复方胃康宁防治大鼠实验性胃癌作用的研究
作者：李庆明 余 谦 吴伟康
单位：中山医科大学中西医结合研究所(510089)
关键词：胃癌；Wistar，大鼠；中草药
实用医学杂志990863 摘 要 目的：了解自拟复方胃康宁(胃康宁)对大鼠实验性胃癌的防治作用。方法：以甲基硝基亚硝基胍(MNNG)饲喂并诱导大鼠产生实验性胃癌，借助肉眼、光镜、电镜观察胃康宁对大鼠胃癌的对抗效应。结果：全程服用胃康宁(10个月)组的抗癌效果明显，后半程(4个月)服用胃康宁组呈现出一定的抗癌效应。结论：胃康宁对大鼠实验性胃癌的发生有不同程度的对抗作用，其预防胃癌的效应值得重视。
胃癌属于上皮性恶性肿瘤，其发生、发展呈现复杂、多阶段的生物学行为过程[1～3]。中医学认为，胃癌的发生在于痰凝、气滞、血瘀，属“胃脘痛”的范畴。中药可以提高机体免疫功能、平衡阴阳、预防和修复化疗的毒副作用[4～5]。本研究以甲基硝基亚硝基胍(MNNG)饲喂并诱导大鼠发生实验性胃癌，借助光镜、电镜等手段，观察自拟复方胃康宁(胃康宁)对大鼠胃癌发生、发展过程的对抗效应。
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1 材料与方法
1.1 材料 (1)实验对象：雄性Wistar大鼠50只，2～3月龄，体重120～140 g，清洁级，中山医科大学实验动物中心提供(广东省实验动物监测所检证字98A018)；(2)模型制备：大鼠实验性胃癌造模采用MNNG限期给药饲饮法，予雄性健康Wistar大白鼠每日自由饮用浓度为100 μ g/ml的MNNG水溶液24周(6个月)，再予饮用自来水(4个月)，实验时间共计40周(10个月)；(3)药物组成：将胃康宁(由党参、半枝莲、五灵脂等组成，功效：健脾化痰、清热解毒、理气活血、消瘀散结)制成生药(g)：药液(ml)=1(g)∶1(ml)浓度的制剂，加防腐剂苯甲酸(0.1 g/100 ml)、4℃冷藏保存，供大鼠灌胃之用。
1.2 分组及给药措施 (1)对照组(20只)：MNNG限期给药饲饮法；(2)胃康宁1组(15只)：MNNG限期给药饲饮法加全程40周(6个月)每日灌用胃康宁生药10 g/kg，以了解胃康宁防治胃癌的效应；(3)胃康宁2组(15只)：MNNG限期给药饲饮法加后16周(4个月)每日灌用胃康宁生药10 g/kg，了解胃康宁治疗胃癌的效应；(4)正常对照组：第40周末全部杀死大鼠时，即时购雄性健康Wistar大白鼠2只，4月龄，体重200 g左右。
, 百拇医药
1.3 取材方法 饲养期第40周末处死全部大鼠并取材。先予灌注固定：经左心室穿刺至主动脉，用生理盐水100 ml快冲血管床，用含4%多聚甲醛的0.1 mmol/L磷酸缓冲液(pH 7.4，4℃)经升主动脉灌注，时间1小时。剖腹取胃，沿胃大弯切开，生理盐水洗净，剪除前胃，将腺胃(胃窦部处)展平，暴露粘膜面，进行观察，在腺胃粘膜面仔细寻找，在有颜色异常和粟粒状结节处，则连同周围组织行条形切割，大小约15 mm×2 mm ，可取多条组织，分置两处，置于2.5%戊二醛(PBS液配制)4℃固定1～2小时，送电镜室行透射电镜检查；置于4%多聚甲醛固定12小时，再入20%蔗糖PBS液24小时，取出，石蜡包埋，切片后行病理检查(HE染色)。
2 结果
2.1 大鼠腺胃肉眼所见 对照组粘膜面的颜色异常和粟粒状结节较为多见；胃康宁2组粘膜面颜色稍异常和少量粟粒状结节；胃康宁1组粘膜面未见有粟粒状结节，颜色异常亦少见。
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2.2 光镜所见(HE染色) 正常组大鼠胃粘膜上皮细胞连接完整，腺管排列整齐；上皮细胞圆形，大小正常；细胞核圆形，染色正常；核浆比正常。胃康宁1组大鼠胃粘膜上皮细胞连接比较完整，腺管排列整齐；上皮细胞圆形，大小正常；细胞核圆形，染色正常；核浆比正常。胃康宁2组大鼠胃粘膜上皮细胞连接比较完整，腺管排列比较整齐；上皮细胞圆形，大小接近正常；细胞核圆形，染色基本正常；核浆比基本正常。对照组大鼠胃粘膜上皮细胞连接缺如，腺管排列紊乱；上皮细胞大小形状不一；细胞核异形性，胞核浓染；核浆比增大。
2.3 透射电镜所见 正常大鼠胃粘膜组织中主细胞、壁细胞及内分泌细胞清晰可见，大小、形态正常，细胞结构正常。胃康宁1组大鼠胃粘膜组织中，细胞数量少，腺腔完整，细胞分化良好，偶见未分化细胞，呈现细胞凋亡改变。胃康宁2组大鼠胃粘膜组织中细胞量较多，核异形性。对照组大鼠胃粘膜组织中细胞数明显增多，细胞小，分化程度低，核浓染，核异形性，腺腔不明显，细胞排列不规整，形态各异。
3 讨论
, 百拇医药
3.1 恶性肿瘤是机体局部组织细胞在各种内部和外界的致癌因子长期作用下，逐渐发生持续性异常增生所形成的新的生长物或新生物，它是由正常细胞获得了新的生物学遗传特性转化而来，具有自主性、去分化性和可移植性。恶性肿瘤常导致局部正常组织结构破坏，组织恶性表型，包括细胞异型、细胞核增大、核分裂相、核浆比例增大等。本研究采用MNNG饲喂Wistar雄性大鼠诱导生成腺胃腺癌，经病理切片检查，符合癌变特征[6]。光镜下，胃粘膜上皮细胞及腺上皮细胞排列紊乱，大小形状不一，腺腔结构破坏，胞核浓染，胞核异形性，胞核增大，核浆比例增大，向肌层浸润等恶变特征；电镜下，大鼠胃粘膜组织中细胞数明显增多，细胞小，分化程度低，核浓染，核异形性，腺腔不明显，细胞排列不规整，形态各异。但在给胃康宁后，情况有所不同。在全程服用胃康宁10个月组的大鼠，光镜下，胃粘膜组织结构接近正常，胃粘膜的上皮细胞排列整齐、连接比较完整，腺管排列整齐，上皮细胞圆形，大小正常，细胞核圆形，染色正常，核浆比例正常，细胞分化程度良好；电镜下，胃粘膜组织中细胞数量少，腺腔完整，细胞分化良好，偶见未分化细胞，却呈现细胞凋亡改变。后半程4个月服用胃康宁组的大鼠，光镜下，大鼠胃粘膜上皮细胞连接比较完整，腺管排列较整齐，上皮细胞圆形，大小接近正常，细胞核圆形，染色基本正常，核浆比例基本正常；电镜下，大鼠胃粘膜组织中细胞量较多，核有异形性。表明胃康宁对大鼠实验诱导性胃癌的发生有不同程度的对抗作用。全程服用胃康宁组的结果表明胃康宁具有良好的抑制大鼠胃粘膜细胞恶性表型的作用，后半程服用胃康宁组的结果表明胃康宁具有一定的逆转胃粘膜细胞恶性表型作用，显示胃康宁对大鼠实验性胃癌对抗效应的优势表现在防癌与治癌相结合上。
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3.2 尽管目前中医药对胃癌的治疗普遍主张采用辨证论治，如通常把胃癌分为：肝胃不和、瘀毒内结、痰湿凝结、脾胃虚寒、气血两亏和胃热伤阴六型，再以相应的方药进行治疗，但气滞、痰积、瘀毒及脾虚等病理因素在胃癌发生、发展过程中是贯穿始终的，只是不同阶段侧重不同、表现有异而已。如此看来，在胃癌发生、发展过程中似有一共同机制，本组对具有健脾化痰、清热解毒、理气活血、消瘀散结功效的胃康宁进行胃癌的防治研究，希冀能切应此机制，在胃癌的中医药防治途径中寻找到公共通路。
4 参考文献
1 Tehara E. Molecular mechaniam of stomach carcinogenesis. J Cancer Res Clin Oncol,1993,119:265.
2 Khanson KP,kalinovski VP,Novikov LB,et al. Biochemical and molecular biological aspects of stomach cancer develoment in human and animal. Vopr Med Khim,1991,37:84.
3 吕有勇. 多基因变异与胃粘膜细胞癌变的关系. 中华消化杂志，1996，(1)：9～130.
4 陈 强. 胃癌化疗的现状和进展. 中华消化杂志，1994，(4)：187～188.
5 林盛毅. 晚期胃癌常用化疗方案及其疗效. 肿瘤，1994，(1)：59.
6 邓大君，谷连坤，朱少侠，等. 在化学致大鼠胃癌过程中多种癌基因表达的变化. 中华消化杂志，1996，16：46～49., 百拇医药
单位：中山医科大学中西医结合研究所(510089)
关键词：胃癌；Wistar，大鼠；中草药
实用医学杂志990863 摘 要 目的：了解自拟复方胃康宁(胃康宁)对大鼠实验性胃癌的防治作用。方法：以甲基硝基亚硝基胍(MNNG)饲喂并诱导大鼠产生实验性胃癌，借助肉眼、光镜、电镜观察胃康宁对大鼠胃癌的对抗效应。结果：全程服用胃康宁(10个月)组的抗癌效果明显，后半程(4个月)服用胃康宁组呈现出一定的抗癌效应。结论：胃康宁对大鼠实验性胃癌的发生有不同程度的对抗作用，其预防胃癌的效应值得重视。
胃癌属于上皮性恶性肿瘤，其发生、发展呈现复杂、多阶段的生物学行为过程[1～3]。中医学认为，胃癌的发生在于痰凝、气滞、血瘀，属“胃脘痛”的范畴。中药可以提高机体免疫功能、平衡阴阳、预防和修复化疗的毒副作用[4～5]。本研究以甲基硝基亚硝基胍(MNNG)饲喂并诱导大鼠发生实验性胃癌，借助光镜、电镜等手段，观察自拟复方胃康宁(胃康宁)对大鼠胃癌发生、发展过程的对抗效应。
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1 材料与方法
1.1 材料 (1)实验对象：雄性Wistar大鼠50只，2～3月龄，体重120～140 g，清洁级，中山医科大学实验动物中心提供(广东省实验动物监测所检证字98A018)；(2)模型制备：大鼠实验性胃癌造模采用MNNG限期给药饲饮法，予雄性健康Wistar大白鼠每日自由饮用浓度为100 μ g/ml的MNNG水溶液24周(6个月)，再予饮用自来水(4个月)，实验时间共计40周(10个月)；(3)药物组成：将胃康宁(由党参、半枝莲、五灵脂等组成，功效：健脾化痰、清热解毒、理气活血、消瘀散结)制成生药(g)：药液(ml)=1(g)∶1(ml)浓度的制剂，加防腐剂苯甲酸(0.1 g/100 ml)、4℃冷藏保存，供大鼠灌胃之用。
1.2 分组及给药措施 (1)对照组(20只)：MNNG限期给药饲饮法；(2)胃康宁1组(15只)：MNNG限期给药饲饮法加全程40周(6个月)每日灌用胃康宁生药10 g/kg，以了解胃康宁防治胃癌的效应；(3)胃康宁2组(15只)：MNNG限期给药饲饮法加后16周(4个月)每日灌用胃康宁生药10 g/kg，了解胃康宁治疗胃癌的效应；(4)正常对照组：第40周末全部杀死大鼠时，即时购雄性健康Wistar大白鼠2只，4月龄，体重200 g左右。
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1.3 取材方法 饲养期第40周末处死全部大鼠并取材。先予灌注固定：经左心室穿刺至主动脉，用生理盐水100 ml快冲血管床，用含4%多聚甲醛的0.1 mmol/L磷酸缓冲液(pH 7.4，4℃)经升主动脉灌注，时间1小时。剖腹取胃，沿胃大弯切开，生理盐水洗净，剪除前胃，将腺胃(胃窦部处)展平，暴露粘膜面，进行观察，在腺胃粘膜面仔细寻找，在有颜色异常和粟粒状结节处，则连同周围组织行条形切割，大小约15 mm×2 mm ，可取多条组织，分置两处，置于2.5%戊二醛(PBS液配制)4℃固定1～2小时，送电镜室行透射电镜检查；置于4%多聚甲醛固定12小时，再入20%蔗糖PBS液24小时，取出，石蜡包埋，切片后行病理检查(HE染色)。
2 结果
2.1 大鼠腺胃肉眼所见 对照组粘膜面的颜色异常和粟粒状结节较为多见；胃康宁2组粘膜面颜色稍异常和少量粟粒状结节；胃康宁1组粘膜面未见有粟粒状结节，颜色异常亦少见。
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2.2 光镜所见(HE染色) 正常组大鼠胃粘膜上皮细胞连接完整，腺管排列整齐；上皮细胞圆形，大小正常；细胞核圆形，染色正常；核浆比正常。胃康宁1组大鼠胃粘膜上皮细胞连接比较完整，腺管排列整齐；上皮细胞圆形，大小正常；细胞核圆形，染色正常；核浆比正常。胃康宁2组大鼠胃粘膜上皮细胞连接比较完整，腺管排列比较整齐；上皮细胞圆形，大小接近正常；细胞核圆形，染色基本正常；核浆比基本正常。对照组大鼠胃粘膜上皮细胞连接缺如，腺管排列紊乱；上皮细胞大小形状不一；细胞核异形性，胞核浓染；核浆比增大。
2.3 透射电镜所见 正常大鼠胃粘膜组织中主细胞、壁细胞及内分泌细胞清晰可见，大小、形态正常，细胞结构正常。胃康宁1组大鼠胃粘膜组织中，细胞数量少，腺腔完整，细胞分化良好，偶见未分化细胞，呈现细胞凋亡改变。胃康宁2组大鼠胃粘膜组织中细胞量较多，核异形性。对照组大鼠胃粘膜组织中细胞数明显增多，细胞小，分化程度低，核浓染，核异形性，腺腔不明显，细胞排列不规整，形态各异。
3 讨论
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3.1 恶性肿瘤是机体局部组织细胞在各种内部和外界的致癌因子长期作用下，逐渐发生持续性异常增生所形成的新的生长物或新生物，它是由正常细胞获得了新的生物学遗传特性转化而来，具有自主性、去分化性和可移植性。恶性肿瘤常导致局部正常组织结构破坏，组织恶性表型，包括细胞异型、细胞核增大、核分裂相、核浆比例增大等。本研究采用MNNG饲喂Wistar雄性大鼠诱导生成腺胃腺癌，经病理切片检查，符合癌变特征[6]。光镜下，胃粘膜上皮细胞及腺上皮细胞排列紊乱，大小形状不一，腺腔结构破坏，胞核浓染，胞核异形性，胞核增大，核浆比例增大，向肌层浸润等恶变特征；电镜下，大鼠胃粘膜组织中细胞数明显增多，细胞小，分化程度低，核浓染，核异形性，腺腔不明显，细胞排列不规整，形态各异。但在给胃康宁后，情况有所不同。在全程服用胃康宁10个月组的大鼠，光镜下，胃粘膜组织结构接近正常，胃粘膜的上皮细胞排列整齐、连接比较完整，腺管排列整齐，上皮细胞圆形，大小正常，细胞核圆形，染色正常，核浆比例正常，细胞分化程度良好；电镜下，胃粘膜组织中细胞数量少，腺腔完整，细胞分化良好，偶见未分化细胞，却呈现细胞凋亡改变。后半程4个月服用胃康宁组的大鼠，光镜下，大鼠胃粘膜上皮细胞连接比较完整，腺管排列较整齐，上皮细胞圆形，大小接近正常，细胞核圆形，染色基本正常，核浆比例基本正常；电镜下，大鼠胃粘膜组织中细胞量较多，核有异形性。表明胃康宁对大鼠实验诱导性胃癌的发生有不同程度的对抗作用。全程服用胃康宁组的结果表明胃康宁具有良好的抑制大鼠胃粘膜细胞恶性表型的作用，后半程服用胃康宁组的结果表明胃康宁具有一定的逆转胃粘膜细胞恶性表型作用，显示胃康宁对大鼠实验性胃癌对抗效应的优势表现在防癌与治癌相结合上。
, http://www.100md.com
3.2 尽管目前中医药对胃癌的治疗普遍主张采用辨证论治，如通常把胃癌分为：肝胃不和、瘀毒内结、痰湿凝结、脾胃虚寒、气血两亏和胃热伤阴六型，再以相应的方药进行治疗，但气滞、痰积、瘀毒及脾虚等病理因素在胃癌发生、发展过程中是贯穿始终的，只是不同阶段侧重不同、表现有异而已。如此看来，在胃癌发生、发展过程中似有一共同机制，本组对具有健脾化痰、清热解毒、理气活血、消瘀散结功效的胃康宁进行胃癌的防治研究，希冀能切应此机制，在胃癌的中医药防治途径中寻找到公共通路。
4 参考文献
1 Tehara E. Molecular mechaniam of stomach carcinogenesis. J Cancer Res Clin Oncol,1993,119:265.
2 Khanson KP,kalinovski VP,Novikov LB,et al. Biochemical and molecular biological aspects of stomach cancer develoment in human and animal. Vopr Med Khim,1991,37:84.
3 吕有勇. 多基因变异与胃粘膜细胞癌变的关系. 中华消化杂志，1996，(1)：9～130.
4 陈 强. 胃癌化疗的现状和进展. 中华消化杂志，1994，(4)：187～188.
5 林盛毅. 晚期胃癌常用化疗方案及其疗效. 肿瘤，1994，(1)：59.
6 邓大君，谷连坤，朱少侠，等. 在化学致大鼠胃癌过程中多种癌基因表达的变化. 中华消化杂志，1996，16：46～49., 百拇医药