HPLC法测定牛黄清心丸中甘草酸含量
作者：杜海燕* 徐晓阳 金兆祥 杜克文 何跃华 罗 辉 宋如松
单位：天津达仁堂制药厂 300142
关键词：牛黄清心丸；甘草酸；含量测定；HPLC法
中草药990715 摘 要 用HPLC法测定牛黄清心丸中甘草酸的含量。采用ODS-5柱，4.6mm×150mm，流动相为0.05mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)，流速为1.0mL/min，检测波长254nm。测定结果平均回收率为98.82%，RSD为1.12%。检测量在0.564～2.068μg之间线性关系良好。
牛黄清心丸是由牛黄、当归、甘草、冰片等29味中药组成的大蜜丸制剂，用于清心化痰，镇惊祛风。为了保证产品质量，方便患者服用，改成水蜜丸，并选择测定甘草酸的含量作为质量控制的一个指标。有关甘草酸的测定方法，文献报道有薄层扫描法[1]、薄层紫外法[2]、薄层光密度法[3]和HPLC法[4～6]，经比较我们采用HPLC法测定牛黄清心丸中甘草酸的含量，方法简便，测定迅速，结果准确、稳定。
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1 仪器与试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱系统，SPD-6AV紫外检测器；SCL-6A系统控制器；CTO-6A恒温箱；CR-3A数据处理机。
甘草酸对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)；牛黄清心丸由天津达仁堂制药厂提供。乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
ODS-5分析柱(4.6 mm×150 mm)，流动相：0.05 mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)，检测波长：254 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：40℃，进样量：均为10 μL,纸速：2 mm/min。
3 方法与结果
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3.1 线性关系试验：精密称取甘草酸适量，用50%乙醇制成0.188 mg/mL溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液3、5、7、9、11 μL，按上述色谱条件依次进样分析、测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程Y=-1.1×102+1.32×102X，r=0.9999。线性范围0.564～2.068 μg。
3.2 精密度试验：精密吸取对照品溶液5 μL,重复进样5次，测定结果RSD=0.76%。表明仪器精密度较好。
3.3 样品测定：取样品40粒，剪碎，混匀，精称2.0 g于10 mL离心管中，加50%乙醇至刻度，超声波提取15 min，离心(转速为3 000 r/min)。取上清液，残渣用50%乙醇再提取2次，合并上清液于50 mL容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL进样，照上述色谱条件测定，用外标一点法计算，结果见表1。
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表1 牛黄清心水蜜丸中甘草酸含量测定结果(n=3) 批号
970601
970602
970603
甘草酸含量
0.283
0.294
0.266
RSD(%)
1.27
1.19
1.15
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3.4 稳定性试验：取样品溶液(批号970501)，在0、1、2、3、4、5 h分别进样10 μL，记录峰面积，结果6次进样峰面积的RSD为1.99%。说明供试品溶液的吸收面积在5 h内基本无变化，较稳定。
3.5 重复性试验：取同一批样品，精密称取6份，按样品含量测定方法提取、测定、计算。平均含量为0.290%，RSD为1.19%。
3.6 加样回收率试验：取同批甘草酸含量为0.280%的样品，剪碎，混匀，精密称取5份各1.0 g，各精密加入0.56 mg/mL的甘草酸对照品溶液5 mL，均依样品测定项下方法操作，计算回收率为98.82%，RSD为1.12%。
3.7 牛黄清心丸空白试验：照上述色谱条件测定牛黄清心丸空白样品(不含甘草的牛黄清心丸样品)与甘草酸对照品液测定结果相比较，在甘草酸出峰位置处无其他干扰。
, http://www.100md.com 4 小结与讨论
4.1 波长的选择：文献[4～6]报道甘草酸的检测波长有238、248、280 nm不等。本文应用紫外分光光度计测定甘草酸的紫外吸收光谱图，在254 nm处有最大吸收，故选择254 nm为检测波长。
4.2 流动相的选择：牛黄清心丸为中药大复方制剂，药味复杂。实验中考察了多种流动相，发现提高流动相的酸性可以改善样品峰的峰形及分离度，又考虑pH太低不利于色谱柱的保养，故加入0.05 mol/L KH2PO4缓冲液。结果表明，本文流动相采用0.05 mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)可排除处方中共存的药材和杂质的干扰，甘草酸峰形良好，与杂质峰达基线分离。
4.3 缓冲液的配制：精称6.8 g KH2PO4，置1 000mL容量瓶中，加入2mL磷酸，用水稀释至刻度，摇匀，即得0.05mol/L KH2PO4(pH=2.5)的缓冲液，该缓冲液必须现用现配。
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参考文献
1 石力夫，等.中草药，1993，24(6)：296
2 毛丽珍，等.中成药，1992，14(8)：18
3 任家礼，等.中草药，1990，21(1)：18
4 王 荣，等.中国药学杂志，1996，31(9)：548
5 朱维华.药物分析杂志，1994，14(5)：47
6 崔铉玖，等.药物分析杂志，1996，16(5)：323
收稿日期：1998-12-25, 百拇医药(杜海燕* 徐晓阳 金兆祥 杜克文 何跃华 罗 辉 宋如松)
单位：天津达仁堂制药厂 300142
关键词：牛黄清心丸；甘草酸；含量测定；HPLC法
中草药990715 摘 要 用HPLC法测定牛黄清心丸中甘草酸的含量。采用ODS-5柱，4.6mm×150mm，流动相为0.05mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)，流速为1.0mL/min，检测波长254nm。测定结果平均回收率为98.82%，RSD为1.12%。检测量在0.564～2.068μg之间线性关系良好。
牛黄清心丸是由牛黄、当归、甘草、冰片等29味中药组成的大蜜丸制剂，用于清心化痰，镇惊祛风。为了保证产品质量，方便患者服用，改成水蜜丸，并选择测定甘草酸的含量作为质量控制的一个指标。有关甘草酸的测定方法，文献报道有薄层扫描法[1]、薄层紫外法[2]、薄层光密度法[3]和HPLC法[4～6]，经比较我们采用HPLC法测定牛黄清心丸中甘草酸的含量，方法简便，测定迅速，结果准确、稳定。
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1 仪器与试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱系统，SPD-6AV紫外检测器；SCL-6A系统控制器；CTO-6A恒温箱；CR-3A数据处理机。
甘草酸对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用)；牛黄清心丸由天津达仁堂制药厂提供。乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
ODS-5分析柱(4.6 mm×150 mm)，流动相：0.05 mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)，检测波长：254 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：40℃，进样量：均为10 μL,纸速：2 mm/min。
3 方法与结果
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3.1 线性关系试验：精密称取甘草酸适量，用50%乙醇制成0.188 mg/mL溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液3、5、7、9、11 μL，按上述色谱条件依次进样分析、测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程Y=-1.1×102+1.32×102X，r=0.9999。线性范围0.564～2.068 μg。
3.2 精密度试验：精密吸取对照品溶液5 μL,重复进样5次，测定结果RSD=0.76%。表明仪器精密度较好。
3.3 样品测定：取样品40粒，剪碎，混匀，精称2.0 g于10 mL离心管中，加50%乙醇至刻度，超声波提取15 min，离心(转速为3 000 r/min)。取上清液，残渣用50%乙醇再提取2次，合并上清液于50 mL容量瓶中，用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL进样，照上述色谱条件测定，用外标一点法计算，结果见表1。
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表1 牛黄清心水蜜丸中甘草酸含量测定结果(n=3) 批号
970601
970602
970603
甘草酸含量
0.283
0.294
0.266
RSD(%)
1.27
1.19
1.15
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3.4 稳定性试验：取样品溶液(批号970501)，在0、1、2、3、4、5 h分别进样10 μL，记录峰面积，结果6次进样峰面积的RSD为1.99%。说明供试品溶液的吸收面积在5 h内基本无变化，较稳定。
3.5 重复性试验：取同一批样品，精密称取6份，按样品含量测定方法提取、测定、计算。平均含量为0.290%，RSD为1.19%。
3.6 加样回收率试验：取同批甘草酸含量为0.280%的样品，剪碎，混匀，精密称取5份各1.0 g，各精密加入0.56 mg/mL的甘草酸对照品溶液5 mL，均依样品测定项下方法操作，计算回收率为98.82%，RSD为1.12%。
3.7 牛黄清心丸空白试验：照上述色谱条件测定牛黄清心丸空白样品(不含甘草的牛黄清心丸样品)与甘草酸对照品液测定结果相比较，在甘草酸出峰位置处无其他干扰。
, http://www.100md.com 4 小结与讨论
4.1 波长的选择：文献[4～6]报道甘草酸的检测波长有238、248、280 nm不等。本文应用紫外分光光度计测定甘草酸的紫外吸收光谱图，在254 nm处有最大吸收，故选择254 nm为检测波长。
4.2 流动相的选择：牛黄清心丸为中药大复方制剂，药味复杂。实验中考察了多种流动相，发现提高流动相的酸性可以改善样品峰的峰形及分离度，又考虑pH太低不利于色谱柱的保养，故加入0.05 mol/L KH2PO4缓冲液。结果表明，本文流动相采用0.05 mol/L KH2PO4(pH=2.5)-MeCN(21∶10)可排除处方中共存的药材和杂质的干扰，甘草酸峰形良好，与杂质峰达基线分离。
4.3 缓冲液的配制：精称6.8 g KH2PO4，置1 000mL容量瓶中，加入2mL磷酸，用水稀释至刻度，摇匀，即得0.05mol/L KH2PO4(pH=2.5)的缓冲液，该缓冲液必须现用现配。
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参考文献
1 石力夫，等.中草药，1993，24(6)：296
2 毛丽珍，等.中成药，1992，14(8)：18
3 任家礼，等.中草药，1990，21(1)：18
4 王 荣，等.中国药学杂志，1996，31(9)：548
5 朱维华.药物分析杂志，1994，14(5)：47
6 崔铉玖，等.药物分析杂志，1996，16(5)：323
收稿日期：1998-12-25, 百拇医药(杜海燕* 徐晓阳 金兆祥 杜克文 何跃华 罗 辉 宋如松)