我国不同人群中TTV感染
作者：杨 军 王佑春 张华远 李河民
单位：中国药品生物制品检定所 北京市 100050
关键词：肝炎，病毒性；聚合酶链反应；肝炎病毒
世界华人消化杂志990628 中国图书馆分类号 R512.6
Subject headings hepatitis, viral; polymerase chain reaction; hepatitis virus
1997年底Nishizawa et al[1]应用RDA技术从一名非甲～庚输血后肝炎患者中克隆出一种新病毒，即TTV. 本文为研究国内TTV的流行情况，设计了一套PCR引物，对不同的人群进行了检测.
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 材料 血清样本收集于我国北方地区部分省市的健康查体者、血站单采浆血员、乙型肝炎患者、丙型肝炎患者、非甲～庚肝炎患者.
1.2 方法 将GenBank中8株TTV序列(序列号分别是AB011494，AB011493，AB011491，AB011490，AB011489，AB011488，AB011487，AB011486)进行同源性比较，选择ORF1中比较保守的序列，并用Oligo软件分析设计引物. 按华美公司DNA提取试剂盒操作说明书提取DNA，取5μL DNA提取液，加5μL 10×buffer,4μL MgCl2(25mmol/L)，1μL dNTP(10mmol/L)，25pmol外引物，2.5U Taq DNA聚合酶(以上试剂均购自Promega公司产品)，加去离子水至50μL反应体积. 94℃ 1min， 55℃ 1min，72℃ 1min，30循环，最后72℃延伸10min取第一轮PCR产物5μL，内引物25pmol，其他试剂量同上. 94℃ 30s， 55℃ 30s，72℃ 1min，30循环，最后72℃延伸10min. 用琼脂糖凝胶(Gibco产品)作电泳，切下凝胶，用玻璃奶方法(原平公司产品)纯化PCR产物，将之克隆到pGEM-T easy载体上，转化到E.Coli. Eco6细胞(本实验室保存)，筛选出阳性克隆，用Wizard Plus Minpreps DNA纯化系统提取质粒进行测序. 测序反应试剂盒购自Perkin-Elmer公司，用ABIPRISM 310测序仪测序，得到了7株TTV的部分序列，序列长度为543bp，并分别命名为Y23-6，Y126-3，Y1-5，Y7-5，Y9-1，Y19-1，Y4-1.
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2 实验结果
在普通人群中TTV的阳性携带率为13%，在221例职业供浆血员中检测出45例(20%)，与普通人群对照没有显著性差别. 乙型肝炎患者与非甲非庚肝炎患者的TTV阳性率分别为12%和13%(P均>0.05). 96例丙型肝炎患者中检出3例TTV阳性(P<0.05). 7株中国株TTV间的核苷酸同源性为90.6%～95.4%，而与日本株TA278(属于Ⅰa亚型)的核苷酸同源性仅为72.9%～74.7%.
表1 不同人群中TTV的感染 分组
n
TTV DNA阳性(%)
职业供浆血员
221
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45(20)
乙型肝炎
75
9(12)
丙型肝炎
96
3(3)
非甲非庚肝炎
15
2(13)
普通人群对照
111
14(13)
, 百拇医药
3 讨论
该研究表明，TTV这种新DNA病毒在中国也有广泛的流行，在我国北方地区的普通人群中阳性携带率高达13%，与日本及英国报道的结果类似[2]. 这意味着TTV流行分布是世界范围的. 在我国的职业供浆血员中TTV的携带率为20%，尽管阳性率比较高，但与正常人群对照没有显著性差别. 最近日本学者[3]及我国骆抗先et al[4]在患者粪便中检测出TTV的存在，这说明TTV的传播可能存在两种传播途径，即血源传播和胃肠道传播. 在不同类型的肝炎中，乙型肝炎和非甲非庚肝炎的TTV阳性携带率与普通人群对照没有差别，而丙型肝炎TTV阳性携带率反而低于普通人群对照(P<0.05)，原因有待于进一步研究. TTV是否是一种新的致肝炎病毒难以确定. 7株中国株TTV与TA278不属于同一型，也就是说这7株中国株TTV不属于1型TTV，可能属于2型或其他型，有待进一步证实.
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通讯作者 杨军
4 参考文献
1 Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M. A novel DNA virus(TTV) associated with elevated transminase levels in post-transfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997;241:92-97
2 Naoumov NV, Petrova EP, Thomas MG, Williams R. Presence of a newly described human DNA virus(TTV) in patients with liver disease. Lancet, 1998;352:195-197
, http://www.100md.com
3 Okamoto H, Akahane Y, Ukita M, Fukuda M, Tsuda F, Miyakawa Y, Mayumi M. Fecal excretion of a nonenveloped DNA virus (TTV) associated with posttransfusion non-A-G hepatitis. J Med Virol, 1998;56:128-132
4 骆抗先，章廉，王姗姗，聂军，葛娅，陈志英，俞守义，刘银燕，杨守昌，梁蔚芳，何海棠，焦成松. 一种新型肠传播性病毒性肝炎的临床流行病学及病毒学的初步研究. 中华肝脏病学杂志，1998；3：161-163
收稿日期 1998-11-19, http://www.100md.com
单位：中国药品生物制品检定所 北京市 100050
关键词：肝炎，病毒性；聚合酶链反应；肝炎病毒
世界华人消化杂志990628 中国图书馆分类号 R512.6
Subject headings hepatitis, viral; polymerase chain reaction; hepatitis virus
1997年底Nishizawa et al[1]应用RDA技术从一名非甲～庚输血后肝炎患者中克隆出一种新病毒，即TTV. 本文为研究国内TTV的流行情况，设计了一套PCR引物，对不同的人群进行了检测.
1 材料和方法
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1.1 材料 血清样本收集于我国北方地区部分省市的健康查体者、血站单采浆血员、乙型肝炎患者、丙型肝炎患者、非甲～庚肝炎患者.
1.2 方法 将GenBank中8株TTV序列(序列号分别是AB011494，AB011493，AB011491，AB011490，AB011489，AB011488，AB011487，AB011486)进行同源性比较，选择ORF1中比较保守的序列，并用Oligo软件分析设计引物. 按华美公司DNA提取试剂盒操作说明书提取DNA，取5μL DNA提取液，加5μL 10×buffer,4μL MgCl2(25mmol/L)，1μL dNTP(10mmol/L)，25pmol外引物，2.5U Taq DNA聚合酶(以上试剂均购自Promega公司产品)，加去离子水至50μL反应体积. 94℃ 1min， 55℃ 1min，72℃ 1min，30循环，最后72℃延伸10min取第一轮PCR产物5μL，内引物25pmol，其他试剂量同上. 94℃ 30s， 55℃ 30s，72℃ 1min，30循环，最后72℃延伸10min. 用琼脂糖凝胶(Gibco产品)作电泳，切下凝胶，用玻璃奶方法(原平公司产品)纯化PCR产物，将之克隆到pGEM-T easy载体上，转化到E.Coli. Eco6细胞(本实验室保存)，筛选出阳性克隆，用Wizard Plus Minpreps DNA纯化系统提取质粒进行测序. 测序反应试剂盒购自Perkin-Elmer公司，用ABIPRISM 310测序仪测序，得到了7株TTV的部分序列，序列长度为543bp，并分别命名为Y23-6，Y126-3，Y1-5，Y7-5，Y9-1，Y19-1，Y4-1.
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2 实验结果
在普通人群中TTV的阳性携带率为13%，在221例职业供浆血员中检测出45例(20%)，与普通人群对照没有显著性差别. 乙型肝炎患者与非甲非庚肝炎患者的TTV阳性率分别为12%和13%(P均>0.05). 96例丙型肝炎患者中检出3例TTV阳性(P<0.05). 7株中国株TTV间的核苷酸同源性为90.6%～95.4%，而与日本株TA278(属于Ⅰa亚型)的核苷酸同源性仅为72.9%～74.7%.
表1 不同人群中TTV的感染 分组
n
TTV DNA阳性(%)
职业供浆血员
221
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45(20)
乙型肝炎
75
9(12)
丙型肝炎
96
3(3)
非甲非庚肝炎
15
2(13)
普通人群对照
111
14(13)
, 百拇医药
3 讨论
该研究表明，TTV这种新DNA病毒在中国也有广泛的流行，在我国北方地区的普通人群中阳性携带率高达13%，与日本及英国报道的结果类似[2]. 这意味着TTV流行分布是世界范围的. 在我国的职业供浆血员中TTV的携带率为20%，尽管阳性率比较高，但与正常人群对照没有显著性差别. 最近日本学者[3]及我国骆抗先et al[4]在患者粪便中检测出TTV的存在，这说明TTV的传播可能存在两种传播途径，即血源传播和胃肠道传播. 在不同类型的肝炎中，乙型肝炎和非甲非庚肝炎的TTV阳性携带率与普通人群对照没有差别，而丙型肝炎TTV阳性携带率反而低于普通人群对照(P<0.05)，原因有待于进一步研究. TTV是否是一种新的致肝炎病毒难以确定. 7株中国株TTV与TA278不属于同一型，也就是说这7株中国株TTV不属于1型TTV，可能属于2型或其他型，有待进一步证实.
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通讯作者 杨军
4 参考文献
1 Nishizawa T, Okamoto H, Konishi K, Yoshizawa H, Miyakawa Y, Mayumi M. A novel DNA virus(TTV) associated with elevated transminase levels in post-transfusion hepatitis of unknown etiology. Biochem Biophys Res Commun, 1997;241:92-97
2 Naoumov NV, Petrova EP, Thomas MG, Williams R. Presence of a newly described human DNA virus(TTV) in patients with liver disease. Lancet, 1998;352:195-197
, http://www.100md.com
3 Okamoto H, Akahane Y, Ukita M, Fukuda M, Tsuda F, Miyakawa Y, Mayumi M. Fecal excretion of a nonenveloped DNA virus (TTV) associated with posttransfusion non-A-G hepatitis. J Med Virol, 1998;56:128-132
4 骆抗先，章廉，王姗姗，聂军，葛娅，陈志英，俞守义，刘银燕，杨守昌，梁蔚芳，何海棠，焦成松. 一种新型肠传播性病毒性肝炎的临床流行病学及病毒学的初步研究. 中华肝脏病学杂志，1998；3：161-163
收稿日期 1998-11-19, http://www.100md.com