一种分离和鉴定幽门螺杆菌的培养基
作者：杨 艺 邓长生
单位：湖北医科大学附属第二医院消化内科 湖北省武汉市 430071
关键词：螺杆菌，幽门/分离和提纯；培养基；三苯基四氯唑
世界华人消化杂志990754
中国图书馆分类号 R446.5
Subject headings Helicobacter pylori/isolation and purification; medium; triphenyl tetrazolium chloride
1 材料和方法
1.1 材料 ①胃窦部粘膜活检标本：取自1998-06/11间，因上消化道症状在我院门诊行内镜检查的部分患者. ②主要试剂：厌氧菌分离培养基、新鲜羊血、万古霉素、多粘菌素B(sigma)、氯化-2，3，5-三苯基四氯唑(TTC)和TMP.
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1.2 方法 常规制作Hp固体培养基[1]. 内镜直视下，在胃窦部距幽门3cm～5cm范围内钳取粘膜，立即放入盛有0.3mL 200g/L葡萄糖溶液的无菌匀浆器中，在2h内送至实验室接种. 每块粘膜同时接种普通平板与TTC平板. 培养出的细菌均作革兰染色、尿素酶试验、触酶试验和氧化酶试验鉴定Hp. 部分标本经透射电镜观察. 若培养7d仍无Hp生长者，视为Hp培养阴性.
2 结果
2.1 Hp的分离 105块胃窦部活检粘膜中，有40块检出Hp，两种平板的检出率完全相同，Hp在TTC平板上表现为0.5mm～1mm、圆形、边界清楚、稍隆起的金黄色菌落，一般在48h～72h出现；Hp在普通平板上表现为针尖大、水滴状、透明的菌落，一般在72h～96h出现.
2.2 Hp的鉴定 Hp经革兰染色后在光镜下观察到革兰阴性的弯曲杆菌，呈逗点状、海欧状或S状. 透射电镜观察Hp菌体呈螺旋状弯曲，末端钝圆，一端或两端带有一根或数根鞭毛. Hp尿素酶、触酶、氧化酶试验均阳性.
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3 讨论
本实验用普通选择性培养基和TTC选择性培养基同时培养了105例胃窦部活检标本，检出了40株Hp. 虽然两种平板的Hp检出率完全相同，但Hp可见菌落在TTC平板上出现较早，且Hp菌落在TTC平板上的金黄色光泽非常容易辨认，即使有杂菌污染仍容易分离纯化；而Hp菌落在普通平板上出现较晚，且该菌落呈针尖样透明的外观而不易辨认，必须仔细观察才可看到细小的菌落，有时甚至必须试探性地挑取可疑部分经革兰染色才能确认其存在，稍不留意，极易漏检. 另外，Hp菌落容易与形态类似的其他细菌的菌落相混淆.
TTC是一种活性染料，能溶于水而呈无色，在细菌生长过程中，它被还原为有色的不溶性甲月 替复合物. 空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌等也能将TTC还原为粉红色不溶性复合物，但它们的菌落均无金黄色光泽，只有Hp的菌落才具有这种光泽[2]. 因此，通过Hp菌落这种独特的外观，很容易将Hp分离出来. 而且，在TTC平板上所有呈金黄色菌落的细菌，均经生化反应和革兰染色而鉴定为Hp，部分细菌还经电镜确认. 故用TTC平板培养Hp不仅有利于Hp的辨认分离，而且有利于对Hp进行初步鉴定，确是一种简易、经济、实用的培养方法，有推广应用前景.
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通讯作者 杨艺
4 参考文献
1 朱尤庆，贾博琦. 简易法培养幽门螺杆菌387例结果分析. 中国实用内科杂志，1998；18：68-683
2 Dulciene MMQ, Edilberto NM, Gifone AR. Indicator medium for isolation of Campylobacter Pylori. J Clin microbiol, 1987;25:2378-2379
收稿日期 1999-02-05 修回日期 1999-04-03, http://www.100md.com
单位：湖北医科大学附属第二医院消化内科 湖北省武汉市 430071
关键词：螺杆菌，幽门/分离和提纯；培养基；三苯基四氯唑
世界华人消化杂志990754
中国图书馆分类号 R446.5
Subject headings Helicobacter pylori/isolation and purification; medium; triphenyl tetrazolium chloride
1 材料和方法
1.1 材料 ①胃窦部粘膜活检标本：取自1998-06/11间，因上消化道症状在我院门诊行内镜检查的部分患者. ②主要试剂：厌氧菌分离培养基、新鲜羊血、万古霉素、多粘菌素B(sigma)、氯化-2，3，5-三苯基四氯唑(TTC)和TMP.
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1.2 方法 常规制作Hp固体培养基[1]. 内镜直视下，在胃窦部距幽门3cm～5cm范围内钳取粘膜，立即放入盛有0.3mL 200g/L葡萄糖溶液的无菌匀浆器中，在2h内送至实验室接种. 每块粘膜同时接种普通平板与TTC平板. 培养出的细菌均作革兰染色、尿素酶试验、触酶试验和氧化酶试验鉴定Hp. 部分标本经透射电镜观察. 若培养7d仍无Hp生长者，视为Hp培养阴性.
2 结果
2.1 Hp的分离 105块胃窦部活检粘膜中，有40块检出Hp，两种平板的检出率完全相同，Hp在TTC平板上表现为0.5mm～1mm、圆形、边界清楚、稍隆起的金黄色菌落，一般在48h～72h出现；Hp在普通平板上表现为针尖大、水滴状、透明的菌落，一般在72h～96h出现.
2.2 Hp的鉴定 Hp经革兰染色后在光镜下观察到革兰阴性的弯曲杆菌，呈逗点状、海欧状或S状. 透射电镜观察Hp菌体呈螺旋状弯曲，末端钝圆，一端或两端带有一根或数根鞭毛. Hp尿素酶、触酶、氧化酶试验均阳性.
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3 讨论
本实验用普通选择性培养基和TTC选择性培养基同时培养了105例胃窦部活检标本，检出了40株Hp. 虽然两种平板的Hp检出率完全相同，但Hp可见菌落在TTC平板上出现较早，且Hp菌落在TTC平板上的金黄色光泽非常容易辨认，即使有杂菌污染仍容易分离纯化；而Hp菌落在普通平板上出现较晚，且该菌落呈针尖样透明的外观而不易辨认，必须仔细观察才可看到细小的菌落，有时甚至必须试探性地挑取可疑部分经革兰染色才能确认其存在，稍不留意，极易漏检. 另外，Hp菌落容易与形态类似的其他细菌的菌落相混淆.
TTC是一种活性染料，能溶于水而呈无色，在细菌生长过程中，它被还原为有色的不溶性甲月 替复合物. 空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌等也能将TTC还原为粉红色不溶性复合物，但它们的菌落均无金黄色光泽，只有Hp的菌落才具有这种光泽[2]. 因此，通过Hp菌落这种独特的外观，很容易将Hp分离出来. 而且，在TTC平板上所有呈金黄色菌落的细菌，均经生化反应和革兰染色而鉴定为Hp，部分细菌还经电镜确认. 故用TTC平板培养Hp不仅有利于Hp的辨认分离，而且有利于对Hp进行初步鉴定，确是一种简易、经济、实用的培养方法，有推广应用前景.
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通讯作者 杨艺
4 参考文献
1 朱尤庆，贾博琦. 简易法培养幽门螺杆菌387例结果分析. 中国实用内科杂志，1998；18：68-683
2 Dulciene MMQ, Edilberto NM, Gifone AR. Indicator medium for isolation of Campylobacter Pylori. J Clin microbiol, 1987;25:2378-2379
收稿日期 1999-02-05 修回日期 1999-04-03, http://www.100md.com