复方参七汤抑制MNNG诱发大鼠胃腺癌和PCNA、Cyclin D1表达
作者：沈洪薰 周树军 陈 莉 陆丽萍 于 秀 陈玉泉
单位：南通医学院附属医院普外科 江苏省南通市 226001
关键词：胃肿瘤；复方参七汤；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
世界华人消化杂志990729
中国图书馆分类号 R735.2
Subject headings stomach neoplasms; compound shenqitang; prolifrating cell nuclear antigen; Cyclin D1; immunohistochemistry
1 材料和方法
1.1 材料 动物为纯系Wistar大鼠，♂，6wk，体重45g左右，共100只，分成复方参七汤组和对照组各50只. 化学致癌剂N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N＇-Nitro-N-Nitrosong-uanidine, MNNG). 复方参七汤由参三七、人参、黄芪、当归、川草乌、半枝莲、半边莲、陈皮、木香、甘草、谷麦芽等组成，每剂中药煎成200mL药液备用.
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1.2 方法 复方参七汤组自由摄取MNNG 100mg/L溶液，1次/d，连续9mo. 对照组自由摄取MNNG 100mg/L，连续9mo. 饲养9mo，两组生存大鼠分批处死，取胃、十二指肠，固定于100mL/L福尔马林溶液，常规石蜡切片，HE染色，以肉眼和显微镜下观察病理组织学改变. PCNA和Cyclin D1用免疫组织化学染色，根据阳性细胞数量分为4级：阳性细胞数<10%为(-)；阳性细胞数10%～25%为(±)；阳性细胞数25%～50%为(+)；阳性细胞数>50%为(++). 本组阳性细胞数>25%定为阳性表达，>50%为强阳性表达.
2 结果
2.1 大鼠胃腺癌的发生 ①复方参七汤组腺胃组织呈正常者74.4%(32/43)，癌前期病变呈不典型增生者19%(8/43)，腺胃癌者7%(3/43)，分别为管状腺癌、低分化癌和粘液腺癌. ②对照组癌前期病变41%(16/39)，腺胃癌59%(23/39)，管状腺癌17只，低分化癌2只，未分化癌3只和粘液腺癌1只，合并十二指肠癌5只中，腺癌3只，粘液腺癌2只.
, 百拇医药
2.2 腺胃腺癌组织PCNA，Cyclin D1表达 ①复方参七汤组36只大鼠中，粘膜正常25只，PCNA无阳性表达，癌前期病变者8只，PCNA阳性25%(2/8)，胃腺癌者3只，PCNA阳性100%(3/3). ②对照组33只大鼠，癌前期病变者13只，PCNA阳性46%(6/13)，腺胃癌者20只，PCNA阳性表达为95%(19/20)，二者之间有显著性差异(P<0.01). ③复方参七汤组35只大鼠粘膜正常者25只，Cyclin D1阳性12%(3/25) ，癌前期病变者7只，Cyclin D1阳性28%(2/7)，腺胃腺癌者3只，Cyclin D1阳性100%(3/3). ④对照组35只大鼠中，癌前期病变者14只，Cyclin D1阳性14%(2/14)，腺胃腺癌者21只，Cyclin D1阳性95%(20/21)，二者间有显著性差异(P<0.01).
3 讨论
3.1 病理组织学研究复方参七汤可能抑癌机制 我们长期从事中西医结合治疗胃癌切除术后患者的临床疗效研究. 复方参七汤组，5a，8a和10a生存率分别为80%(16/20)，60%(9/15)和57%(8/14)显著地高于对照组(手术，化疗MF方案)的59%(17/29)，40%(4/10)和14%(1/7)[1]. 临床证明复方参七汤疗效确切，提高5a生存率. 本实验成功地建立MNNG诱发Wistar大鼠胃腺癌模型，观察到大鼠胃腺癌发生过程，最初病变为充血， 继而红白相间伴糜烂等，显微镜下示腺体萎缩和程度不同的不典型增生，最后发生胃腺癌. 复方参七汤的抑癌机制是可能保护大鼠腺胃粘膜作用，避免化学致癌剂MNNG对腺胃粘膜损害作用；减轻或降低MNNG对大鼠腺胃粘膜损害程度. 可能抑制大鼠腺胃癌前病变发生癌变，降低MNNG诱发大鼠胃腺癌发生.
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3.2 肿瘤分子生物学 PCNA、Cyclin D1阳性表达研究复方参七汤可能抑癌机制. 本实验应用PCNA和Cyclin D1阳性表达程度反映大鼠胃腺细胞增殖程度和增殖性细胞周期G1的变化. 增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(Cyclin D1)均在G1期或G1/S期发挥作用. PCNA为36KD的核蛋白，具有促进DNA聚合酶的功能，在细胞周期G1期合成升高，到S期达高峰，M期降低. Cyclin D1为G1期细胞周期蛋白，具有启动细胞周期并能促进DNA合成的周期蛋白. 我们曾研究人胃正常粘膜、良性溃疡、癌旁粘膜和胃癌的PCNA标记指数(PCNA Li)；Cyclin D1阳性表达为本实验PCNA和Cyclin D1阳性表达提供依据. 我们研究发现：①PCNA和Cyclin D1阳性表达水平不同，反映了体细胞恶变过程的不同阶段. ②两组PCNA，Cyclin D1总阳性表达的差异取决于两组体细胞恶变过程中比例不同. 复方参七汤组大鼠胃腺体细胞恶变过程仅占26%，而对照组大鼠腺胃体细胞恶变过程为100%. ③两组PCNA和Cyclin D1阳性表达的差异，表明了复方参七汤具有抑癌作用.
通讯作者 沈洪薰
4 参考文献
1 樊勇，沈洪薰，陈玉泉. 复方参七汤治疗胃癌切除术后临床疗效观察. 江苏医药，1998；24：108
收稿日期 1999-01-09 修回日期 1999-03-28, 百拇医药
单位：南通医学院附属医院普外科 江苏省南通市 226001
关键词：胃肿瘤；复方参七汤；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
世界华人消化杂志990729
中国图书馆分类号 R735.2
Subject headings stomach neoplasms; compound shenqitang; prolifrating cell nuclear antigen; Cyclin D1; immunohistochemistry
1 材料和方法
1.1 材料 动物为纯系Wistar大鼠，♂，6wk，体重45g左右，共100只，分成复方参七汤组和对照组各50只. 化学致癌剂N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N＇-Nitro-N-Nitrosong-uanidine, MNNG). 复方参七汤由参三七、人参、黄芪、当归、川草乌、半枝莲、半边莲、陈皮、木香、甘草、谷麦芽等组成，每剂中药煎成200mL药液备用.
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1.2 方法 复方参七汤组自由摄取MNNG 100mg/L溶液，1次/d，连续9mo. 对照组自由摄取MNNG 100mg/L，连续9mo. 饲养9mo，两组生存大鼠分批处死，取胃、十二指肠，固定于100mL/L福尔马林溶液，常规石蜡切片，HE染色，以肉眼和显微镜下观察病理组织学改变. PCNA和Cyclin D1用免疫组织化学染色，根据阳性细胞数量分为4级：阳性细胞数<10%为(-)；阳性细胞数10%～25%为(±)；阳性细胞数25%～50%为(+)；阳性细胞数>50%为(++). 本组阳性细胞数>25%定为阳性表达，>50%为强阳性表达.
2 结果
2.1 大鼠胃腺癌的发生 ①复方参七汤组腺胃组织呈正常者74.4%(32/43)，癌前期病变呈不典型增生者19%(8/43)，腺胃癌者7%(3/43)，分别为管状腺癌、低分化癌和粘液腺癌. ②对照组癌前期病变41%(16/39)，腺胃癌59%(23/39)，管状腺癌17只，低分化癌2只，未分化癌3只和粘液腺癌1只，合并十二指肠癌5只中，腺癌3只，粘液腺癌2只.
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2.2 腺胃腺癌组织PCNA，Cyclin D1表达 ①复方参七汤组36只大鼠中，粘膜正常25只，PCNA无阳性表达，癌前期病变者8只，PCNA阳性25%(2/8)，胃腺癌者3只，PCNA阳性100%(3/3). ②对照组33只大鼠，癌前期病变者13只，PCNA阳性46%(6/13)，腺胃癌者20只，PCNA阳性表达为95%(19/20)，二者之间有显著性差异(P<0.01). ③复方参七汤组35只大鼠粘膜正常者25只，Cyclin D1阳性12%(3/25) ，癌前期病变者7只，Cyclin D1阳性28%(2/7)，腺胃腺癌者3只，Cyclin D1阳性100%(3/3). ④对照组35只大鼠中，癌前期病变者14只，Cyclin D1阳性14%(2/14)，腺胃腺癌者21只，Cyclin D1阳性95%(20/21)，二者间有显著性差异(P<0.01).
3 讨论
3.1 病理组织学研究复方参七汤可能抑癌机制 我们长期从事中西医结合治疗胃癌切除术后患者的临床疗效研究. 复方参七汤组，5a，8a和10a生存率分别为80%(16/20)，60%(9/15)和57%(8/14)显著地高于对照组(手术，化疗MF方案)的59%(17/29)，40%(4/10)和14%(1/7)[1]. 临床证明复方参七汤疗效确切，提高5a生存率. 本实验成功地建立MNNG诱发Wistar大鼠胃腺癌模型，观察到大鼠胃腺癌发生过程，最初病变为充血， 继而红白相间伴糜烂等，显微镜下示腺体萎缩和程度不同的不典型增生，最后发生胃腺癌. 复方参七汤的抑癌机制是可能保护大鼠腺胃粘膜作用，避免化学致癌剂MNNG对腺胃粘膜损害作用；减轻或降低MNNG对大鼠腺胃粘膜损害程度. 可能抑制大鼠腺胃癌前病变发生癌变，降低MNNG诱发大鼠胃腺癌发生.
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3.2 肿瘤分子生物学 PCNA、Cyclin D1阳性表达研究复方参七汤可能抑癌机制. 本实验应用PCNA和Cyclin D1阳性表达程度反映大鼠胃腺细胞增殖程度和增殖性细胞周期G1的变化. 增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(Cyclin D1)均在G1期或G1/S期发挥作用. PCNA为36KD的核蛋白，具有促进DNA聚合酶的功能，在细胞周期G1期合成升高，到S期达高峰，M期降低. Cyclin D1为G1期细胞周期蛋白，具有启动细胞周期并能促进DNA合成的周期蛋白. 我们曾研究人胃正常粘膜、良性溃疡、癌旁粘膜和胃癌的PCNA标记指数(PCNA Li)；Cyclin D1阳性表达为本实验PCNA和Cyclin D1阳性表达提供依据. 我们研究发现：①PCNA和Cyclin D1阳性表达水平不同，反映了体细胞恶变过程的不同阶段. ②两组PCNA，Cyclin D1总阳性表达的差异取决于两组体细胞恶变过程中比例不同. 复方参七汤组大鼠胃腺体细胞恶变过程仅占26%，而对照组大鼠腺胃体细胞恶变过程为100%. ③两组PCNA和Cyclin D1阳性表达的差异，表明了复方参七汤具有抑癌作用.
通讯作者 沈洪薰
4 参考文献
1 樊勇，沈洪薰，陈玉泉. 复方参七汤治疗胃癌切除术后临床疗效观察. 江苏医药，1998；24：108
收稿日期 1999-01-09 修回日期 1999-03-28, 百拇医药