鼻咽癌基膜表达与肿瘤生物学特性的关系
作者：杨德兴1 江九祥2 彭身华4 苏淡宜3 谢寿诚4
单位：杨德兴 梅州市卫生学校 1病理教研室，江九祥 外科教研室，苏淡宜 中心实验室(514031)；彭身华 谢寿诚 梅州市人民医院病理科
关键词：鼻咽肿瘤；层粘蛋白；Ⅳ型胶原；基膜；肿瘤转移
广东医学990705 【摘要】 目的 探讨鼻咽癌中基膜表达与肿瘤生物学特性的关系。方法 采用免疫组化ABC法检测60例鼻咽癌标本中层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达。结果 未分化癌的基膜表达明显不同于大圆形细胞癌(P<0.05)，均呈断续、缺失的改变，而大圆形细胞癌、低分化鳞癌则部分显示连续线状基膜。条索状、弥散性排列的癌实质基膜表达明显不同于巢状排列者(P<0.05)。此外，层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达在有无淋巴结转移两组间，差异也具有显著性意义(P<0.05)。结论 层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达可作为评估鼻咽癌细胞的分化、癌实质类型及淋巴结转移的有价值指标。
, 百拇医药
Relationship between the expression of basement membrane with tumor biologic characterization in carcinoma of nasopharynx
Yang Dexing, Jiang Jiuxiang, Peng Shenhua, et al.
Dept of Pathol, Meizhou Medical School, Meizhou 514031
【Abstract】 Objective To study relationship between expression of basement membrane (BM) in carcinoma of nasopharynx.Methods The expressions of laminin(LN) and collagen Ⅳ(CO Ⅳ) in 60 cases of nasopharyngeal carcinoma were detected with ABC method.Results The expressions of LN and CO Ⅳ were significantly different between undifferentiated carcinoma and large round cell carcinoma(P<0.05), as all of them had BM discontinuous and disappearing, but a part of large round cell carcinoma and poorly differentiated squamous carinoma showed continuous linear. The expressions of LN and CO Ⅳ were significantly different between carcinomatous parenchyma with tumor cells arranged in cords, diffusely and those in carcinoma nests(P<0.05). The expressions of LN and CO Ⅳ were also significantly different the two groups of between carcinoma with lymph node positivity and negativity one(P<0.05).Conclusion The expressions of LN and CO Ⅳ in nasopharyngeal carcinoma cell is a valuable parameter on evaluation cell differentiation, types of carcinomatous parenchyma and metastasis.
, http://www.100md.com
【Key words】 Nasopharynx neoplasms Laminin Collagen Ⅳ Basement membrane Neoplasm metastasis
基膜是分布广泛的细胞外基质成分，含有层粘蛋白、纤维蛋白等多种成分，构成了机体细胞与组织间的屏障。细胞发生恶变时，由于基膜在结构、分布和数量上都发生变化[1]，有利于肿瘤的浸润和转移。本文采用层粘蛋白和Ⅳ型胶原抗体检测鼻咽癌中基膜的表达，探讨基膜与癌细胞分化、癌实质类型和淋巴结转移的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 组织取材于梅州市人民医院病理科1996年1～6月间鼻咽癌活检病理蜡块标本共60例。其中低分化鳞癌37例，大圆形细胞癌13例，未分化癌10例，男43例，女17例，年龄20～65岁，平均44.6岁。
, http://www.100md.com 1.2 方法 将鼻咽癌标本作连续切片，片厚约5 μm，共切3张，1张作HE染色，2张行免疫组织化学染色。免疫组织化学染色(ABC法)步骤是：石蜡切片以二甲苯常规脱蜡，与阴性对照组织一起，乙醇脱水，置冰箱过夜；0.2%胃蛋白酶和0.1 mol HCL消化30 min；磷酸缓冲液(PBS， pH 7.4)漂洗5 min×3次；0.3% H2O2甲醛阻断内源性过氧化物酶，室温30 min；PBS漂洗5 min×3次；正常血清封闭非特异性位点，37℃，30 min；分别加抗LN抗体(1∶200)， CO Ⅳ抗体(1∶400)，于湿盒中，4℃冰箱过夜(阴性对照用PBS代替1抗)；置室温2 h后PBS漂洗5 min×3次；加生物素化羊抗兔或鼠IgG(37℃)1 h；PBS漂洗 5 min×3次；加ABC试剂， 37℃，1 h； PBS漂洗 5 min×3次；DAB显色，室温5～10 min；流水冲洗10 min，乙醇脱水，二甲苯透明；中性树胶封片。
1.3 统计方法 采用χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
层粘蛋白和Ⅳ型胶原染色基本一致，视为基膜染色。鼻咽癌组织中未受肿瘤浸润的上皮基膜、间质血管、淋巴管的基膜均显示连续的线状结构，呈深棕色。团块状癌巢周围基膜部分显示连续线状，部分中断，而弥散性分布的癌细胞周围基膜大多数呈断续，甚至缺失的改变。
2.1 鼻咽癌不同组织学类型的基膜表达 鼻咽癌不同组织学类型中，未分化癌与大圆形细胞癌比较其基膜(LN，CO Ⅳ)表达显示差异有显著性(P<0.05)。见表1。
表1 鼻咽癌不同组织学类型的基膜表达 (例) 组织学类型
连续线状
非连续线状
合计
低分化鳞癌
, http://www.100md.com
5
32
37
大圆形细胞癌
5
8
13
未分化癌
0
10
10
2.2 鼻咽癌实质类型的基膜表达 根据鼻咽癌实质结构形式不同分以下三种类型：①巢状：癌细胞聚集成巢，癌巢大小不等，与间质分界较明显，实质与间质比例不一。②条索状：癌细胞排列成细条索状，间质多为较致密的纤维组织。③弥散性：癌细胞不构成巢状或条索状，而是弥散分布。
, 百拇医药
鼻咽癌中癌实质呈条索状、弥散性排列分别与巢状比较其基膜(LN，CO Ⅳ)表达显示差异有显著性(P<0.05)，见表2。表2 鼻咽癌实质类型的基膜表达 (例) 组织学类型
连续线状
非连续线状
合计
巢状
8
15
23
条索状
1
19
, 百拇医药 20
网状
1
16
17
2.3 鼻咽癌有无淋巴结转移两组间的基膜表达 基膜(LN，CO Ⅳ)在鼻咽癌中有无淋巴结转移两组间表达差异有显著性(P<0.05)。见表3。表3 鼻咽癌有无淋巴结转移两组间的基膜表达 (例)
连续线状
非连续线状
合计
淋巴结转移
5
, 百拇医药
41
46
无淋巴结转移
5
9
14
3 讨论
本文应用免疫组织化学技术检测了LN、CO Ⅳ在鼻咽癌中的表达，观察到癌巢周围的基膜显示间断、分布不均，表明正常基膜结构完整性的破坏，同时显示基膜的丧失程度与癌分化有关。文献报道[2]肿瘤细胞合成Ⅳ型胶原依赖于它们的分化状态，低分化肿瘤合成能力低，而它的分解活动强，同一起源肿瘤的转移率与Ⅳ型胶原的分解呈正相关。Ⅳ型胶原为基底膜胶原，它对细胞在体内移动起阻遏作用。肿瘤细胞发生浸润和转移的条件之一在于它可以破坏Ⅳ型胶原，并逃离其束缚[3]。本实验观察到Ⅳ型胶原常位于巢状癌细胞周围，不规则索状或散在于间质的癌细胞周围常缺乏Ⅳ型胶原表达，巢状癌细胞表达Ⅳ型胶原阳性率显著高于条索型及弥散性癌细胞，表明鼻咽癌细胞表达Ⅳ型胶原与其生长方式有关。巢状癌细胞生长慢，浸润转移晚，条索型及弥散性癌细胞生长快，浸润转移早。
, http://www.100md.com
国外研究发现，恶性肿瘤细胞不但可以破坏宿主的基膜，还可以不断合成自身的基膜成分[4]。LN是基膜的主要组成成分，影响着恶性肿瘤细胞的浸润性移动[5]，参与恶性肿瘤的浸润扩散过程。鼻咽癌的组织学生长方式是反应鼻咽癌生物学行为特征的客观指标。本研究结果表明：鼻咽癌可能具有合成LN的能力，但其能力的强弱及是否能形成基膜样结构则与鼻咽癌的组织学密切相关。呈团块状巢状生长的癌细胞，多具有合成LN的能力，呈连续线状结构，并出现断裂和缺损。在条索状及弥散性生长的鼻咽癌组织中，这种缺损更加明显，甚至见不到线型。说明合成LN能力低，一般丧失形成基膜的能力。笔者认为，LN的减少或缺失可作为癌细胞浸润扩散能力强的生物学标志。
在鼻咽癌中，病人往往发生早期淋巴结转移，肿瘤细胞的转移是一个复杂的多步骤的过程，其起始阶段涉及到三个方面。首先是癌细胞与基膜粘附，进而降解基膜，穿透基质进入血管和淋巴管。目前的研究发现肿瘤细胞粘附基膜主要是层粘蛋白的介导，并且发现肿瘤细胞与层粘蛋白接触，Ⅳ型胶原酶的产生增多[6，7]，可造成基膜的崩解。本研究发现，层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达强度在有无淋巴结转移的两组间，差异具有显著性意义(P<0.05)，无转移组的线状分布明显高于有转移组，这说明具有较高转移能力的鼻咽癌细胞对层粘蛋白和Ⅳ型胶原具有较高的亲和力，易破坏基膜，反之，通过其表达亦可评估鼻咽癌的转移能力。
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总之，鼻咽癌中基膜表达与肿瘤生物学特性有关，层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达可作为评估鼻咽癌癌细胞分化、癌实质类型及淋巴结转移的有价值的指标。
(本研究承蒙暨南大学医学院病理教研室谢作煊教授的热心帮助、指导，特此志谢)
本研究为广东省卫生厅科研资助项目[批文号：(1996)19]
参考文献
1 Barsky SH, Siegal GP, Jannotta F, et al. Loss of basement membrane by invasion tumors but not by their benign counterparts. Lab Invest, 1983, 49:140
2 Havenith MG, Arends JW, Simon R, et al. Type Ⅳ collagen immunoreactivity in colorectal cancer: prognostic value of basement membrane deposition. Cancer, 1988, 62:2207
, 百拇医药
3 Liotta LA. Tumor invasion and metastases-role of the extracellular matrix: rhoads memorial award lecture. Cancer Res, 1986, 46:1
4 Albrenchesen R. Basement membranes in human cancer. Pathol Ann, 1986, 2: 251
5 Liotta LA. Tumor invasion and the extracellular matrix. Lab Invest, 1983, 49:636
6 Terranova VP, Liotta LA, Russo RG, et al. Role of laminin in the attachment and metastasis of murine tumor cells. Cancer Res, 1982, 42:2265
7 Taina T, Unnur P, Rao CN, et al. Laminin increase the release of type Ⅳ collagen from malignant cells. J Biol Chem, 1986, 261:1883, 百拇医药(杨德兴1 江九祥2 彭身华4 苏淡宜3 谢寿诚4)
单位：杨德兴 梅州市卫生学校 1病理教研室，江九祥 外科教研室，苏淡宜 中心实验室(514031)；彭身华 谢寿诚 梅州市人民医院病理科
关键词：鼻咽肿瘤；层粘蛋白；Ⅳ型胶原；基膜；肿瘤转移
广东医学990705 【摘要】 目的 探讨鼻咽癌中基膜表达与肿瘤生物学特性的关系。方法 采用免疫组化ABC法检测60例鼻咽癌标本中层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达。结果 未分化癌的基膜表达明显不同于大圆形细胞癌(P<0.05)，均呈断续、缺失的改变，而大圆形细胞癌、低分化鳞癌则部分显示连续线状基膜。条索状、弥散性排列的癌实质基膜表达明显不同于巢状排列者(P<0.05)。此外，层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达在有无淋巴结转移两组间，差异也具有显著性意义(P<0.05)。结论 层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达可作为评估鼻咽癌细胞的分化、癌实质类型及淋巴结转移的有价值指标。
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Relationship between the expression of basement membrane with tumor biologic characterization in carcinoma of nasopharynx
Yang Dexing, Jiang Jiuxiang, Peng Shenhua, et al.
Dept of Pathol, Meizhou Medical School, Meizhou 514031
【Abstract】 Objective To study relationship between expression of basement membrane (BM) in carcinoma of nasopharynx.Methods The expressions of laminin(LN) and collagen Ⅳ(CO Ⅳ) in 60 cases of nasopharyngeal carcinoma were detected with ABC method.Results The expressions of LN and CO Ⅳ were significantly different between undifferentiated carcinoma and large round cell carcinoma(P<0.05), as all of them had BM discontinuous and disappearing, but a part of large round cell carcinoma and poorly differentiated squamous carinoma showed continuous linear. The expressions of LN and CO Ⅳ were significantly different between carcinomatous parenchyma with tumor cells arranged in cords, diffusely and those in carcinoma nests(P<0.05). The expressions of LN and CO Ⅳ were also significantly different the two groups of between carcinoma with lymph node positivity and negativity one(P<0.05).Conclusion The expressions of LN and CO Ⅳ in nasopharyngeal carcinoma cell is a valuable parameter on evaluation cell differentiation, types of carcinomatous parenchyma and metastasis.
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【Key words】 Nasopharynx neoplasms Laminin Collagen Ⅳ Basement membrane Neoplasm metastasis
基膜是分布广泛的细胞外基质成分，含有层粘蛋白、纤维蛋白等多种成分，构成了机体细胞与组织间的屏障。细胞发生恶变时，由于基膜在结构、分布和数量上都发生变化[1]，有利于肿瘤的浸润和转移。本文采用层粘蛋白和Ⅳ型胶原抗体检测鼻咽癌中基膜的表达，探讨基膜与癌细胞分化、癌实质类型和淋巴结转移的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 组织取材于梅州市人民医院病理科1996年1～6月间鼻咽癌活检病理蜡块标本共60例。其中低分化鳞癌37例，大圆形细胞癌13例，未分化癌10例，男43例，女17例，年龄20～65岁，平均44.6岁。
, http://www.100md.com 1.2 方法 将鼻咽癌标本作连续切片，片厚约5 μm，共切3张，1张作HE染色，2张行免疫组织化学染色。免疫组织化学染色(ABC法)步骤是：石蜡切片以二甲苯常规脱蜡，与阴性对照组织一起，乙醇脱水，置冰箱过夜；0.2%胃蛋白酶和0.1 mol HCL消化30 min；磷酸缓冲液(PBS， pH 7.4)漂洗5 min×3次；0.3% H2O2甲醛阻断内源性过氧化物酶，室温30 min；PBS漂洗5 min×3次；正常血清封闭非特异性位点，37℃，30 min；分别加抗LN抗体(1∶200)， CO Ⅳ抗体(1∶400)，于湿盒中，4℃冰箱过夜(阴性对照用PBS代替1抗)；置室温2 h后PBS漂洗5 min×3次；加生物素化羊抗兔或鼠IgG(37℃)1 h；PBS漂洗 5 min×3次；加ABC试剂， 37℃，1 h； PBS漂洗 5 min×3次；DAB显色，室温5～10 min；流水冲洗10 min，乙醇脱水，二甲苯透明；中性树胶封片。
1.3 统计方法 采用χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
层粘蛋白和Ⅳ型胶原染色基本一致，视为基膜染色。鼻咽癌组织中未受肿瘤浸润的上皮基膜、间质血管、淋巴管的基膜均显示连续的线状结构，呈深棕色。团块状癌巢周围基膜部分显示连续线状，部分中断，而弥散性分布的癌细胞周围基膜大多数呈断续，甚至缺失的改变。
2.1 鼻咽癌不同组织学类型的基膜表达 鼻咽癌不同组织学类型中，未分化癌与大圆形细胞癌比较其基膜(LN，CO Ⅳ)表达显示差异有显著性(P<0.05)。见表1。
表1 鼻咽癌不同组织学类型的基膜表达 (例) 组织学类型
连续线状
非连续线状
合计
低分化鳞癌
, http://www.100md.com
5
32
37
大圆形细胞癌
5
8
13
未分化癌
0
10
10
2.2 鼻咽癌实质类型的基膜表达 根据鼻咽癌实质结构形式不同分以下三种类型：①巢状：癌细胞聚集成巢，癌巢大小不等，与间质分界较明显，实质与间质比例不一。②条索状：癌细胞排列成细条索状，间质多为较致密的纤维组织。③弥散性：癌细胞不构成巢状或条索状，而是弥散分布。
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鼻咽癌中癌实质呈条索状、弥散性排列分别与巢状比较其基膜(LN，CO Ⅳ)表达显示差异有显著性(P<0.05)，见表2。表2 鼻咽癌实质类型的基膜表达 (例) 组织学类型
连续线状
非连续线状
合计
巢状
8
15
23
条索状
1
19
, 百拇医药 20
网状
1
16
17
2.3 鼻咽癌有无淋巴结转移两组间的基膜表达 基膜(LN，CO Ⅳ)在鼻咽癌中有无淋巴结转移两组间表达差异有显著性(P<0.05)。见表3。表3 鼻咽癌有无淋巴结转移两组间的基膜表达 (例)
连续线状
非连续线状
合计
淋巴结转移
5
, 百拇医药
41
46
无淋巴结转移
5
9
14
3 讨论
本文应用免疫组织化学技术检测了LN、CO Ⅳ在鼻咽癌中的表达，观察到癌巢周围的基膜显示间断、分布不均，表明正常基膜结构完整性的破坏，同时显示基膜的丧失程度与癌分化有关。文献报道[2]肿瘤细胞合成Ⅳ型胶原依赖于它们的分化状态，低分化肿瘤合成能力低，而它的分解活动强，同一起源肿瘤的转移率与Ⅳ型胶原的分解呈正相关。Ⅳ型胶原为基底膜胶原，它对细胞在体内移动起阻遏作用。肿瘤细胞发生浸润和转移的条件之一在于它可以破坏Ⅳ型胶原，并逃离其束缚[3]。本实验观察到Ⅳ型胶原常位于巢状癌细胞周围，不规则索状或散在于间质的癌细胞周围常缺乏Ⅳ型胶原表达，巢状癌细胞表达Ⅳ型胶原阳性率显著高于条索型及弥散性癌细胞，表明鼻咽癌细胞表达Ⅳ型胶原与其生长方式有关。巢状癌细胞生长慢，浸润转移晚，条索型及弥散性癌细胞生长快，浸润转移早。
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国外研究发现，恶性肿瘤细胞不但可以破坏宿主的基膜，还可以不断合成自身的基膜成分[4]。LN是基膜的主要组成成分，影响着恶性肿瘤细胞的浸润性移动[5]，参与恶性肿瘤的浸润扩散过程。鼻咽癌的组织学生长方式是反应鼻咽癌生物学行为特征的客观指标。本研究结果表明：鼻咽癌可能具有合成LN的能力，但其能力的强弱及是否能形成基膜样结构则与鼻咽癌的组织学密切相关。呈团块状巢状生长的癌细胞，多具有合成LN的能力，呈连续线状结构，并出现断裂和缺损。在条索状及弥散性生长的鼻咽癌组织中，这种缺损更加明显，甚至见不到线型。说明合成LN能力低，一般丧失形成基膜的能力。笔者认为，LN的减少或缺失可作为癌细胞浸润扩散能力强的生物学标志。
在鼻咽癌中，病人往往发生早期淋巴结转移，肿瘤细胞的转移是一个复杂的多步骤的过程，其起始阶段涉及到三个方面。首先是癌细胞与基膜粘附，进而降解基膜，穿透基质进入血管和淋巴管。目前的研究发现肿瘤细胞粘附基膜主要是层粘蛋白的介导，并且发现肿瘤细胞与层粘蛋白接触，Ⅳ型胶原酶的产生增多[6，7]，可造成基膜的崩解。本研究发现，层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达强度在有无淋巴结转移的两组间，差异具有显著性意义(P<0.05)，无转移组的线状分布明显高于有转移组，这说明具有较高转移能力的鼻咽癌细胞对层粘蛋白和Ⅳ型胶原具有较高的亲和力，易破坏基膜，反之，通过其表达亦可评估鼻咽癌的转移能力。
, http://www.100md.com
总之，鼻咽癌中基膜表达与肿瘤生物学特性有关，层粘蛋白和Ⅳ型胶原的表达可作为评估鼻咽癌癌细胞分化、癌实质类型及淋巴结转移的有价值的指标。
(本研究承蒙暨南大学医学院病理教研室谢作煊教授的热心帮助、指导，特此志谢)
本研究为广东省卫生厅科研资助项目[批文号：(1996)19]
参考文献
1 Barsky SH, Siegal GP, Jannotta F, et al. Loss of basement membrane by invasion tumors but not by their benign counterparts. Lab Invest, 1983, 49:140
2 Havenith MG, Arends JW, Simon R, et al. Type Ⅳ collagen immunoreactivity in colorectal cancer: prognostic value of basement membrane deposition. Cancer, 1988, 62:2207
, 百拇医药
3 Liotta LA. Tumor invasion and metastases-role of the extracellular matrix: rhoads memorial award lecture. Cancer Res, 1986, 46:1
4 Albrenchesen R. Basement membranes in human cancer. Pathol Ann, 1986, 2: 251
5 Liotta LA. Tumor invasion and the extracellular matrix. Lab Invest, 1983, 49:636
6 Terranova VP, Liotta LA, Russo RG, et al. Role of laminin in the attachment and metastasis of murine tumor cells. Cancer Res, 1982, 42:2265
7 Taina T, Unnur P, Rao CN, et al. Laminin increase the release of type Ⅳ collagen from malignant cells. J Biol Chem, 1986, 261:1883, 百拇医药(杨德兴1 江九祥2 彭身华4 苏淡宜3 谢寿诚4)