卵巢癌的单药及联合用药体外药物敏感性试验
作者：梁永钜，冯公侃，潘启超，刘富元
单位：中山医科大学肿瘤防治中心肿瘤研究所(广州，510060)
关键词：卵巢肿瘤；药物筛选试验；抗肿瘤；药物疗法；联合
癌症990639
中图分类号：R73.53 文献标识码：D
文章编号：1000-467X(1999)06-0742-02
本文采用组织块培养?MTT终点染色-计算机图像分析法〔1〕检查了卵巢癌对多种单药及联合用药的体外敏感性，为临床选择联合用药方案提供参考依据。
1材料和方法
, http://www.100md.com
在24孔板每培养孔中放置高0.5cm不锈钢网支架，支架上放置1.1cm×1.1cm滤纸，每孔加培养液1ml，液面刚至滤纸。肿瘤标本切成直径0.5mm～1mm组织块放置于滤纸上，每孔4～6块，培养1天后，测定每孔瘤块面积(area，A)，加药物培养4天后，加MTT再培养6小时，测定瘤块被甲瓒蓝染的面积(blue area,BA)，按下式计算经药物作用后的细胞生存指数(survivalindex,SI)。
所试验的药物浓度为临床用药达到的血浆峰浓度的5倍〔2〕，即卡铂(carboplatin,CBDCA或P)为50μg/ml、平阳霉素(bleomycin A5，Bleo)为15μg/ml、表阿霉素(Epirubicin,EADM)11.5μg/ml、长春新碱(Vincristine,VCR)1.85μg/ml。联合用药方案有VCR+Bleo+CBDCA(VBP)及VCR+EADM+CBDCA(VEP)，每种药物浓度与单药试验时相同。为判断各药作用是拮抗、相加还是协同，以作用最强的单药的SI(SIDmax)作为亚相加作用的临界值，以3个单药的SI的乘积(即SIprod=A药的SI×B药的SI×C药的SI)作为协同作用的期望值，联合用药的SI(SIcomb)大于SIDmax为拮抗，小于SIDmax而大于SIprod为亚相加，等于或小于SIprod为协同〔3〕。采用符号秩和检验(signed ranktest)对55例标本的SIcomb与SIDmax、SIcomb与SIprod的差别作显著性检验。
, 百拇医药
2结果
55例标本对各单药及联合用药的敏感性均有较大差异，见表1。
表1 55例卵巢癌标本对各种单药及联合用药的SI中位数及不同敏感程度的例数
药物
SI中位数(%)
敏感例数
轻度敏感例数
不敏感例数
SI 0～33%
SI 34%～66%
SI 67%～100%
, http://www.100md.com
VCR
91
1
6
48
Bleo
79
3
16
36
CBDCA
60
11
22
, 百拇医药
22
EADM
41
20
20
15
VEP
30
29
18
8
VBP
19
36
, http://www.100md.com
11
8
注：对各药及联合用药的不同敏感程度例数作χ2检验，VEP与VCR及CBDCA比较有显著性差异(均P<0.001)，与EADM比较无显著差异(P=0.143)。VBP与VCR、Bleo及CBDCA比较均有显著性差异(均P<0.001)。
对于联合用药，VEP的SIcomb中位数为30%，小于SIDmax中位数(37%)，但无显著差别(P>0.200)，表明VEP亚相加作用不显著，大于SIprod中位数(20%)，差别显著(P<0.005)，表明VEP无协同作用；VBP的SIcomb中位数为19%，小于SIDmax中位数(51%)及SIprod中位数(27%)，且差别分别为非常显著(P<0.001)及显著(P<0.050)，表明VBP有显著协同作用，见图1～2。
, http://www.100md.com
图1 VEP联合用药SIcomb与SIDmax及SIprod的关系
经符号秩和检验SIcomb与SIDmax无显著差别(P>0.200),SIcomb与SIprod
有非常显著差别(P<0.005)。
图2 VBP联合用药SIcomb与SIDmax及SIprod的关系
经符号秩和检验SIcomb与SIDmax有非常显著差别(P<0.001)，SIcomb与SIprod有显著差别(P<0.050)
, 百拇医药
3讨论
为提高卵巢癌化疗的疗效，人们尝试采用各种体外药物敏感性试验预测病人对不同药物的敏感性。但以往的方法需将新鲜的肿瘤织组经酶消化或机械分散成单细胞后培养，细胞难培养成活，可评价率低，一般为40%～70%〔4〕。本法采用组织块培养，保持实体瘤的组织结构，有利细胞存活，可评价率90%以上。NguyenHN等在子宫癌细胞体外药物敏感性试验中观察到联合用药CAP(环磷酰胺+阿霉素+顺铂)、CAF(环磷酰胺+阿霉素+氟脲嘧啶)与单药阿霉素无显著差别〔5〕。本文结果亦显示VEP亚相加和协同作用不明显，且与单药EADM无显著性差异，临床上常将VCR、EADM及CBDCA联合用药，合理与否值得进一步探讨。在卵巢癌临床治疗观察到VBP与VEP疗效相似，与实验结果相符。由于EADM心脏毒性突出，VEP方案应用受限制，而且VBP方案中3个药物合用有协同，故可能是卵巢癌较好的化疗方案。
〔参考文献〕
, 百拇医药
〔1〕梁永钜，潘启超，麦伟源，等.鼻咽癌体外药物敏感性试验的初步研究〔J〕.癌症，1996，15(3)：216～218.
〔2〕Scheithauer W，Clark GM,Salmon SE, et al.Model for estimation of clinically achievable plasma concentrations for investigational anticancer drugs in man〔J〕. Cancer Treat Rep,1986,70(12)：1379～1382.
〔3〕Valeriote F,Lin Hs.Synergistic inte-raction of anticancer agents：a cellular perspective〔J〕.Cancer Chemother Rep,1975,59：895～900.
〔4〕Sevin BU,Perras JP,Averette HE,et al.Chemoseneitivity testing in ovarian cancer 〔J〕.Cancer,1993,71(suppl 4)：1613～1620.
〔5〕Nguyen HN,Sevin BU, Averette HE,et al.Comparative evalution of single and combination chemotherapy in uterine cancer cell lines〔J〕.Gynecol Oncol, 1991,42： 227～232.
收稿日期：1998-06-10；修回日期：1999-04-14, 百拇医药
单位：中山医科大学肿瘤防治中心肿瘤研究所(广州，510060)
关键词：卵巢肿瘤；药物筛选试验；抗肿瘤；药物疗法；联合
癌症990639
中图分类号：R73.53 文献标识码：D
文章编号：1000-467X(1999)06-0742-02
本文采用组织块培养?MTT终点染色-计算机图像分析法〔1〕检查了卵巢癌对多种单药及联合用药的体外敏感性，为临床选择联合用药方案提供参考依据。
1材料和方法
, http://www.100md.com
在24孔板每培养孔中放置高0.5cm不锈钢网支架，支架上放置1.1cm×1.1cm滤纸，每孔加培养液1ml，液面刚至滤纸。肿瘤标本切成直径0.5mm～1mm组织块放置于滤纸上，每孔4～6块，培养1天后，测定每孔瘤块面积(area，A)，加药物培养4天后，加MTT再培养6小时，测定瘤块被甲瓒蓝染的面积(blue area,BA)，按下式计算经药物作用后的细胞生存指数(survivalindex,SI)。
所试验的药物浓度为临床用药达到的血浆峰浓度的5倍〔2〕，即卡铂(carboplatin,CBDCA或P)为50μg/ml、平阳霉素(bleomycin A5，Bleo)为15μg/ml、表阿霉素(Epirubicin,EADM)11.5μg/ml、长春新碱(Vincristine,VCR)1.85μg/ml。联合用药方案有VCR+Bleo+CBDCA(VBP)及VCR+EADM+CBDCA(VEP)，每种药物浓度与单药试验时相同。为判断各药作用是拮抗、相加还是协同，以作用最强的单药的SI(SIDmax)作为亚相加作用的临界值，以3个单药的SI的乘积(即SIprod=A药的SI×B药的SI×C药的SI)作为协同作用的期望值，联合用药的SI(SIcomb)大于SIDmax为拮抗，小于SIDmax而大于SIprod为亚相加，等于或小于SIprod为协同〔3〕。采用符号秩和检验(signed ranktest)对55例标本的SIcomb与SIDmax、SIcomb与SIprod的差别作显著性检验。
, 百拇医药
2结果
55例标本对各单药及联合用药的敏感性均有较大差异，见表1。
表1 55例卵巢癌标本对各种单药及联合用药的SI中位数及不同敏感程度的例数
药物
SI中位数(%)
敏感例数
轻度敏感例数
不敏感例数
SI 0～33%
SI 34%～66%
SI 67%～100%
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VCR
91
1
6
48
Bleo
79
3
16
36
CBDCA
60
11
22
, 百拇医药
22
EADM
41
20
20
15
VEP
30
29
18
8
VBP
19
36
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11
8
注：对各药及联合用药的不同敏感程度例数作χ2检验，VEP与VCR及CBDCA比较有显著性差异(均P<0.001)，与EADM比较无显著差异(P=0.143)。VBP与VCR、Bleo及CBDCA比较均有显著性差异(均P<0.001)。
对于联合用药，VEP的SIcomb中位数为30%，小于SIDmax中位数(37%)，但无显著差别(P>0.200)，表明VEP亚相加作用不显著，大于SIprod中位数(20%)，差别显著(P<0.005)，表明VEP无协同作用；VBP的SIcomb中位数为19%，小于SIDmax中位数(51%)及SIprod中位数(27%)，且差别分别为非常显著(P<0.001)及显著(P<0.050)，表明VBP有显著协同作用，见图1～2。
, http://www.100md.com
图1 VEP联合用药SIcomb与SIDmax及SIprod的关系
经符号秩和检验SIcomb与SIDmax无显著差别(P>0.200),SIcomb与SIprod
有非常显著差别(P<0.005)。
图2 VBP联合用药SIcomb与SIDmax及SIprod的关系
经符号秩和检验SIcomb与SIDmax有非常显著差别(P<0.001)，SIcomb与SIprod有显著差别(P<0.050)
, 百拇医药
3讨论
为提高卵巢癌化疗的疗效，人们尝试采用各种体外药物敏感性试验预测病人对不同药物的敏感性。但以往的方法需将新鲜的肿瘤织组经酶消化或机械分散成单细胞后培养，细胞难培养成活，可评价率低，一般为40%～70%〔4〕。本法采用组织块培养，保持实体瘤的组织结构，有利细胞存活，可评价率90%以上。NguyenHN等在子宫癌细胞体外药物敏感性试验中观察到联合用药CAP(环磷酰胺+阿霉素+顺铂)、CAF(环磷酰胺+阿霉素+氟脲嘧啶)与单药阿霉素无显著差别〔5〕。本文结果亦显示VEP亚相加和协同作用不明显，且与单药EADM无显著性差异，临床上常将VCR、EADM及CBDCA联合用药，合理与否值得进一步探讨。在卵巢癌临床治疗观察到VBP与VEP疗效相似，与实验结果相符。由于EADM心脏毒性突出，VEP方案应用受限制，而且VBP方案中3个药物合用有协同，故可能是卵巢癌较好的化疗方案。
〔参考文献〕
, 百拇医药
〔1〕梁永钜，潘启超，麦伟源，等.鼻咽癌体外药物敏感性试验的初步研究〔J〕.癌症，1996，15(3)：216～218.
〔2〕Scheithauer W，Clark GM,Salmon SE, et al.Model for estimation of clinically achievable plasma concentrations for investigational anticancer drugs in man〔J〕. Cancer Treat Rep,1986,70(12)：1379～1382.
〔3〕Valeriote F,Lin Hs.Synergistic inte-raction of anticancer agents：a cellular perspective〔J〕.Cancer Chemother Rep,1975,59：895～900.
〔4〕Sevin BU,Perras JP,Averette HE,et al.Chemoseneitivity testing in ovarian cancer 〔J〕.Cancer,1993,71(suppl 4)：1613～1620.
〔5〕Nguyen HN,Sevin BU, Averette HE,et al.Comparative evalution of single and combination chemotherapy in uterine cancer cell lines〔J〕.Gynecol Oncol, 1991,42： 227～232.
收稿日期：1998-06-10；修回日期：1999-04-14, 百拇医药