内皮素、一氧化氮及其基因表达与动脉硬化闭塞症的关系
作者：王春喜 梁发启 齐清会 吴咸中
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院血管外科(王春喜)；解放军总医院普通外科(梁发启)；天津医科大学总医院外科(齐清会、吴咸中)
关键词：
中华外科杂志990729 为从分子生物学水平探讨内皮素(endothelins,ET)、一氧化氮(nitic oxide,N0)在动脉硬化闭塞症(atherosclerosis obliterans,ASO)形成和发展中的地位，我们选择20例截肢或接受转流手术的ASO患者，检测其血浆ET、N0水平及闭塞血管一氧化氮合酶(NOS)活性，观察ASO血管ET mRNA、NOS mRNA表达情况，结果报道如下。
1.资料与方法：本组ASO患者20例，其中男19例，女1例。骼动脉12例次，股动脉18例次，动脉12例次，胫后动脉10例次，足背动脉8例次。共切取60处ASO血管。另选择20例正常下肢动脉血管(外伤性截肢和新鲜尸体)作为对照组。对60块动脉粥样硬化血管标本经大体解剖、光镜和电子显微镜检查分为ASO早期(脂纹期)、中期(粥样斑块期)、晚期(血管高度狭窄或完全闭塞，内见粥样物质、血栓及肉芽组织形成的条索状物)。
, 百拇医药
血浆ET采用放射免疫法测定；N0采用Grisse法；NOS活性采用氧合血红蛋白还原分光光度法；ET mRNA、NOS mRNA采用RT-PCR方法。参照文献设计特异性引物[1，2]，ET为230 bp,结构型N0合酶(constructive NOS，cNOS)为599 bp,诱导型NO合酶(inducible NOS，iNOS)为576 bp，β-actin为540 bp；以β-actin作内参照、以光密度比值作为其mRNA表达量。试验数据以(
±s)表示，采用t检验。
2.结果：20例ASO患者ET、NO分别为(108.96±9.76)μmol/L、(1.68±0.41)μmol/L；而对照组分别为(56.78±7.95) μmol/L、(5.87±1.04)μmol/L，患者组与正常对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。
患者组NOS为(0.139±0.056)nmol.mg-1.min-1。正常组为(0.255±0.026)nmol.mg-1.min-1，ASO病变血管NOS活性有显著性降低(P<0.01)；ASO病变血管早、中、晚期NOS活性分别为：(0.211±0.014)nmol.mg-1.min-1、(0.132±0.013)nmol.mg-1.min-1、(0.078±0.006)nmol.mg-1.min-1，三者之差异有显著性(P<0.01)，即NOS活性随病情加重逐渐降低。
, 百拇医药
以ET mRNA、NOS mRNA与β-actin光密度比值作单位，结果ASO血管ET mRNA、iNOS mRNA、cNOS mRNA分别为(0.518±0.222)、(0.155±0.040)、(0.404±0.088)，对照组分别为(0.244±0.033)、(0.203±0.034)、(0.582±0.019)，两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。早、中、晚期ASO血管组织ET mRNA、iNOS mRNA、cNOS mRNA表达差异也均有显著性意义(P<0.01)。
3.讨论：资料表明[3]，ASO患者血浆ET明显升高、NO明显降低，且同ASO临床分期具有相关性，即随着ASO病情加重ET逐渐升高，血浆NO水平逐渐降低[3]，本研究结果支持上述观点。血浆ET升高、NO降低会使血管处于持续痉挛状态，引起平滑肌细胞过度增生，内皮细胞进一步损伤，脂质渗入、单核细胞浸润，吞噬脂质形成泡沫细胞，粥样斑块形成，进一步发展为ASO；ASO造成组织缺血缺氧，又进一步损伤内皮细胞，而损伤的内皮细胞再次释放过量的ET入血。由于缺血缺氧，NOS活性降低，NO合成进一步减少，释放入血的ET/NO平衡失调，又进一步加重ASO，形成恶性循环，为从基因水平探讨ET、NO在ASO形成中的地位和作用，探讨ET、NO升降机制，我们对20例接受截肢手术和转流手术的ASO患者进行病变血管ET、NOS mRNA表达和NOS活性测定。结果表明：NOS活性于ASO早期即明显降低，晚期降至最低水平；ET mRNA于ASO早期即过度表达，晚期达最高峰；而iNOS mRNA和cNOS mRNA表达量则相反，与Deliconstanttinos等[4]报道一致。iNOS、cNOS低表达和NOS活性降低，必然导致其合成分泌水平降低，是血浆NO降低的最直接原因之一。血管ET mRNA高表达亦不难解释血液ET水平的升高。本实验充分证明了ET、NO在分子基因水平参与了ASO的形成和发展。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Wu KK. Endothelial prostaglandin and nitric oxide synthesis in atherosclerosis and thrombosis. J Formos Med Assoc， 1996,95:661-666.
2 Buttery LD, Springall DR, Chester AH,et al. Inducible nitric oxide synthase is present within human atherosclerotic lesion and promotes the formation and activity of peroxynitrite. Lab Invest，1996,75:77-85.
3 Lerman A,Holmes DR,Bell MR, et al.endothelin in coronary endothelial dysfunction and early atheroclerosis in humans. Circulation，1995,92:2426-2431.
4 Deliconstanttinos G,Viliotou V, Stavrides JG. Modulation of particulate nitric oxide synthase activity and peroxynitrite sythesis in cholesterol enriched endothelial cell membranes. Biochem Pharmacol，1995,49:1589-1600.
(收稿：1998-08-19 修回：1999-02-20), http://www.100md.com
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院血管外科(王春喜)；解放军总医院普通外科(梁发启)；天津医科大学总医院外科(齐清会、吴咸中)
关键词：
中华外科杂志990729 为从分子生物学水平探讨内皮素(endothelins,ET)、一氧化氮(nitic oxide,N0)在动脉硬化闭塞症(atherosclerosis obliterans,ASO)形成和发展中的地位，我们选择20例截肢或接受转流手术的ASO患者，检测其血浆ET、N0水平及闭塞血管一氧化氮合酶(NOS)活性，观察ASO血管ET mRNA、NOS mRNA表达情况，结果报道如下。
1.资料与方法：本组ASO患者20例，其中男19例，女1例。骼动脉12例次，股动脉18例次，动脉12例次，胫后动脉10例次，足背动脉8例次。共切取60处ASO血管。另选择20例正常下肢动脉血管(外伤性截肢和新鲜尸体)作为对照组。对60块动脉粥样硬化血管标本经大体解剖、光镜和电子显微镜检查分为ASO早期(脂纹期)、中期(粥样斑块期)、晚期(血管高度狭窄或完全闭塞，内见粥样物质、血栓及肉芽组织形成的条索状物)。
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血浆ET采用放射免疫法测定；N0采用Grisse法；NOS活性采用氧合血红蛋白还原分光光度法；ET mRNA、NOS mRNA采用RT-PCR方法。参照文献设计特异性引物[1，2]，ET为230 bp,结构型N0合酶(constructive NOS，cNOS)为599 bp,诱导型NO合酶(inducible NOS，iNOS)为576 bp，β-actin为540 bp；以β-actin作内参照、以光密度比值作为其mRNA表达量。试验数据以(
±s)表示，采用t检验。2.结果：20例ASO患者ET、NO分别为(108.96±9.76)μmol/L、(1.68±0.41)μmol/L；而对照组分别为(56.78±7.95) μmol/L、(5.87±1.04)μmol/L，患者组与正常对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。
患者组NOS为(0.139±0.056)nmol.mg-1.min-1。正常组为(0.255±0.026)nmol.mg-1.min-1，ASO病变血管NOS活性有显著性降低(P<0.01)；ASO病变血管早、中、晚期NOS活性分别为：(0.211±0.014)nmol.mg-1.min-1、(0.132±0.013)nmol.mg-1.min-1、(0.078±0.006)nmol.mg-1.min-1，三者之差异有显著性(P<0.01)，即NOS活性随病情加重逐渐降低。
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以ET mRNA、NOS mRNA与β-actin光密度比值作单位，结果ASO血管ET mRNA、iNOS mRNA、cNOS mRNA分别为(0.518±0.222)、(0.155±0.040)、(0.404±0.088)，对照组分别为(0.244±0.033)、(0.203±0.034)、(0.582±0.019)，两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。早、中、晚期ASO血管组织ET mRNA、iNOS mRNA、cNOS mRNA表达差异也均有显著性意义(P<0.01)。
3.讨论：资料表明[3]，ASO患者血浆ET明显升高、NO明显降低，且同ASO临床分期具有相关性，即随着ASO病情加重ET逐渐升高，血浆NO水平逐渐降低[3]，本研究结果支持上述观点。血浆ET升高、NO降低会使血管处于持续痉挛状态，引起平滑肌细胞过度增生，内皮细胞进一步损伤，脂质渗入、单核细胞浸润，吞噬脂质形成泡沫细胞，粥样斑块形成，进一步发展为ASO；ASO造成组织缺血缺氧，又进一步损伤内皮细胞，而损伤的内皮细胞再次释放过量的ET入血。由于缺血缺氧，NOS活性降低，NO合成进一步减少，释放入血的ET/NO平衡失调，又进一步加重ASO，形成恶性循环，为从基因水平探讨ET、NO在ASO形成中的地位和作用，探讨ET、NO升降机制，我们对20例接受截肢手术和转流手术的ASO患者进行病变血管ET、NOS mRNA表达和NOS活性测定。结果表明：NOS活性于ASO早期即明显降低，晚期降至最低水平；ET mRNA于ASO早期即过度表达，晚期达最高峰；而iNOS mRNA和cNOS mRNA表达量则相反，与Deliconstanttinos等[4]报道一致。iNOS、cNOS低表达和NOS活性降低，必然导致其合成分泌水平降低，是血浆NO降低的最直接原因之一。血管ET mRNA高表达亦不难解释血液ET水平的升高。本实验充分证明了ET、NO在分子基因水平参与了ASO的形成和发展。
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参考文献
1 Wu KK. Endothelial prostaglandin and nitric oxide synthesis in atherosclerosis and thrombosis. J Formos Med Assoc， 1996,95:661-666.
2 Buttery LD, Springall DR, Chester AH,et al. Inducible nitric oxide synthase is present within human atherosclerotic lesion and promotes the formation and activity of peroxynitrite. Lab Invest，1996,75:77-85.
3 Lerman A,Holmes DR,Bell MR, et al.endothelin in coronary endothelial dysfunction and early atheroclerosis in humans. Circulation，1995,92:2426-2431.
4 Deliconstanttinos G,Viliotou V, Stavrides JG. Modulation of particulate nitric oxide synthase activity and peroxynitrite sythesis in cholesterol enriched endothelial cell membranes. Biochem Pharmacol，1995,49:1589-1600.
(收稿：1998-08-19 修回：1999-02-20), http://www.100md.com