门脉高压性胃病大鼠胃粘膜和血浆一氧化氮和前列环素含量的变化
作者：乐桥良 张贤康 张兴荣
单位：乐桥良 南京军区福州总医院消化内科 福建省福州市 350025； 张贤康 张兴荣 上海第二军医大学长征医院消化内科 上海市 200003
关键词：胃疾病；高血压，门静脉；一氧化氮/血液；前列环素/血液
世界华人消化杂志990630 中国图书馆分类号 R573.2
Subject headings stomach diseases; hypertension, portal; nitric oxide/blood; prostaglandine/blood
1 材料和方法
1.1 材料 纯种♂ SD大鼠24只，由上海医科大学放免所提供，体质量250g～300g，平均280g±10g，随机等分为正常对照组和PHG模型组. PHG大鼠模型的制备，按照Albillos et al方法制备. 大鼠吸入乙醚全身麻醉后，在无菌条件下作腹正中切口，暴露并游离出门主干，沿其纵轴外置外径为0.9mm之钝性针头，于近肝门处用3-0丝线结扎门脉及外置针头后即拔出针头，形成肝前性门脉狭窄，内脏复位后缝合腹壁切口. 手术2wk后进行各项实验指标测定，假手术组仅游离门主干，不结扎门脉，余步骤同手术组.
, 百拇医药
1.2 方法 ①门静脉压力和胃粘膜血流量：大鼠禁食24h后，30g/L戊巴比妥纳(40mg/kg)腹腔麻醉. 沿原腹部切口，剪开腹壁进入腹腔，分离门脉及回结肠静脉，用一塑料管经回结肠静脉插入门脉主干，另一端连接测压计测门静脉压力(PVP). 从胃大弯处作一小切口，用激光多普勒血流计(LDF-Ⅲ型，南开大学制造)的探头轻轻垂直接触胃粘膜表面，测胃粘膜血流量(GMBF). ②血浆和胃粘膜6-K-PGF1α含量的测定：取外周血2mL，EDTM抗凝，离心后，取上清液，-20℃贮存待测；取胃，用钝性刀片刮取胃粘膜，组织匀，离心后，取上清液，-20℃贮存待测；采用放免法(药盒由苏州医学院提供)测定，按说明操作. ③血浆和胃粘膜NO2-/NO3-的测定：取外周血2mL，EDTM抗凝，离心后，取上清液，-20℃贮存待测. 取胃，用钝性刀片刮取胃粘膜，组织匀浆，离心后，取上清液，-20℃贮存待测；采用镉粒还原和比色法测定[1]. ④剪取胃组织，30mL/L福尔马林液固定，石蜡包埋，切片，光镜观察.
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2 结果
2.1 PVP和GMBF PHG组的PVP(2.03kPa±0.08kPa)显著高于正常对照组(1.07kPa±0.08kPa, P<0.01)；PHG组的GMBF(670mV±30mV)显著高于正常对照组(420mV±20mV,P<0.01).
2.2 血浆和胃粘膜6-K-PGF1α PHG组胃粘膜和血浆中的6-K-PGF1α(分别为369ng/g±5.12ng/g，920μg/L±31μg/L)与正常对照组(分别为219ng/g±6ng/g，599μg/L±37μg/L)比明显升高(P<0.01).
2.3 血浆和胃粘膜NO-2/NO-3 PHG组胃粘膜和血浆中的NO2-/NO3-(分别为1498mol/L±48mol/L，80.2μmol/L±1.4μmol/L)与正常对照组(分别为756mol/L±30mol/L，41.9μmol/L±2.0μmol/L)比明显升高(P<0.01).
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2.4 胃粘膜表现 PHG组胃粘膜表面均见不同程度充血，有些可见弥漫性或散在出血点；正常对照组大鼠粘膜表面光滑，无出血点. 光镜下，PHG组胃粘膜和胃粘膜下层细血管明显扩张、扭曲，尤以静脉扩张明显；正常对照组大鼠胃粘膜和粘膜下层细血管、毛细血管未见扩张.
3 讨论
国外在研究PHG时，多采用肝前性门脉高压诱导PHG模型. Albillos et al部分结扎大鼠门脉主干后，动态观察了胃组织形态和血流量的变化，15d时胃血流量明显增加，胃粘膜和粘膜下层细血管、毛细血管明显扩张、扭曲，动静脉短路数量增加，类似PHG患者胃组织的血管改变，与本PHG大鼠胃组织血管变化一致. 本PHG组与正常对照组相比多普勒信号明显增加，对肝硬变PHG患者的GMBF研究，大多数学者发现胃粘膜呈高灌注状态[2]；这种高灌注状态在PHG发病机制中起非常重要的作用[2]，由于PVP升高导致，因为外科门腔分流术和TPIS解除门脉高压后，胃粘膜高灌注得到明显改善，并能控制PHG弥漫性胃粘膜出血；胃粘膜高灌注还与内源性NO、PGI2、胰高糖素等扩血管物质增加有关[3-6].
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本结果显示，PHG组大鼠胃粘膜和血浆中的NO2-/NO3-含量比正常对照组明显升高，Tanous et al[3]证明大鼠胃粘膜和粘膜下层中的NO合成酶(NOS)mRNA过度表达；Hussein et al[4]发现PHG患者胃粘膜中的NOS和血浆中的NO2-/NO3-含量明显升高. 众多的实验证明门脉高压高动力血液循环和内脏血管扩张部分是内皮细胞产生NO过多引起的[4，5]；在门脉高压血液循环中升高的内毒素和细胞子被认为诱导NOS产生NO，NO在病理情况下能明显降低血管收缩的敏感性. Gasadevall et al[5]报道L-NAME(NO拮抗剂)能明显降低PHG大鼠增高的GMBF.
已经发现在门脉高压大白兔和大鼠血液和门静脉中PGI2明显升高[5]. 本实验结果显示，PHG组大鼠胃粘膜和血浆中的6-K-PGF1α与正常对照组比显著升高，在肝硬变PHG患者血液和胃粘膜中的6-K-PGF1α 明显升高[6]，由于门脉高压导致门腔分流，PGI2及其刺激因子避开了肝脏分解，而导致PGI2升高，聚集在血液循环中，引起内脏血管扩张和内脏血流量增加. 小剂量消炎痛(PGI2拮抗剂)能明显降低PHG大鼠增高的GMBF[5].
, http://www.100md.com
通讯作者 乐桥良
4 参考文献
1 许宏岳，李爱红，汪哓侬，胡明昌. 比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应用. 临床检验杂志，1996；14：28
2 Panes J, Bordas JM, Pique JM, Bosch J, Garcia PG, Fou F, Gasadevall M. Increased gastric mucosal perfusion in cirrhotic patients with portal hypertensive gastropathy. Gastroenterology, 1992;102:1875-1882
3 Tanoue K, Sarteh LJ, Tarnawski A, Peryi Y, Gethj Lk, Gsavle HI. Overexpresion of nitric oxide synthetas gene and protein in portal hypertensive gastric mucosa(abstract). Gastroenterology, 1995;108:A1182
, http://www.100md.com
4 Hussein M, EZ-Newihi MD, Viiaya K, Kanji ph D, Anastasios A, Mihas MD. Activity of gastric mucosal nitric oxide synthase in portal hypertrnsive gastropathy. AJG, 1996;91:535-538
5 Gasadevall V, Panes J, Pique JM, Marronzi N, Bosch J, Brendan JR. Involvement of nitric oxide and prostaglandins in gastric muosal hyeremia of portal hpertensive anesthetized rats. Hepatology, 1993;18:628-663
6 Ohta M, Kishihara F, Hashizume M, Bulkley M, Campbell L, Naybe MG. Increaed prostacyclin conten in gastric mucosa of cirrhotic patients with portal hypertensive gastropathy. Prostaglands Leulcost Essent Fatiy Acids, 1995;53:41-46
收稿日期 1999-01-20 修回日期 1999-04-03, 百拇医药
单位：乐桥良 南京军区福州总医院消化内科 福建省福州市 350025； 张贤康 张兴荣 上海第二军医大学长征医院消化内科 上海市 200003
关键词：胃疾病；高血压，门静脉；一氧化氮/血液；前列环素/血液
世界华人消化杂志990630 中国图书馆分类号 R573.2
Subject headings stomach diseases; hypertension, portal; nitric oxide/blood; prostaglandine/blood
1 材料和方法
1.1 材料 纯种♂ SD大鼠24只，由上海医科大学放免所提供，体质量250g～300g，平均280g±10g，随机等分为正常对照组和PHG模型组. PHG大鼠模型的制备，按照Albillos et al方法制备. 大鼠吸入乙醚全身麻醉后，在无菌条件下作腹正中切口，暴露并游离出门主干，沿其纵轴外置外径为0.9mm之钝性针头，于近肝门处用3-0丝线结扎门脉及外置针头后即拔出针头，形成肝前性门脉狭窄，内脏复位后缝合腹壁切口. 手术2wk后进行各项实验指标测定，假手术组仅游离门主干，不结扎门脉，余步骤同手术组.
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1.2 方法 ①门静脉压力和胃粘膜血流量：大鼠禁食24h后，30g/L戊巴比妥纳(40mg/kg)腹腔麻醉. 沿原腹部切口，剪开腹壁进入腹腔，分离门脉及回结肠静脉，用一塑料管经回结肠静脉插入门脉主干，另一端连接测压计测门静脉压力(PVP). 从胃大弯处作一小切口，用激光多普勒血流计(LDF-Ⅲ型，南开大学制造)的探头轻轻垂直接触胃粘膜表面，测胃粘膜血流量(GMBF). ②血浆和胃粘膜6-K-PGF1α含量的测定：取外周血2mL，EDTM抗凝，离心后，取上清液，-20℃贮存待测；取胃，用钝性刀片刮取胃粘膜，组织匀，离心后，取上清液，-20℃贮存待测；采用放免法(药盒由苏州医学院提供)测定，按说明操作. ③血浆和胃粘膜NO2-/NO3-的测定：取外周血2mL，EDTM抗凝，离心后，取上清液，-20℃贮存待测. 取胃，用钝性刀片刮取胃粘膜，组织匀浆，离心后，取上清液，-20℃贮存待测；采用镉粒还原和比色法测定[1]. ④剪取胃组织，30mL/L福尔马林液固定，石蜡包埋，切片，光镜观察.
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2 结果
2.1 PVP和GMBF PHG组的PVP(2.03kPa±0.08kPa)显著高于正常对照组(1.07kPa±0.08kPa, P<0.01)；PHG组的GMBF(670mV±30mV)显著高于正常对照组(420mV±20mV,P<0.01).
2.2 血浆和胃粘膜6-K-PGF1α PHG组胃粘膜和血浆中的6-K-PGF1α(分别为369ng/g±5.12ng/g，920μg/L±31μg/L)与正常对照组(分别为219ng/g±6ng/g，599μg/L±37μg/L)比明显升高(P<0.01).
2.3 血浆和胃粘膜NO-2/NO-3 PHG组胃粘膜和血浆中的NO2-/NO3-(分别为1498mol/L±48mol/L，80.2μmol/L±1.4μmol/L)与正常对照组(分别为756mol/L±30mol/L，41.9μmol/L±2.0μmol/L)比明显升高(P<0.01).
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2.4 胃粘膜表现 PHG组胃粘膜表面均见不同程度充血，有些可见弥漫性或散在出血点；正常对照组大鼠粘膜表面光滑，无出血点. 光镜下，PHG组胃粘膜和胃粘膜下层细血管明显扩张、扭曲，尤以静脉扩张明显；正常对照组大鼠胃粘膜和粘膜下层细血管、毛细血管未见扩张.
3 讨论
国外在研究PHG时，多采用肝前性门脉高压诱导PHG模型. Albillos et al部分结扎大鼠门脉主干后，动态观察了胃组织形态和血流量的变化，15d时胃血流量明显增加，胃粘膜和粘膜下层细血管、毛细血管明显扩张、扭曲，动静脉短路数量增加，类似PHG患者胃组织的血管改变，与本PHG大鼠胃组织血管变化一致. 本PHG组与正常对照组相比多普勒信号明显增加，对肝硬变PHG患者的GMBF研究，大多数学者发现胃粘膜呈高灌注状态[2]；这种高灌注状态在PHG发病机制中起非常重要的作用[2]，由于PVP升高导致，因为外科门腔分流术和TPIS解除门脉高压后，胃粘膜高灌注得到明显改善，并能控制PHG弥漫性胃粘膜出血；胃粘膜高灌注还与内源性NO、PGI2、胰高糖素等扩血管物质增加有关[3-6].
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本结果显示，PHG组大鼠胃粘膜和血浆中的NO2-/NO3-含量比正常对照组明显升高，Tanous et al[3]证明大鼠胃粘膜和粘膜下层中的NO合成酶(NOS)mRNA过度表达；Hussein et al[4]发现PHG患者胃粘膜中的NOS和血浆中的NO2-/NO3-含量明显升高. 众多的实验证明门脉高压高动力血液循环和内脏血管扩张部分是内皮细胞产生NO过多引起的[4，5]；在门脉高压血液循环中升高的内毒素和细胞子被认为诱导NOS产生NO，NO在病理情况下能明显降低血管收缩的敏感性. Gasadevall et al[5]报道L-NAME(NO拮抗剂)能明显降低PHG大鼠增高的GMBF.
已经发现在门脉高压大白兔和大鼠血液和门静脉中PGI2明显升高[5]. 本实验结果显示，PHG组大鼠胃粘膜和血浆中的6-K-PGF1α与正常对照组比显著升高，在肝硬变PHG患者血液和胃粘膜中的6-K-PGF1α 明显升高[6]，由于门脉高压导致门腔分流，PGI2及其刺激因子避开了肝脏分解，而导致PGI2升高，聚集在血液循环中，引起内脏血管扩张和内脏血流量增加. 小剂量消炎痛(PGI2拮抗剂)能明显降低PHG大鼠增高的GMBF[5].
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通讯作者 乐桥良
4 参考文献
1 许宏岳，李爱红，汪哓侬，胡明昌. 比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应用. 临床检验杂志，1996；14：28
2 Panes J, Bordas JM, Pique JM, Bosch J, Garcia PG, Fou F, Gasadevall M. Increased gastric mucosal perfusion in cirrhotic patients with portal hypertensive gastropathy. Gastroenterology, 1992;102:1875-1882
3 Tanoue K, Sarteh LJ, Tarnawski A, Peryi Y, Gethj Lk, Gsavle HI. Overexpresion of nitric oxide synthetas gene and protein in portal hypertensive gastric mucosa(abstract). Gastroenterology, 1995;108:A1182
, http://www.100md.com
4 Hussein M, EZ-Newihi MD, Viiaya K, Kanji ph D, Anastasios A, Mihas MD. Activity of gastric mucosal nitric oxide synthase in portal hypertrnsive gastropathy. AJG, 1996;91:535-538
5 Gasadevall V, Panes J, Pique JM, Marronzi N, Bosch J, Brendan JR. Involvement of nitric oxide and prostaglandins in gastric muosal hyeremia of portal hpertensive anesthetized rats. Hepatology, 1993;18:628-663
6 Ohta M, Kishihara F, Hashizume M, Bulkley M, Campbell L, Naybe MG. Increaed prostacyclin conten in gastric mucosa of cirrhotic patients with portal hypertensive gastropathy. Prostaglands Leulcost Essent Fatiy Acids, 1995;53:41-46
收稿日期 1999-01-20 修回日期 1999-04-03, 百拇医药