,1999,2(3):1
3 Cho KR,Vogelstein R.Genetic alterations in the adenomacarcinoma sequence.Cancer,1992,70:1727~1731
4 Bos JL.ras oncogenes in human uterus and placenta.Biology of Reproduction,1992,46:48
5 方清明综述.ras基因的研究进展及其在卫生学上的应用.国外医学.卫生学分册,1996,23(2):84
, 百拇医药
6 Bos JL.ras oncogenes in human cancer:A review.Cancer Res,1989,49:4682
7 Wong YF,Chung TK H,Cheung TH,et al.Frequent ras genemutations in squamous cell cervical cancer.Cancer LETT,1995(1-2):29
8 Barbacid M.ras gene.Ann Rev Biochem,1987,56:779
9 D′Abaco GM,Whitehead RH,Burgess AW.Synergy between APC(min) and activated ras mutation is sufficient to induce colon carcinomas.Mol Cell Biol,1996,16(3):884
10 于冬梅,柳凤轩,粱智勇,等.膀胱癌移行细胞癌p21,p185,p53蛋白表达及ras,p53基因突变的检测.中国病理学杂志,1996,25(4):202
(19990705 收稿), 百拇医药
单位:王振国 裘亚红:解放军第四军医大学附属松花江医院(吉林 132011); 曾宪端:衡阳医学院附属第一医院(衡阳 421001)
关键词:葡萄胎,侵蚀性;基因,ras;突变;分化
湖南医学990604 摘要 目的 探讨ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化之间的关系。方法 采用聚合酶链反应—单链DNA构象多态性分析法,对30例侵蚀性葡萄胎石蜡包埋组织Ha-ras基因ExonⅠ突变情况进行了检测。结果 侵蚀性葡萄胎组织分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级,Ha-ras基因第一外显子点突变率依次为15.4%,40.0%,71.4%,经秩和检验,差异有显著性(P<0.01)。结论 ras基因突变与侵蚀性葡萄胎恶性程度有关,恶性程度越高,ras基因突变率越高;提示ras基因突变对疾病预后有负影响。
Relationship Between the ras Gene Mutation and Tissue Differentiation in the Invasive Hydatidiform Mole
, 百拇医药
WANG Zhenguo,QIU Yahong,ZENG Xianduan*
Department of the Obstetric and Gynecology,The Affiliated Songhua River Hospital
of the Fourth Military Medical University,Ji Lin City,132011
(*The First Affiliated Hospital of Hengyang Medical College,Hengyang,421001)
Abstract Objective To investigate the relationship between the mutation of ras gene and the tissue differentiation in the invasive hydatidiform mole (IHM).Methods Paraffin-embedded archival specimens collected from 30 cases of IHM were analysed by polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) method,detecting the mutation of exon I in Ha-ras gene.Results In Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ grade of tissue differentiation of IHM,the point mutation rates of HA-ras exon Ⅰ were 15.4%,40.0% and 71.4% respectively (rank sum test:P<0.01).Conclusion ras gene mutation is related to the degree of malignancy in IHM. The higher the malignancy,the higher will be the mutation rate of Ha-ras exon Ⅰ,suggesting that ras gene mutation has a negative effect on prognosis of invasive hydatidiform mole.
, 百拇医药
Key words hydatidiform mole,invasive;genes,ras;mutation;differentiation
ras基因作为致癌基因,在许多肿瘤恶变过程中起一定的作用。为了解其与侵蚀性葡萄胎组织分化之间的关系及影响,采用聚合酶链反应—单链DNA构象多态性分析(PCR-SSCP)法,对侵蚀性葡萄胎组织Ha-ras基因ExonⅠ突变情况进行了检测。
1 资料与方法
1.1 组织来源 取自衡阳医学院附属第一、二医院病理存档石蜡包埋组织,侵蚀性葡萄胎30例,根据文献分级标准[1],重新由两名病理学专家复核确诊。
1.2 分子生物学方法 ①引物生成:Ha-ras基因ExonⅠ引物序列见文献[2],上游引物为第12位密码子正链上游非编码区的第52~71个核苷酸之间的序列;下游引物为第12位密码子负链下游第46~66个核苷酸之间的序列;引物由衡阳医学院分子生物中心合成。②PCR-SSCP法:组织DNA提取法见文献[2],PCR扩增片段长度170 bp,总体积50 μl,反应物终浓度:10×PCR Buffer(含1.5 mM MgCl2),dNTP 2 mM,引物(上、下)各25 pg,基因组DNA 0.5 μg,Taq DNA聚合酶2 u,加水至50 μl,封上石蜡油 50 μl。条件:94 ℃ 40 s,55 ℃30s,72 ℃ 60s,共35个循环,72 ℃延伸5 min,得PCR产物。6%中性聚丙烯酰凝胶垂直电泳6~8 h,电泳强度10 V/cm。银染显色,判断结果。
, 百拇医药
1.3 统计学方法 采用等级资料两样本比较的秩和检验。
2 结果
侵蚀性葡萄胎组织分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级,ras基因突变率依次为15.4%,40.0%,71.4%,经秩和检验,差异有显著性意义(Uc=2.3994,P<0.01)见附表。
附表 ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化关系 组织分化
n
ras基因突变
阳性
阴性
Ⅰ级
13
, 百拇医药
2(15.4)
11(84.6)
Ⅱ级
10
4(40.0)
6(60.0)
Ⅲ级
7
5(71.4)
2(28.6)
合计
30
11(36.7)
, 百拇医药
19(63.3)
3 讨论
ras基因是人们最先证实与肿瘤发生有关的基因之一,分布广泛,没有组织特异性,成员包括Ha-ras,Ki-ras和N-ras,分别位于11,12和1号染色体短臂,其编码的蛋白质位于细胞内表面,具GTP酶活性,在细胞信息传导过程中起着极其重要的作用。通常情况下,ras基因处于失活状态,不具组织增殖活性,当受到某种因素影响被激活时,便转变为具有致癌活性的癌基因,导致细胞恶性增殖[3]。
活性的H-ras基因同肿瘤的细胞增殖、侵袭及转移密切相关[4,5],导致H-ras基因激活的主要方式之一是点突变,该突变多见于ExonⅠ第12位密码子。侵蚀性葡萄胎是以滋养细胞异常增殖和极具侵蚀性为突出特点的恶性肿瘤,现已证实H-ras基因ExonⅠ第12位密码子突变与葡萄胎发生发展有关[2]。H-ras基因点突变与组织学变化的关系也已有许多论述[6~9],在膀胱癌Ha-ras基因第12密码子点突变率就高达32%~60%,且随癌的级别、期别升高而升高[10]。笔者在对侵蚀性葡萄胎组织Ha-ras基因第一外显子突变研究中发现,其突变率也高达36.7%,且组织细胞分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级中的表达,依次为15.4%,40.0%,71.4%,随级别升高而升高,经检验差异有显著性(P<0.01)。而组织细胞分化程度与其恶性程度密切相关,由此可以认为,ras基因突变与侵蚀性葡萄胎恶性程度有关,且恶性程度越高,ras基因突变率越高,提示ras基因突变对疾病预后有负影响。
, 百拇医药
参考文献
1 刘复生,刘彤华主编.肿瘤病理学.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1997.1489~1492
2 王振国,裘亚红,曾宪端.ras基因突变及p21蛋白表达与葡萄胎关系的研究.中华现代实用医学杂志,1999,2(3):1
3 Cho KR,Vogelstein R.Genetic alterations in the adenomacarcinoma sequence.Cancer,1992,70:1727~1731
4 Bos JL.ras oncogenes in human uterus and placenta.Biology of Reproduction,1992,46:48
5 方清明综述.ras基因的研究进展及其在卫生学上的应用.国外医学.卫生学分册,1996,23(2):84
, 百拇医药
6 Bos JL.ras oncogenes in human cancer:A review.Cancer Res,1989,49:4682
7 Wong YF,Chung TK H,Cheung TH,et al.Frequent ras genemutations in squamous cell cervical cancer.Cancer LETT,1995(1-2):29
8 Barbacid M.ras gene.Ann Rev Biochem,1987,56:779
9 D′Abaco GM,Whitehead RH,Burgess AW.Synergy between APC(min) and activated ras mutation is sufficient to induce colon carcinomas.Mol Cell Biol,1996,16(3):884
10 于冬梅,柳凤轩,粱智勇,等.膀胱癌移行细胞癌p21,p185,p53蛋白表达及ras,p53基因突变的检测.中国病理学杂志,1996,25(4):202
(19990705 收稿), 百拇医药