慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变与TNF-α的关系*
作者：朱清静 杨 玲 盛国光 王伯祥
单位：湖北中医学院肝病研究所 湖北省武汉市 430061
关键词：乙型肝炎病毒；聚合酶链反应；基因，病毒；肿瘤坏死因子
世界华人消化杂志990641 中国图书馆分类号 R512.62
Subject headings hepatitis B virus; gene, viral; tumor necrosis factor; polymerase chain reaction
对于慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变机制的研究，发现其与机体的免疫状态有关. 本文通过对慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变与患者血清中TNF-α水平的研究，进一步探讨细胞因子在HBV前C区基因突变发病中的作用机制.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 52例HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者均系本院住院患者. 男44例，女8例，年龄19岁～50岁，符合1995-05北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议制定的诊断标准. 30例正常对照为健康献血员，男20例，女10例，年龄22岁～48岁，乙肝标志物均为阴性.
1.2 方法 用ELISA法测定HBV各项血清标志物，用聚合酶链反应法(PCR)检测血清HBV DNA，用双抗夹心法检测TNF-α. 按设计进行HBV前C区变异的扩增及SSCP银染分析.
2 结果
52例HBV DNA均阳性的慢性乙型肝炎患者，共检出突变株感染32例，突变率为61.5%. 慢性乙型肝炎HBV前C区突变株感染与非突变株感染患者的肝功能水平见表1，突变株与非突变株感染血清TNF-α水平见表2.
, 百拇医药
表1 突变组与未突变组肝功能检测结果 (
±s) 组别
n
ALT(U/L)
AST(U/L)
SB(μmol/L)
突变组
32
152.2±53.9bd
219.2±64.6bd
84.8±34.9bd
, 百拇医药
非突变组
20
109.4±31.8b
120.7±46.4b
63.3±27.4b
正常对照组
30
21.3± 5.8
28.2± 6.4
11.3± 5.4
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs 突变组.
, 百拇医药
表2 突变组与非突变组感染血清TNF-α检测结果 (±s) 组别
n
TNF(ng/L)
突变组
32
338.8±74.3bd
非突变组
20
195.4±97.6b
正常对照组
, http://www.100md.com
30
89.8±41.6
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs 突变组.
3 讨论
HBV前C区存在多点突变，以往的检测方法多数只能针对某一点突变进行检测，不利于研究突变的整体水平，而多聚酶链反应-单链构象多态分析(SSCP)弥补了上述缺陷，可以将HBV前C区的基因突变全检测出，经测序证实符合率达100%，因此PCR-SSCP银染技术是HBV前C区突变研究中一种简便易行而且可靠的方法[1]. 不少学者对HBV前C区突变株与临床的关系进行了系列研究，发现HBV前C区变异易引起爆发性肝炎或使慢性肝炎活动加剧[2，3]，然而关于HBV前C区基因变异株在肝细胞损伤中的机制，尚未完全阐明，我们检测了前C区突变株感染患者血清中的TNF-α水平，结果发现突变株感染患者血清TNF-α水平显著高于非突变株感染患者. 血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是由活化的单核巨噬细胞产生的内源性细胞因子，是机体免疫反应和炎症反应中的重要递质. 研究表明[4，5]，TNF作为重要递质参与了肝损伤及坏死的形成，与肝炎的活动性呈正相关. 我们在实验中还发现突变感染患者在TNF-α水平增高的同时，肝功能水平也相应升高，与非突变株感染患者相比P<0.05，表明突变株感染患者炎症活动性较非突变株感染者高，且TNF-α参与了突变株所引起的肝损伤.
, http://www.100md.com
我们的结果表明细胞因子可能参与了突变株所引起的肝损害，但是否是主要机制以及具体的作用环节尚有待进一步探讨.
*国家中医药管理局重点课题，No.9542149
通讯作者 朱清静
4 参考文献
1 朱丹，王亮，吴敏. 应用PCR-SSCP银染技术检测食管癌p53基因点突变. 中华医学遗传学杂志，1994;11:354
2 Liang TJ, Hasegawa K, Rimon N. A Hepatitis B virus mutant associated with an isolates of epidemic of fulminate hepatitis. N Engl Med, 1991;324:1705
, 百拇医药
3 Alberti A. Do single nucleotide mutation result in clinically significant changes in hepatitis B virus pathologenicity J Hepatol, 1990;10:268
4 甄真，裴秀，王麟士. 慢性肝病患者血清肿瘤坏死因子的水平及其临床意义. 临床肝胆病杂志，1996;12:29
5 陈素英. 肿瘤坏死因子在急慢性肝炎中的意义和作用. 临床肝胆病杂志，1992;8:177
收稿日期 1998-09-15 修回日期 1998-12-12, 百拇医药
单位：湖北中医学院肝病研究所 湖北省武汉市 430061
关键词：乙型肝炎病毒；聚合酶链反应；基因，病毒；肿瘤坏死因子
世界华人消化杂志990641 中国图书馆分类号 R512.62
Subject headings hepatitis B virus; gene, viral; tumor necrosis factor; polymerase chain reaction
对于慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变机制的研究，发现其与机体的免疫状态有关. 本文通过对慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变与患者血清中TNF-α水平的研究，进一步探讨细胞因子在HBV前C区基因突变发病中的作用机制.
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1 材料和方法
1.1 材料 52例HBV DNA阳性慢性乙型肝炎患者均系本院住院患者. 男44例，女8例，年龄19岁～50岁，符合1995-05北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议制定的诊断标准. 30例正常对照为健康献血员，男20例，女10例，年龄22岁～48岁，乙肝标志物均为阴性.
1.2 方法 用ELISA法测定HBV各项血清标志物，用聚合酶链反应法(PCR)检测血清HBV DNA，用双抗夹心法检测TNF-α. 按设计进行HBV前C区变异的扩增及SSCP银染分析.
2 结果
52例HBV DNA均阳性的慢性乙型肝炎患者，共检出突变株感染32例，突变率为61.5%. 慢性乙型肝炎HBV前C区突变株感染与非突变株感染患者的肝功能水平见表1，突变株与非突变株感染血清TNF-α水平见表2.
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表1 突变组与未突变组肝功能检测结果 (
±s) 组别n
ALT(U/L)
AST(U/L)
SB(μmol/L)
突变组
32
152.2±53.9bd
219.2±64.6bd
84.8±34.9bd
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非突变组
20
109.4±31.8b
120.7±46.4b
63.3±27.4b
正常对照组
30
21.3± 5.8
28.2± 6.4
11.3± 5.4
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs 突变组.
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表2 突变组与非突变组感染血清TNF-α检测结果 (
±s) 组别n
TNF(ng/L)
突变组
32
338.8±74.3bd
非突变组
20
195.4±97.6b
正常对照组
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30
89.8±41.6
bP<0.01，vs 对照组；dP<0.01，vs 突变组.
3 讨论
HBV前C区存在多点突变，以往的检测方法多数只能针对某一点突变进行检测，不利于研究突变的整体水平，而多聚酶链反应-单链构象多态分析(SSCP)弥补了上述缺陷，可以将HBV前C区的基因突变全检测出，经测序证实符合率达100%，因此PCR-SSCP银染技术是HBV前C区突变研究中一种简便易行而且可靠的方法[1]. 不少学者对HBV前C区突变株与临床的关系进行了系列研究，发现HBV前C区变异易引起爆发性肝炎或使慢性肝炎活动加剧[2，3]，然而关于HBV前C区基因变异株在肝细胞损伤中的机制，尚未完全阐明，我们检测了前C区突变株感染患者血清中的TNF-α水平，结果发现突变株感染患者血清TNF-α水平显著高于非突变株感染患者. 血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是由活化的单核巨噬细胞产生的内源性细胞因子，是机体免疫反应和炎症反应中的重要递质. 研究表明[4，5]，TNF作为重要递质参与了肝损伤及坏死的形成，与肝炎的活动性呈正相关. 我们在实验中还发现突变感染患者在TNF-α水平增高的同时，肝功能水平也相应升高，与非突变株感染患者相比P<0.05，表明突变株感染患者炎症活动性较非突变株感染者高，且TNF-α参与了突变株所引起的肝损伤.
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我们的结果表明细胞因子可能参与了突变株所引起的肝损害，但是否是主要机制以及具体的作用环节尚有待进一步探讨.
*国家中医药管理局重点课题，No.9542149
通讯作者 朱清静
4 参考文献
1 朱丹，王亮，吴敏. 应用PCR-SSCP银染技术检测食管癌p53基因点突变. 中华医学遗传学杂志，1994;11:354
2 Liang TJ, Hasegawa K, Rimon N. A Hepatitis B virus mutant associated with an isolates of epidemic of fulminate hepatitis. N Engl Med, 1991;324:1705
, 百拇医药
3 Alberti A. Do single nucleotide mutation result in clinically significant changes in hepatitis B virus pathologenicity J Hepatol, 1990;10:268
4 甄真，裴秀，王麟士. 慢性肝病患者血清肿瘤坏死因子的水平及其临床意义. 临床肝胆病杂志，1996;12:29
5 陈素英. 肿瘤坏死因子在急慢性肝炎中的意义和作用. 临床肝胆病杂志，1992;8:177
收稿日期 1998-09-15 修回日期 1998-12-12, 百拇医药