丙、丁、庚型肝炎同原发性肝癌的相关因素分析
作者：孙 毅 孙晓欧 徐 友
单位：孙 毅 徐 友 解放军第一○○医院(215007)；孙晓欧 苏州医学院附属第一医院
关键词：肝炎，丙型；感染；肝炎，病毒性，人；肝肿瘤
实用医学杂志990823 摘 要 目的：探讨RNA病毒引起的丙型、丁型、庚型肝炎同原发性肝癌(PLC)发生的关系。方法：采用免疫病理观察比较丙型肝炎病毒NS5抗原(HCV-NS5)，丁型肝炎病毒抗原(HDVAg)，庚型肝炎病毒NS5抗原(HGV-NS5)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达特点。结果：在72例HCC中HCV-NS5、HDVAg、HGV-NS5检出率分别为26.39%、19.44%、6.94%，总检出率为29.17%。三种抗原信号在癌组织及癌旁组织均有表达，但表达的主要部位有差异。三种抗原表达同HCC的分化程度无明显相关性，同HCC患者的预后有一定的相关性。结论：HCV和HDV同PLC有密切关系，没有充分证据表明HGV是PLC发生的高危因素。
, 百拇医药
乙型肝炎同原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)的发生有密切关系已被人们所证实。本文从免疫病理表达来探讨我国PLC的发生同丙型、丁型，庚型肝炎病毒(HCV、HDV、HGV)的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组72例PLC病人为1989～1997年外科手术切除标本。男63例，女9例，平均年龄43.4±9.5(22～61)岁。所有标本均经病理组织学证实为肝细胞肝癌(HCC)，并按Edmondson-Steiner标准判断肝癌组织的分化程度[1]。
1.2 肝癌组织及癌旁组织HCV、HDV、HGV抗原的检测。
1.2.1 HCV-NS5抗原检测采用双重PAP法，DAB显色。鼠抗-HCV-NS5单克隆抗体由北京医科大学肝病研究所馈赠。
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1.2.2 HDV抗原检测采用直接酶标法，DAB显色。酶标特异血清人抗Delta系意大利Rizze-tto实验室制备，由同济医科大学临床免疫研究室馈赠。
1.2.3 HGV-NS5抗原检测采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶(SP)法，AEC显色。鼠抗-HGV-NS5基因重组单克隆抗体由军事医学科学院馈赠。
1.2.4 对照试验以PBS液分别代替第一抗体和第二抗体。
2 结果
2.1 在72例肝癌标本中，HCV-NS5、HDVAg、HGV-NS5检出率分别为19例(26.39%)、14例(19.44%)、5例(6.94%)，其中HCV-NS5、HDVAg、HGV-NS5三者均阳性者共2例；HCV-NS5/HDVAg、HCV-NS5/HGV-NS5、HDVAg/HGV-NS5两项阳性分别为10例、2例、1例；HCV-NS5和HDVAg单一阳性者分别为5例和1例；没有发现单一HGV-NS5阳性病人。本组病人中共检出抗原阳性者21例(29.17%)。对于抗原阳性标本随机抽取各1例，省略第一抗体和第二抗体以PBS液代替，未发现阳性信号出现。
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2.2 三种病毒抗原在癌及癌旁组织中的分布 抗原阳性信号位胞浆内呈均质颗粒状，阳性细胞散在或簇状分布于阴性细胞间，可以出现在坏死灶内也可以出现在坏死灶旁。三种病毒抗原在癌组织及癌旁组织均有表达，但主要在癌旁组织。HCV-NS5及HDVAg在癌组织中表达比HGV-NS5更为明显，HGV-NS5主要在癌旁组织内表达，见表1。
表1 三种病毒抗原在HCC组织中表达的比较(例，%)
HCV-NS5
HDVAg
HGV-NS5
癌组织
3(15.79)△
, 百拇医药
3(21.43)△
0*
癌旁组织
4(21.05)**
1(71.4)△
4(80.00)*
癌及癌旁组织
12(63.16)**
10(71.43)**
1(20.00)*
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合计
19(100.00)
14(100.00)
5(100.00)
*与** P<0.05；*与△ P<0.01；**与△ P<0.05
2.3 三种病毒抗原表达同HCC组织分化程度的关系 表2显示三种抗原表达在单一感染、混合感染和全部阴性的HCC中同癌组织的分化程度无明显的相关性。
表2 三种病毒抗原表达同HCC分化程度的关系(例，%)
分化程度
单一感染
混合感染
, 百拇医药
抗原表达(一)
Ⅰ
1(16.67)
1(6.67)
4(7.87)
Ⅱ
2(33.33)
6(40.00)
20(39.22)
Ⅲ
2(33.33)
6(40.00)
, http://www.100md.com
22(43.10)
Ⅳ
1(16.67)
2(13.33)
5(9.81)
2.4 三种病毒抗原表达同HCC患者预后的关系 我们对本组72例HCC患者进行了追踪随访，截止1998年6月已死亡61例，存活11例。见表3。表3显示病毒抗原阳性的HCC共4例(36.36%)，全部阴性者共7例(63.64%)。说明三种病毒的感染同HCC患者的预后有一定的相关性，但各种抗原检出率之间无明显差异，可能同观察病例较少有关。
表3 三种病毒抗原表达同11例HCC存活患者预后的关系(例，%)
HCV-NS5
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HDVAg
HGV-NS5
HCV-NS5
HDVAg
HCV-NS5
HGV-NS5
HDVAg
HGV-NS5
全部阴性
1(9.09)
1(9.09)
, 百拇医药
0
1(9.09)
0
1(9.09)
7(63.64)
3 讨论
PLC是一种较为常见、预后较差的恶性肿瘤。全世界每年有26万人罹患此病，其中42.5%发生在中国，这可能与我国是病毒性肝炎高发区有关。大量的临床和实验研究表明PLC的发生同肝炎病毒的种类和发生地区有关。国内报道PLC患者肝组织中HCV抗原检出率为40%，HGV抗原检出率为25.7%[2]。PLC的发生也具有地区的差异，Abe等采用RT-PCR方法对日本等国家的227例HCC石蜡包埋组织中的HGV抗原检测，结果全部为阴性[3]，而Muller等报告在美国HCC患者中HGV的检出率为6.7%～20%不等[4]。
, 百拇医药
本研究表明三种病毒抗原虽然都可以在癌组织及癌旁组织中表达，但仍有较明显的差异。在癌组织中HDV抗原表达较强，HGV抗原表达较弱。在癌旁组织中HGV抗原表达较强，HDV抗原表达较弱。HCV抗原则在癌组织及癌旁组织中表达基本相当。以上现象说明三种病毒在细胞转化过程中的生物行为不一致。
本组病例中三种病毒的单一感染为28.57%，混合感染为71.43%，两种感染方式同HCC的分化程度没有明显对应关系，而且同三种病毒全部阴性的HCC比较无明显差异。说明三种病毒不是HCC分化程度的相关因素。
本组对72例HCC患者追踪随访，在存活的11例患者中三种病毒的单一感染和混合感染的检出率没有明显差异，但与病毒全部阴性的存活者相比较，预后似乎有一定的相关性。
HCV、HDV、HGV均为RNA病毒，由它们所引起的病毒性肝炎在病原学、流行病学、传播途径、易感人群、临床表现、疾病转归、诊断方法、防治措施等方面有许多相似之处，但由于它们的基因组成不同，三种病毒还有许多不同的地方。笔者曾报道三种病毒的免疫病理和组织病理的不同特点及临床意义[5]。HCV感染的转慢率较高，同HCC的发生关系密切。HDV是由RNA产生的抗原借助乙型肝炎表面抗原(HBsAg)做外壳组成的病毒，HBV被清除，HDV也随之清除。HGV是否能致病存在争议，Nakatsuji等[6]报道HGV和HCV混合感染较单一HCV感染时的HCC发生率高，但Goeser等[7]比较了单一HCV感染组和合并HGV感染组的患者，在是否发生肝硬变、肝癌等没有差异。本组72例HCC患者中检出HGV抗原阳性5例(6.94%)，但都是同HCV和/或HDV混合感染，未发现单一的HGV感染。笔者曾报道了单一HGV感染的患者临床症状较轻，多为亚临床起病，肝组织损伤较轻[5]。所以我们认为HGV只不过是一个过路者(Tourist)，不会造成难以逆转的肝损伤。目前还没有充分证据表明HGV是PLC性的高危因素。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Edmondson HA,Steiner PE. Primary carcinoma of the liver,a study of 100 cases among 48 900 necropsies. Cancer,1954,7:462.
2 崔晓红，戚中田，潘 卫，等. 原发性肝癌患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒基因的PCR检测. 临床肝脏病杂志，1998，14(4)：217.
3 Abe K,Edomoto Y,Kurata T,et al. Geographic study on hepatitis virus type B,C and G,related HCC using paraffin-embedded tissues. Hepatol,1996,24(4 pt2):151A.
, 百拇医药 4 Muller CH,Pfeffel F,Peck-Radosavljivic M,et al. Hepatitis G virus infection in patients with hepatocellular cacinoma. Hepatol,1996,24(4 pt2):417A.
5 孙 毅，徐友珍，郝连杰，等. RNA病毒所致肝炎的免疫和组织病理学特点及临床意义. 肝脏，1999，1：17.
6 Makatsuji Y,Shih JWK,Kobayashi M,et al. Hepatitis G virus infection in Japanese patients infected with hepatitis C virus. Hepatol,1996,24(4 pt2):227A.
7 Goeser T,Seipp S,Wahl R,et al. Clinical presentation of GBV-C virus infection in drug abusers with chronic hepatitis C. J Hepatol,1997,26:498., http://www.100md.com
单位：孙 毅 徐 友 解放军第一○○医院(215007)；孙晓欧 苏州医学院附属第一医院
关键词：肝炎，丙型；感染；肝炎，病毒性，人；肝肿瘤
实用医学杂志990823 摘 要 目的：探讨RNA病毒引起的丙型、丁型、庚型肝炎同原发性肝癌(PLC)发生的关系。方法：采用免疫病理观察比较丙型肝炎病毒NS5抗原(HCV-NS5)，丁型肝炎病毒抗原(HDVAg)，庚型肝炎病毒NS5抗原(HGV-NS5)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达特点。结果：在72例HCC中HCV-NS5、HDVAg、HGV-NS5检出率分别为26.39%、19.44%、6.94%，总检出率为29.17%。三种抗原信号在癌组织及癌旁组织均有表达，但表达的主要部位有差异。三种抗原表达同HCC的分化程度无明显相关性，同HCC患者的预后有一定的相关性。结论：HCV和HDV同PLC有密切关系，没有充分证据表明HGV是PLC发生的高危因素。
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乙型肝炎同原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)的发生有密切关系已被人们所证实。本文从免疫病理表达来探讨我国PLC的发生同丙型、丁型，庚型肝炎病毒(HCV、HDV、HGV)的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组72例PLC病人为1989～1997年外科手术切除标本。男63例，女9例，平均年龄43.4±9.5(22～61)岁。所有标本均经病理组织学证实为肝细胞肝癌(HCC)，并按Edmondson-Steiner标准判断肝癌组织的分化程度[1]。
1.2 肝癌组织及癌旁组织HCV、HDV、HGV抗原的检测。
1.2.1 HCV-NS5抗原检测采用双重PAP法，DAB显色。鼠抗-HCV-NS5单克隆抗体由北京医科大学肝病研究所馈赠。
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1.2.2 HDV抗原检测采用直接酶标法，DAB显色。酶标特异血清人抗Delta系意大利Rizze-tto实验室制备，由同济医科大学临床免疫研究室馈赠。
1.2.3 HGV-NS5抗原检测采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶(SP)法，AEC显色。鼠抗-HGV-NS5基因重组单克隆抗体由军事医学科学院馈赠。
1.2.4 对照试验以PBS液分别代替第一抗体和第二抗体。
2 结果
2.1 在72例肝癌标本中，HCV-NS5、HDVAg、HGV-NS5检出率分别为19例(26.39%)、14例(19.44%)、5例(6.94%)，其中HCV-NS5、HDVAg、HGV-NS5三者均阳性者共2例；HCV-NS5/HDVAg、HCV-NS5/HGV-NS5、HDVAg/HGV-NS5两项阳性分别为10例、2例、1例；HCV-NS5和HDVAg单一阳性者分别为5例和1例；没有发现单一HGV-NS5阳性病人。本组病人中共检出抗原阳性者21例(29.17%)。对于抗原阳性标本随机抽取各1例，省略第一抗体和第二抗体以PBS液代替，未发现阳性信号出现。
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2.2 三种病毒抗原在癌及癌旁组织中的分布 抗原阳性信号位胞浆内呈均质颗粒状，阳性细胞散在或簇状分布于阴性细胞间，可以出现在坏死灶内也可以出现在坏死灶旁。三种病毒抗原在癌组织及癌旁组织均有表达，但主要在癌旁组织。HCV-NS5及HDVAg在癌组织中表达比HGV-NS5更为明显，HGV-NS5主要在癌旁组织内表达，见表1。
表1 三种病毒抗原在HCC组织中表达的比较(例，%)
HCV-NS5
HDVAg
HGV-NS5
癌组织
3(15.79)△
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3(21.43)△
0*
癌旁组织
4(21.05)**
1(71.4)△
4(80.00)*
癌及癌旁组织
12(63.16)**
10(71.43)**
1(20.00)*
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合计
19(100.00)
14(100.00)
5(100.00)
*与** P<0.05；*与△ P<0.01；**与△ P<0.05
2.3 三种病毒抗原表达同HCC组织分化程度的关系 表2显示三种抗原表达在单一感染、混合感染和全部阴性的HCC中同癌组织的分化程度无明显的相关性。
表2 三种病毒抗原表达同HCC分化程度的关系(例，%)
分化程度
单一感染
混合感染
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抗原表达(一)
Ⅰ
1(16.67)
1(6.67)
4(7.87)
Ⅱ
2(33.33)
6(40.00)
20(39.22)
Ⅲ
2(33.33)
6(40.00)
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22(43.10)
Ⅳ
1(16.67)
2(13.33)
5(9.81)
2.4 三种病毒抗原表达同HCC患者预后的关系 我们对本组72例HCC患者进行了追踪随访，截止1998年6月已死亡61例，存活11例。见表3。表3显示病毒抗原阳性的HCC共4例(36.36%)，全部阴性者共7例(63.64%)。说明三种病毒的感染同HCC患者的预后有一定的相关性，但各种抗原检出率之间无明显差异，可能同观察病例较少有关。
表3 三种病毒抗原表达同11例HCC存活患者预后的关系(例，%)
HCV-NS5
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HDVAg
HGV-NS5
HCV-NS5
HDVAg
HCV-NS5
HGV-NS5
HDVAg
HGV-NS5
全部阴性
1(9.09)
1(9.09)
, 百拇医药
0
1(9.09)
0
1(9.09)
7(63.64)
3 讨论
PLC是一种较为常见、预后较差的恶性肿瘤。全世界每年有26万人罹患此病，其中42.5%发生在中国，这可能与我国是病毒性肝炎高发区有关。大量的临床和实验研究表明PLC的发生同肝炎病毒的种类和发生地区有关。国内报道PLC患者肝组织中HCV抗原检出率为40%，HGV抗原检出率为25.7%[2]。PLC的发生也具有地区的差异，Abe等采用RT-PCR方法对日本等国家的227例HCC石蜡包埋组织中的HGV抗原检测，结果全部为阴性[3]，而Muller等报告在美国HCC患者中HGV的检出率为6.7%～20%不等[4]。
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本研究表明三种病毒抗原虽然都可以在癌组织及癌旁组织中表达，但仍有较明显的差异。在癌组织中HDV抗原表达较强，HGV抗原表达较弱。在癌旁组织中HGV抗原表达较强，HDV抗原表达较弱。HCV抗原则在癌组织及癌旁组织中表达基本相当。以上现象说明三种病毒在细胞转化过程中的生物行为不一致。
本组病例中三种病毒的单一感染为28.57%，混合感染为71.43%，两种感染方式同HCC的分化程度没有明显对应关系，而且同三种病毒全部阴性的HCC比较无明显差异。说明三种病毒不是HCC分化程度的相关因素。
本组对72例HCC患者追踪随访，在存活的11例患者中三种病毒的单一感染和混合感染的检出率没有明显差异，但与病毒全部阴性的存活者相比较，预后似乎有一定的相关性。
HCV、HDV、HGV均为RNA病毒，由它们所引起的病毒性肝炎在病原学、流行病学、传播途径、易感人群、临床表现、疾病转归、诊断方法、防治措施等方面有许多相似之处，但由于它们的基因组成不同，三种病毒还有许多不同的地方。笔者曾报道三种病毒的免疫病理和组织病理的不同特点及临床意义[5]。HCV感染的转慢率较高，同HCC的发生关系密切。HDV是由RNA产生的抗原借助乙型肝炎表面抗原(HBsAg)做外壳组成的病毒，HBV被清除，HDV也随之清除。HGV是否能致病存在争议，Nakatsuji等[6]报道HGV和HCV混合感染较单一HCV感染时的HCC发生率高，但Goeser等[7]比较了单一HCV感染组和合并HGV感染组的患者，在是否发生肝硬变、肝癌等没有差异。本组72例HCC患者中检出HGV抗原阳性5例(6.94%)，但都是同HCV和/或HDV混合感染，未发现单一的HGV感染。笔者曾报道了单一HGV感染的患者临床症状较轻，多为亚临床起病，肝组织损伤较轻[5]。所以我们认为HGV只不过是一个过路者(Tourist)，不会造成难以逆转的肝损伤。目前还没有充分证据表明HGV是PLC性的高危因素。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Edmondson HA,Steiner PE. Primary carcinoma of the liver,a study of 100 cases among 48 900 necropsies. Cancer,1954,7:462.
2 崔晓红，戚中田，潘 卫，等. 原发性肝癌患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒基因的PCR检测. 临床肝脏病杂志，1998，14(4)：217.
3 Abe K,Edomoto Y,Kurata T,et al. Geographic study on hepatitis virus type B,C and G,related HCC using paraffin-embedded tissues. Hepatol,1996,24(4 pt2):151A.
, 百拇医药 4 Muller CH,Pfeffel F,Peck-Radosavljivic M,et al. Hepatitis G virus infection in patients with hepatocellular cacinoma. Hepatol,1996,24(4 pt2):417A.
5 孙 毅，徐友珍，郝连杰，等. RNA病毒所致肝炎的免疫和组织病理学特点及临床意义. 肝脏，1999，1：17.
6 Makatsuji Y,Shih JWK,Kobayashi M,et al. Hepatitis G virus infection in Japanese patients infected with hepatitis C virus. Hepatol,1996,24(4 pt2):227A.
7 Goeser T,Seipp S,Wahl R,et al. Clinical presentation of GBV-C virus infection in drug abusers with chronic hepatitis C. J Hepatol,1997,26:498., http://www.100md.com