薏苡仁酯对顺铂抑制人鼻咽癌细胞增殖的加强作用①
作者：胡笑克 李 毓 陈 宁 梁昌盛
单位：胡笑克 梁昌盛 中山医科大学核医学教研室 广东广州市 510089；李毓 陈宁 广东省中医研究所
关键词：鼻咽肿瘤；顺铂；薏苡仁酯；增敏作用
华夏医学990602 摘要 目的:探讨薏苡仁酯(coixenolide, CXL)对顺铂(DDP)抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响。方法:采用微量细胞克隆形成法检测CNE-2Z对药物的敏感性。结果:DDP呈剂量依赖性抑制CNE-2Z的增殖,ID50为10-5.548mol/L。加入CXL10-7和10-6mol/L均可使DDP的量效曲线左移,ID50降至10-5.686mol/L和10-5.874mol/L。CXL还能使DDP的时效曲线左移,缩短该药的作用时间。未发现CXL能增强DDP的骨髓毒性作用。结论:CXL对DDP抑制细胞具有选择性的增效作用。
, 百拇医药
中图分类号 R730.23；R739.63
The Enhancement of Inhibitory Action of Cisplatin on
Human Nasopharyngeal Carcinoma Cell by Coixenolide
Hu Xiaoke1,LI Yu2, CHEN Ning2,LIANG Changsheng2
1.Department of Nuclear Medicine of Sun yat-sen University of Medical Science,Guangzhou (510089) ；2.Guangdong Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou (510095)
, 百拇医药
Abstract Purpose:To consider the influence of coixenolide (CXL) on antitumour effect of cisplation (DDP) in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE-2Z.Method:Microcolony formation assay was used in testing sensitivity of CNE-2Z to DDP.Results:DDP dose-dependently inhibited the proliferation of CNE-2Z with ID50value of 10-5.548±10-6.326 mol/L.Addition of CXL (10-7and 10-6mol/L)shifted the DDP dose-effect curve to the left and brought ID50down to 10-5.686±10-6.434mol/L and 10-5.874±10-6.686mol/L respectively.CXL also produced a displacement to the left of the DDP time-response curve,which made the action time of DDP be shortened.CXL did not potentiate the DDP cytotoxity to CFU-GM in normal bone marrow of mouse. Conclusion:CXL selectively enhances the inhibition of CNE-2Z proliferation by DDP.
, 百拇医药
Key words nasopharyngeal neoplasm;cisplatin;coixenolide;chemosensitization
薏苡仁酯(CXL)是从中药薏苡仁提取的有效成分，具有抗癌和免疫调节作用[1]。笔者在以往的工作中也观察到CXL能抑制人鼻咽癌(NPC)细胞的生长[2]。 NPC虽以放射治疗为主，但对于晚期病例，还要采用中药、化疗药物进行综合治疗。故有必要研究CXL和化疗药物的相互作用。
1 材料与方法
1.1 动物 雄性NIH小鼠，8～12周龄，体重18～25g，中山医科大学实验动物中心提供。
1.2 细胞株 人NPC细胞株CNE-2Z为低分化鳞状细胞癌(广东医学院建株)。
, 百拇医药 1.3 药品试剂 CXL注射液(浙江康莱特药业股份有限公司提供，批号98060092-2)、顺铂 (DDP，锦州九泰药业股份责任有限公司，批号990101)、RPMIl640(Gibco)、重组小鼠粒单系集落刺激因子(GM-CSF，Immunex)、小牛血清(本校免疫学教研室提供)、马血清(购自军事医学科学院)。
1.4 方法 采用微量细胞克隆形成法[3]检测CNE-2Z的增殖能力及其对药物的反应。
取对数生长期CNE-2Z细胞接种于96孔培养板内，每孔0.2m1细胞悬液(200个细胞)。培养基为RPMI1640，内含15%(v/v)的小牛血清。置CO2培养箱中常规培养72h后，在倒置显微镜(Olympus IMF-2)观察、记录细胞克隆数。克隆标准为≥8个细胞组成的集落(轮廓清楚，折光性强，细胞形态一致)。
作药物实验时，于接种的同时加入DDP，剂量10-7～10-4mol/L(终浓度)，培养结束后计算克隆数并求抑制率。抑制率(%)=[1-(药物组克隆数/非药物组克隆数)]×100%。以抑制率对剂量作图，得出的量效曲线作为对照。实验组(同时)各加入CXLl0-7和10-6mol/L，以观察不同浓度的CXL对DDP量效曲线的影响。每组每个DDP剂量点含24个复孔。另设一个非药物组(24孔)以计算抑制率。所加药物不再洗脱。
, 百拇医药
测定DDP的时效关系时，在药物作用达到规定的时间后，弃去原含药培养液，换用无药培养液(若细胞尚未贴壁，则洗脱药物)，然后继续培养至72h。以抑制率对时间作图，绘制时效曲线，并作为对照。实验组加入10-6mol/L(作用时间与DDP相同)，以观察该药对DDP时效曲线的影响。
另外，取3只小鼠右侧股骨常法制备骨髓有核细胞悬液，配制培养体系进行CFU-GM培养[4]。培养体系：马血清0.66ml、10ng/ml GM-CSF0.33ml、细胞悬液0.33ml(3×105个细胞)、3%琼脂0.33ml、RPMI1640 1.65ml，共3.3ml。混匀后，取3个30mm直径的玻璃培养皿各加入1.0m1。常规培养7d后，在倒置显微镜下观察、计算CFU-GM(≥50个细胞的集落)数。实验设3个组：对照组、DDP组、DDP+CXL组。药物直接加入培养体系(不洗脱)。此实验旨在观察CXL是否增加正常造血细胞对DDP的敏感性。
, 百拇医药
1.5 结果分析 采用推广的Michaelis-Menten方程[5]分析药效动力学参数。所有实验均重复6次(n=6)。
2 结果
在本实验条件下，CNE-2Z的克隆形成率为(67.10±15.33)%(
±s, n=6，下同)。加入CXLl0-7和10-6mol/L对CNE-2Z的增殖无影响，集落形成率分别为(65.25±15.43)%和(68.33±16.65)%。经DDP处理后,CNE-2Z的克隆形成受到抑制,并与剂量成正相关,ID50=(10-5.548±10-6.326)mol/L。加入上述剂量的CXL,DDP的量效曲线向左移(图1),ID50降至(10-5.686±10-6.434)mol/L和(10-5.874±10-6.686)mol/L。 
, 百拇医药
图1 CXL对DDP量效曲线的影响
DDP(10-5mol/L)作用4h即抑制CNE-2Z增殖,并随时间延长而加强,加入CXL10-6mol/L,也使DDP的时效曲线左移(图2)。
图2 CXL对DDP时效曲线的影响
每皿接种105个正常小鼠骨髓有核细胞,形成(165.42±26.59)个CFU-GM。经DDP(10-5mol/L)处理,集落减少至(50.79±8.50)个。同时加入DDP(剂量同前)和CXL(10-6mol/L),形成(47.89±8.75)个(CXL对骨髓无毒性[2])。
, 百拇医药 3 讨论
DDP属细胞周期非特异性药物,是NPC化疗的常用药物之一。临床观察到,薏苡仁配合PFB(顺铂+5-氟脲嘧啶+博莱霉素)方案治疗晚期NPC已取得较好的效果(待发表资料)。提示该中药可提高肿瘤对化疗药物敏感性。
薏苡仁的主要有效成分是CXL[1]。CXL与DPP合用,可使后者抑制CNE-2Z增殖的作用加强(量效曲线左移、ID50减少)。由于所用的CXL剂量对CNE-2Z细胞生长无影响,故ID50的减少是CXL增加CNE-2Z对DDP的敏感性所致。CXL还使DDP的时效曲线左移,减少了DDP的作用时间,也是增敏的反映。DDP的毒副作用主要是肾脏损伤和骨髓毒性。本实验还观察到,DDP明显地抑制CFU-GM的生长,但加入CXL并未使此作用加强,说明CXL的增敏作用是有选择性的。
① 基金项目:广东省中医药管理局资助项目(No.97266)。
, 百拇医药
作者简介：胡笑克(1963-)，女，讲师，1985年毕业于白求恩医科大学，本科，1990年中山医科大学毕业，获医学硕士学位，现任中山医科大学核医学教研室讲师。
参考文献
1 阴健.中药现代研究与临床应用(Ⅱ).北京:中医古籍出版社,1995.388～392
2 李毓,胡笑克,胡祖光,等.薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用.华夏医学,1999,12(3):241～242
3 曹弃元,李永强,陈成钦,等.复方丹参、地龙、野木瓜对体外培养的人鼻咽癌细胞的放射增敏作用.癌症,1993,12(2):131～133
4 韩忠朝.造血细胞培养与应用.见:李家增,王鸿利,韩忠朝主编:血液实验学.上海:上海科学技术出版社,1997.116～136
5 徐端正.推广的Michaelis-Menten方程在剂量效应曲线上的应用.上海医科大学学报,1990,17(1):69～71
收稿 1999-06-29, http://www.100md.com
单位：胡笑克 梁昌盛 中山医科大学核医学教研室 广东广州市 510089；李毓 陈宁 广东省中医研究所
关键词：鼻咽肿瘤；顺铂；薏苡仁酯；增敏作用
华夏医学990602 摘要 目的:探讨薏苡仁酯(coixenolide, CXL)对顺铂(DDP)抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响。方法:采用微量细胞克隆形成法检测CNE-2Z对药物的敏感性。结果:DDP呈剂量依赖性抑制CNE-2Z的增殖,ID50为10-5.548mol/L。加入CXL10-7和10-6mol/L均可使DDP的量效曲线左移,ID50降至10-5.686mol/L和10-5.874mol/L。CXL还能使DDP的时效曲线左移,缩短该药的作用时间。未发现CXL能增强DDP的骨髓毒性作用。结论:CXL对DDP抑制细胞具有选择性的增效作用。
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中图分类号 R730.23；R739.63
The Enhancement of Inhibitory Action of Cisplatin on
Human Nasopharyngeal Carcinoma Cell by Coixenolide
Hu Xiaoke1,LI Yu2, CHEN Ning2,LIANG Changsheng2
1.Department of Nuclear Medicine of Sun yat-sen University of Medical Science,Guangzhou (510089) ；2.Guangdong Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou (510095)
, 百拇医药
Abstract Purpose:To consider the influence of coixenolide (CXL) on antitumour effect of cisplation (DDP) in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE-2Z.Method:Microcolony formation assay was used in testing sensitivity of CNE-2Z to DDP.Results:DDP dose-dependently inhibited the proliferation of CNE-2Z with ID50value of 10-5.548±10-6.326 mol/L.Addition of CXL (10-7and 10-6mol/L)shifted the DDP dose-effect curve to the left and brought ID50down to 10-5.686±10-6.434mol/L and 10-5.874±10-6.686mol/L respectively.CXL also produced a displacement to the left of the DDP time-response curve,which made the action time of DDP be shortened.CXL did not potentiate the DDP cytotoxity to CFU-GM in normal bone marrow of mouse. Conclusion:CXL selectively enhances the inhibition of CNE-2Z proliferation by DDP.
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Key words nasopharyngeal neoplasm;cisplatin;coixenolide;chemosensitization
薏苡仁酯(CXL)是从中药薏苡仁提取的有效成分，具有抗癌和免疫调节作用[1]。笔者在以往的工作中也观察到CXL能抑制人鼻咽癌(NPC)细胞的生长[2]。 NPC虽以放射治疗为主，但对于晚期病例，还要采用中药、化疗药物进行综合治疗。故有必要研究CXL和化疗药物的相互作用。
1 材料与方法
1.1 动物 雄性NIH小鼠，8～12周龄，体重18～25g，中山医科大学实验动物中心提供。
1.2 细胞株 人NPC细胞株CNE-2Z为低分化鳞状细胞癌(广东医学院建株)。
, 百拇医药 1.3 药品试剂 CXL注射液(浙江康莱特药业股份有限公司提供，批号98060092-2)、顺铂 (DDP，锦州九泰药业股份责任有限公司，批号990101)、RPMIl640(Gibco)、重组小鼠粒单系集落刺激因子(GM-CSF，Immunex)、小牛血清(本校免疫学教研室提供)、马血清(购自军事医学科学院)。
1.4 方法 采用微量细胞克隆形成法[3]检测CNE-2Z的增殖能力及其对药物的反应。
取对数生长期CNE-2Z细胞接种于96孔培养板内，每孔0.2m1细胞悬液(200个细胞)。培养基为RPMI1640，内含15%(v/v)的小牛血清。置CO2培养箱中常规培养72h后，在倒置显微镜(Olympus IMF-2)观察、记录细胞克隆数。克隆标准为≥8个细胞组成的集落(轮廓清楚，折光性强，细胞形态一致)。
作药物实验时，于接种的同时加入DDP，剂量10-7～10-4mol/L(终浓度)，培养结束后计算克隆数并求抑制率。抑制率(%)=[1-(药物组克隆数/非药物组克隆数)]×100%。以抑制率对剂量作图，得出的量效曲线作为对照。实验组(同时)各加入CXLl0-7和10-6mol/L，以观察不同浓度的CXL对DDP量效曲线的影响。每组每个DDP剂量点含24个复孔。另设一个非药物组(24孔)以计算抑制率。所加药物不再洗脱。
, 百拇医药
测定DDP的时效关系时，在药物作用达到规定的时间后，弃去原含药培养液，换用无药培养液(若细胞尚未贴壁，则洗脱药物)，然后继续培养至72h。以抑制率对时间作图，绘制时效曲线，并作为对照。实验组加入10-6mol/L(作用时间与DDP相同)，以观察该药对DDP时效曲线的影响。
另外，取3只小鼠右侧股骨常法制备骨髓有核细胞悬液，配制培养体系进行CFU-GM培养[4]。培养体系：马血清0.66ml、10ng/ml GM-CSF0.33ml、细胞悬液0.33ml(3×105个细胞)、3%琼脂0.33ml、RPMI1640 1.65ml，共3.3ml。混匀后，取3个30mm直径的玻璃培养皿各加入1.0m1。常规培养7d后，在倒置显微镜下观察、计算CFU-GM(≥50个细胞的集落)数。实验设3个组：对照组、DDP组、DDP+CXL组。药物直接加入培养体系(不洗脱)。此实验旨在观察CXL是否增加正常造血细胞对DDP的敏感性。
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1.5 结果分析 采用推广的Michaelis-Menten方程[5]分析药效动力学参数。所有实验均重复6次(n=6)。
2 结果
在本实验条件下，CNE-2Z的克隆形成率为(67.10±15.33)%(
±s, n=6，下同)。加入CXLl0-7和10-6mol/L对CNE-2Z的增殖无影响，集落形成率分别为(65.25±15.43)%和(68.33±16.65)%。经DDP处理后,CNE-2Z的克隆形成受到抑制,并与剂量成正相关,ID50=(10-5.548±10-6.326)mol/L。加入上述剂量的CXL,DDP的量效曲线向左移(图1),ID50降至(10-5.686±10-6.434)mol/L和(10-5.874±10-6.686)mol/L。 , 百拇医药
图1 CXL对DDP量效曲线的影响
DDP(10-5mol/L)作用4h即抑制CNE-2Z增殖,并随时间延长而加强,加入CXL10-6mol/L,也使DDP的时效曲线左移(图2)。
图2 CXL对DDP时效曲线的影响
每皿接种105个正常小鼠骨髓有核细胞,形成(165.42±26.59)个CFU-GM。经DDP(10-5mol/L)处理,集落减少至(50.79±8.50)个。同时加入DDP(剂量同前)和CXL(10-6mol/L),形成(47.89±8.75)个(CXL对骨髓无毒性[2])。
, 百拇医药 3 讨论
DDP属细胞周期非特异性药物,是NPC化疗的常用药物之一。临床观察到,薏苡仁配合PFB(顺铂+5-氟脲嘧啶+博莱霉素)方案治疗晚期NPC已取得较好的效果(待发表资料)。提示该中药可提高肿瘤对化疗药物敏感性。
薏苡仁的主要有效成分是CXL[1]。CXL与DPP合用,可使后者抑制CNE-2Z增殖的作用加强(量效曲线左移、ID50减少)。由于所用的CXL剂量对CNE-2Z细胞生长无影响,故ID50的减少是CXL增加CNE-2Z对DDP的敏感性所致。CXL还使DDP的时效曲线左移,减少了DDP的作用时间,也是增敏的反映。DDP的毒副作用主要是肾脏损伤和骨髓毒性。本实验还观察到,DDP明显地抑制CFU-GM的生长,但加入CXL并未使此作用加强,说明CXL的增敏作用是有选择性的。
① 基金项目:广东省中医药管理局资助项目(No.97266)。
, 百拇医药
作者简介：胡笑克(1963-)，女，讲师，1985年毕业于白求恩医科大学，本科，1990年中山医科大学毕业，获医学硕士学位，现任中山医科大学核医学教研室讲师。
参考文献
1 阴健.中药现代研究与临床应用(Ⅱ).北京:中医古籍出版社,1995.388～392
2 李毓,胡笑克,胡祖光,等.薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用.华夏医学,1999,12(3):241～242
3 曹弃元,李永强,陈成钦,等.复方丹参、地龙、野木瓜对体外培养的人鼻咽癌细胞的放射增敏作用.癌症,1993,12(2):131～133
4 韩忠朝.造血细胞培养与应用.见:李家增,王鸿利,韩忠朝主编:血液实验学.上海:上海科学技术出版社,1997.116～136
5 徐端正.推广的Michaelis-Menten方程在剂量效应曲线上的应用.上海医科大学学报,1990,17(1):69～71
收稿 1999-06-29, http://www.100md.com