RP-HPLC法测定芦荟中芦荟苷的含量
作者：张永文* 陈玉武 李克明
单位：中日友好临床医学研究所 北京 100029
关键词：芦荟；芦荟苷；HPLC法；含量测定
中草药990808 摘 要 应用反相HPLC法测定芦荟苷(aloin)的含量。用SUPELCO LC-18(250 mm×4.6mm，5μm)层析柱，流动相：乙腈-0.01 mol/L三氟醋酸(22∶78)，流速：1mL/min，检测波长：359 nm，柱温：室温，用外标法测定。芦荟苷的平均回收率为98.37%，其检测线性范围为50～250 μg/mL，回归方程：Y=0.269+54.723 X，r=0.9999。本法灵敏、简便，重现性好。
Determination of Aloin in Barbados Aloe (Aloe barbadensis)
, 百拇医药
and Robust Aloe (Aloe ferox) by RP-HPLC
Zhang Yongwen, Chen Yuwu and Li keming
(China-Japan Friendship Institute of Clinical Medical Sciences, Beijing 100029)
Abstract A RP-HPLC method was developed for the determination of aloin in Aloe barbadensis Mill.. and A.ferox Mill. An ODS column was used with the mobile phase of acetonitrile-0.01 mol/L trifluoracetic acid (22∶78) at a flow rate of 1 mL/min. Samples were detected at 359 nm and at room temperature. External standard was used and the calibration curve was linear over the range of 50～250 μg/mL (r=0.9999). The extraction recovery rate was 98.37%. This method is sensitive, simple and well reproducible.
, http://www.100md.com
Key words Aloe barbadensis Mill. Aloe ferox Mill. RP-HPLC
中药芦荟具清肝热、通便的作用，用于便秘、小儿疳积、惊风，外治湿癣[1]。现代药理实验证明芦荟有抗肿瘤、抗菌、对心血管系统、对免疫系统及炎症、抗胃损伤及保肝作用等[2]。药材来源为百合科植物库拉索芦荟Aloe barbadensis Miller、好望角芦荟A. ferox Miller或其他同属近缘植物叶的液汁浓缩干燥物[1]。由于来源多样，有效成分含量不一，其质量控制对药材使用尤显重要。芦荟苷为芦荟中的主要有效成分之一，通过测定芦荟苷的含量来控制芦荟质量是行之有效的方法。
以往对芦荟苷的含量测定多采用比色法、紫外分光光度法、色谱-分光光度法等[2]，干扰因素较多。本文采用高效液相色谱法测定芦荟药材中芦荟苷的含量，以便更好地为药材质量控制提供依据。
, http://www.100md.com
1 仪器与试药
美国Waters 501型泵，U6K进样器，美国Beckman 163型可变波长紫外检测器和427型积分记录仪；紫外吸收光谱用日立557型分光光度仪测定。乙腈：色谱纯，水：Millipore-Q过滤高纯水，三氟醋酸：Merck试剂。芦荟苷标准品：购于中国药品生物制品检定所。芦荟生药(1998年3月购自北京市药材公司，标本样品存于中日友好临床医学研究所药物药理室)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：美国SUPELCO LC-18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱温为室温；流动相：乙腈-0.01 moL/L三氟醋酸(22∶78)，流速：1.0 mL/min；检测波长：359 nm，检测器灵敏度：0.05 AUFS。
应用上述条件，取芦荟苷0.112 mg/mL的甲醇溶液进行测定，理论塔板数可达6 000以上(图1)。
, 百拇医药
A-芦荟苷(1) B-样品
图1 芦荟样品HPLC图
2.2 标准曲线制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷对照品适量(约12.5 mg)至20 mL容量瓶中，加甲醇溶至刻度、摇匀，配成0.5 mg/mL的溶液；分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。各进样10 μL，按上述色谱分离条件进行HPLC测定，对照品峰面积积分值与对照品量(μg)呈线性关系，线性范围为50～250 μg/mL，回归方程为Y=0.269+54.723 X，r=0.9999。
2.3 样品测定：称取本品细粉50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇45 mL，超声提取30 min，加甲醇溶解至刻度，充分摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液照芦荟含量测定方法进行测定。精密吸取供试品溶液10 μL，以外标法计算得本品芦荟苷(C21H22O9)含量为136 mg/g，RSD=1.7%(n=6)。2.4 回收率试验：精密称取已知含量的芦荟粉末，加入一定量的芦荟苷对照品，按样品测定项下所述方法处理，测定芦荟苷含量，计算其平均回收率为98.37%，RSD=0.89%(n=6)。
, 百拇医药
2.5 精密度试验：精密吸取上述对照溶液10 μL，重复进样5 次，芦荟苷峰面积积分值的RSD=0.67%(n=5)。
2.6 重现性试验：按上述含量测定方法，精密称取同一芦荟样品粉末40 mg，制备供试液，HPLC测定并计算芦荟苷含量，RSD=1.84%(n=5)。
3 讨论
3.1 通过实验比较，用不同比例的乙腈-水、甲醇-水为流动相的HPLC法测定芦荟中芦荟苷的含量，均难以与其它杂质成分有效分离，样品峰的重迭将导致含量测定结果偏高。本法选用乙腈-0.01 mol/L三氟醋酸(22∶78)为流动相，芦荟苷与其它杂质成分能达到较高的分离度，理论塔板数高，准确性高。
3.2 芦荟苷在甲醇中溶解度最大[3]，因此选用甲醇制备样品供试液。实验比较了用甲醇直接冷浸过液、超声提取30 min和加热回流1 h 3种提取方法，发现前两种方法得到的含量测定结果相近，而回流提取1 h含量偏低，可能加热导致了部分芦荟苷的破坏，故选用了超声30 min的提取方式。
参考文献
1 中华人民共和国药典(一部).1995：139
2 阴 健，等.中药现代研究与临床应用(1).北京：学苑出版社，1993：348
3 The Merck Index，第10版，1983：46
收稿日期：1998-08-11, http://www.100md.com(张永文* 陈玉武 李克明)
单位：中日友好临床医学研究所 北京 100029
关键词：芦荟；芦荟苷；HPLC法；含量测定
中草药990808 摘 要 应用反相HPLC法测定芦荟苷(aloin)的含量。用SUPELCO LC-18(250 mm×4.6mm，5μm)层析柱，流动相：乙腈-0.01 mol/L三氟醋酸(22∶78)，流速：1mL/min，检测波长：359 nm，柱温：室温，用外标法测定。芦荟苷的平均回收率为98.37%，其检测线性范围为50～250 μg/mL，回归方程：Y=0.269+54.723 X，r=0.9999。本法灵敏、简便，重现性好。
Determination of Aloin in Barbados Aloe (Aloe barbadensis)
, 百拇医药
and Robust Aloe (Aloe ferox) by RP-HPLC
Zhang Yongwen, Chen Yuwu and Li keming
(China-Japan Friendship Institute of Clinical Medical Sciences, Beijing 100029)
Abstract A RP-HPLC method was developed for the determination of aloin in Aloe barbadensis Mill.. and A.ferox Mill. An ODS column was used with the mobile phase of acetonitrile-0.01 mol/L trifluoracetic acid (22∶78) at a flow rate of 1 mL/min. Samples were detected at 359 nm and at room temperature. External standard was used and the calibration curve was linear over the range of 50～250 μg/mL (r=0.9999). The extraction recovery rate was 98.37%. This method is sensitive, simple and well reproducible.
, http://www.100md.com
Key words Aloe barbadensis Mill. Aloe ferox Mill. RP-HPLC
中药芦荟具清肝热、通便的作用，用于便秘、小儿疳积、惊风，外治湿癣[1]。现代药理实验证明芦荟有抗肿瘤、抗菌、对心血管系统、对免疫系统及炎症、抗胃损伤及保肝作用等[2]。药材来源为百合科植物库拉索芦荟Aloe barbadensis Miller、好望角芦荟A. ferox Miller或其他同属近缘植物叶的液汁浓缩干燥物[1]。由于来源多样，有效成分含量不一，其质量控制对药材使用尤显重要。芦荟苷为芦荟中的主要有效成分之一，通过测定芦荟苷的含量来控制芦荟质量是行之有效的方法。
以往对芦荟苷的含量测定多采用比色法、紫外分光光度法、色谱-分光光度法等[2]，干扰因素较多。本文采用高效液相色谱法测定芦荟药材中芦荟苷的含量，以便更好地为药材质量控制提供依据。
, http://www.100md.com
1 仪器与试药
美国Waters 501型泵，U6K进样器，美国Beckman 163型可变波长紫外检测器和427型积分记录仪；紫外吸收光谱用日立557型分光光度仪测定。乙腈：色谱纯，水：Millipore-Q过滤高纯水，三氟醋酸：Merck试剂。芦荟苷标准品：购于中国药品生物制品检定所。芦荟生药(1998年3月购自北京市药材公司，标本样品存于中日友好临床医学研究所药物药理室)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：美国SUPELCO LC-18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱温为室温；流动相：乙腈-0.01 moL/L三氟醋酸(22∶78)，流速：1.0 mL/min；检测波长：359 nm，检测器灵敏度：0.05 AUFS。
应用上述条件，取芦荟苷0.112 mg/mL的甲醇溶液进行测定，理论塔板数可达6 000以上(图1)。
, 百拇医药
A-芦荟苷(1) B-样品
图1 芦荟样品HPLC图
2.2 标准曲线制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷对照品适量(约12.5 mg)至20 mL容量瓶中，加甲醇溶至刻度、摇匀，配成0.5 mg/mL的溶液；分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。各进样10 μL，按上述色谱分离条件进行HPLC测定，对照品峰面积积分值与对照品量(μg)呈线性关系，线性范围为50～250 μg/mL，回归方程为Y=0.269+54.723 X，r=0.9999。
2.3 样品测定：称取本品细粉50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇45 mL，超声提取30 min，加甲醇溶解至刻度，充分摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液照芦荟含量测定方法进行测定。精密吸取供试品溶液10 μL，以外标法计算得本品芦荟苷(C21H22O9)含量为136 mg/g，RSD=1.7%(n=6)。2.4 回收率试验：精密称取已知含量的芦荟粉末，加入一定量的芦荟苷对照品，按样品测定项下所述方法处理，测定芦荟苷含量，计算其平均回收率为98.37%，RSD=0.89%(n=6)。
, 百拇医药
2.5 精密度试验：精密吸取上述对照溶液10 μL，重复进样5 次，芦荟苷峰面积积分值的RSD=0.67%(n=5)。
2.6 重现性试验：按上述含量测定方法，精密称取同一芦荟样品粉末40 mg，制备供试液，HPLC测定并计算芦荟苷含量，RSD=1.84%(n=5)。
3 讨论
3.1 通过实验比较，用不同比例的乙腈-水、甲醇-水为流动相的HPLC法测定芦荟中芦荟苷的含量，均难以与其它杂质成分有效分离，样品峰的重迭将导致含量测定结果偏高。本法选用乙腈-0.01 mol/L三氟醋酸(22∶78)为流动相，芦荟苷与其它杂质成分能达到较高的分离度，理论塔板数高，准确性高。
3.2 芦荟苷在甲醇中溶解度最大[3]，因此选用甲醇制备样品供试液。实验比较了用甲醇直接冷浸过液、超声提取30 min和加热回流1 h 3种提取方法，发现前两种方法得到的含量测定结果相近，而回流提取1 h含量偏低，可能加热导致了部分芦荟苷的破坏，故选用了超声30 min的提取方式。
参考文献
1 中华人民共和国药典(一部).1995：139
2 阴 健，等.中药现代研究与临床应用(1).北京：学苑出版社，1993：348
3 The Merck Index，第10版，1983：46
收稿日期：1998-08-11, http://www.100md.com(张永文* 陈玉武 李克明)