654-2对内毒素性肺损伤内皮素-1 mRNA表达的影响
作者：林建东 龚捷音 杨锡馨 吴鄂生
单位：林建东 龚捷音 杨锡馨 福建医科大学附属第一医院ICU，福州 350005；吴鄂生 湖南医大湘雅医院
关键词：
内皮素ET 内皮素ET-1主要是由血管内皮合成和释放的强烈收缩血管活性肽。本文旨在研究654-2对内毒素性肺损伤时内皮素-1(ET-1)mRNA表达的影响。
1 资料与方法
1.1 动物分组 雄性健康SD大鼠21只，体重180-230 g。随机等分成对照组、内毒素组和654-2组。
1.2 方法 实验前禁食12小时，自由饮水，全部动物麻醉均用3%苯巴比妥30 mg/kg ip。对照组分别在麻醉后即时和1小时后各静注生理盐水0.5 ml 1次，内毒素组在麻醉后即时静注生理盐水0.5 ml，1小时后静注精制内毒素(LPS，0.55B5，Sigma产品)5 mg/kg；654-2组麻醉后静注654-2 20 mg/kg，1小时后静注内毒素5 mg/kg，动物于注内毒素后5小时断头处死，左肺分别供作组织理组织切片和提取组织RNA之用，右侧肺行肺泡灌洗作白细胞计数。
, 百拇医药
1.3 RT-PCR方法 动物肺细胞组织总RNA提取，用市售TRIzol提取液(GIBCO公司)一步法提取总RNA，操作按厂商说明书略作改良。cDNA合成用市售逆转录药盒(Promege公司)严格按说明操作，提取总RNA均经紫外分光度计测260/280 mm波长，测OD值在1.6～2.0，并作定量。取总RNA 2 μg逆转录合成cDNA。
2 结果
2.1 肺病理组织学改变
空白对照组，大鼠肺泡结构清晰，肺泡壁薄，内毒素组大鼠肺泡水肿明显，肺泡壁增厚，大量中性粒细胞浸润，654-2组大鼠肺间质增厚，有中性粒细胞浸润，无明显水肿。
2.2 肺泡灌洗液WBC计数 见附表。
, 百拇医药
附表 肺泡灌洗液WBC计数
组 别
WBC(×109/L)
PMN
AM
C组
(n=7)
1.40±0.16
0.047±0.003
0.909±0.034
L组
(n=7)
, 百拇医药
3.16±0.31*
0.267±0.43*
0.685±0.0556*
654-2组
(n=7)
1.81±0.21*△
0.152±0.023*△
0.863±0.048△
*与C组比较P<0.01，△与L组比较P<0.01
2.3 肺组织ET-1扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳，电泳时加标准分子量，在499 Kb(ET-1引物位置)处，C组和654-2组均有微弱的条带，L组条带明显，ET-1和rLP32扩增条带比值，C组为0.036±0.138，L组0.671±0.116，654-2组为0.449±0.63。L组与C组和654-2组比较均有显著差异(P<0.01)；654-2组与C组比较无统计学差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
已经证实呼吸系统是体内内皮素最重要的合成代谢和靶器官，肺脏内合成的内皮素主要为内皮素-1(ET-1)，并且主要分布ET-1受体，ET-1的释放受许多因素的影响，缺血、缺氧、内毒素、细胞因子、酸碱失衡等均可促进内皮素基因表达及释放。实验文献报道[1]均证明急性肺损伤时，血中ET-1浓度明显增高，内毒素或脂多糖可使人体支气管上皮细胞和巨噬细胞内皮素ET-1基因表达上调[2]。本研究结果显示，大鼠静注内毒素后，肺损伤明显，且ET-1 mRNA表达高于对照组和654-2组，说明ET-1参与了急性肺损伤的病理生理过程，ET-1对急性肺损伤的影响可能主要有①促进支气管平滑肌收缩，增加气道阻力，降低肺顺应性[3]；②促进氧自由基形成，激活凝血系统[4]；③调制细胞因子如TNF-2、IL6、IL8等炎性介质的合成和释放[5]；④ET-1可引起肺动脉高压。
, 百拇医药
654-2属于莨菪碱类药物，在国内被广泛应用于各类休克等微循环障碍性疾病的治疗，亦逐渐应用于急性肺水肿和ARDS抢救。我们的研究结果表明654-2组肺损伤程度和ET-1 mRNA表达与内毒素组比明显减轻，对肺损伤具有保护作用，654-2抑制ET-1 mRAN转录的机制究竟是其对核转录入因子的直接作用或是间接作用，如抗氧自由基减少炎性因子产生释放所致，尚待深入研究。
参考文献
[1]Mitaka C,Hirata Y,Nagura,et al.Circulaling endothelin-1 comcetration in acute respiratory failure.Chest,1993,104:476.
[2]NaKano J,Takiznwa H,ohtoshi T,et al.Endotoxin and pro-inflannatory cytokines stimalate endothelin-1 expression anet release by airway epithelial cells.Chin Exp Allergy,1996,24:330.
, 百拇医药
[3]Drllml W,Stelter RL,Waldhausl W,et al.Endothelin-1 in adult rspiratory distress syndrome.Am Rev Respir Dis,1993,148:1169.
[4]Nagase T,FuKchir,JE,et al.Endotholin-1 stimutales arachidonate,15-lipoxygenase activity and oxygen radical formation in the distal lung.Biochem Biophys Res Commun,1990,168:485.
[5]Battistini B,Forget MA,Laisht D.Petential rotes for endthelin in systenic inrflammatory response symdrome with a particular relationship to cytokines.Shock,1996,5:167.
收稿：1998-07-14
修回：1999-02-20, 百拇医药
单位：林建东 龚捷音 杨锡馨 福建医科大学附属第一医院ICU，福州 350005；吴鄂生 湖南医大湘雅医院
关键词：
内皮素ET 内皮素ET-1主要是由血管内皮合成和释放的强烈收缩血管活性肽。本文旨在研究654-2对内毒素性肺损伤时内皮素-1(ET-1)mRNA表达的影响。
1 资料与方法
1.1 动物分组 雄性健康SD大鼠21只，体重180-230 g。随机等分成对照组、内毒素组和654-2组。
1.2 方法 实验前禁食12小时，自由饮水，全部动物麻醉均用3%苯巴比妥30 mg/kg ip。对照组分别在麻醉后即时和1小时后各静注生理盐水0.5 ml 1次，内毒素组在麻醉后即时静注生理盐水0.5 ml，1小时后静注精制内毒素(LPS，0.55B5，Sigma产品)5 mg/kg；654-2组麻醉后静注654-2 20 mg/kg，1小时后静注内毒素5 mg/kg，动物于注内毒素后5小时断头处死，左肺分别供作组织理组织切片和提取组织RNA之用，右侧肺行肺泡灌洗作白细胞计数。
, 百拇医药
1.3 RT-PCR方法 动物肺细胞组织总RNA提取，用市售TRIzol提取液(GIBCO公司)一步法提取总RNA，操作按厂商说明书略作改良。cDNA合成用市售逆转录药盒(Promege公司)严格按说明操作，提取总RNA均经紫外分光度计测260/280 mm波长，测OD值在1.6～2.0，并作定量。取总RNA 2 μg逆转录合成cDNA。
2 结果
2.1 肺病理组织学改变
空白对照组，大鼠肺泡结构清晰，肺泡壁薄，内毒素组大鼠肺泡水肿明显，肺泡壁增厚，大量中性粒细胞浸润，654-2组大鼠肺间质增厚，有中性粒细胞浸润，无明显水肿。
2.2 肺泡灌洗液WBC计数 见附表。
, 百拇医药
附表 肺泡灌洗液WBC计数
组 别
WBC(×109/L)
PMN
AM
C组
(n=7)
1.40±0.16
0.047±0.003
0.909±0.034
L组
(n=7)
, 百拇医药
3.16±0.31*
0.267±0.43*
0.685±0.0556*
654-2组
(n=7)
1.81±0.21*△
0.152±0.023*△
0.863±0.048△
*与C组比较P<0.01，△与L组比较P<0.01
2.3 肺组织ET-1扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳，电泳时加标准分子量，在499 Kb(ET-1引物位置)处，C组和654-2组均有微弱的条带，L组条带明显，ET-1和rLP32扩增条带比值，C组为0.036±0.138，L组0.671±0.116，654-2组为0.449±0.63。L组与C组和654-2组比较均有显著差异(P<0.01)；654-2组与C组比较无统计学差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
已经证实呼吸系统是体内内皮素最重要的合成代谢和靶器官，肺脏内合成的内皮素主要为内皮素-1(ET-1)，并且主要分布ET-1受体，ET-1的释放受许多因素的影响，缺血、缺氧、内毒素、细胞因子、酸碱失衡等均可促进内皮素基因表达及释放。实验文献报道[1]均证明急性肺损伤时，血中ET-1浓度明显增高，内毒素或脂多糖可使人体支气管上皮细胞和巨噬细胞内皮素ET-1基因表达上调[2]。本研究结果显示，大鼠静注内毒素后，肺损伤明显，且ET-1 mRNA表达高于对照组和654-2组，说明ET-1参与了急性肺损伤的病理生理过程，ET-1对急性肺损伤的影响可能主要有①促进支气管平滑肌收缩，增加气道阻力，降低肺顺应性[3]；②促进氧自由基形成，激活凝血系统[4]；③调制细胞因子如TNF-2、IL6、IL8等炎性介质的合成和释放[5]；④ET-1可引起肺动脉高压。
, 百拇医药
654-2属于莨菪碱类药物，在国内被广泛应用于各类休克等微循环障碍性疾病的治疗，亦逐渐应用于急性肺水肿和ARDS抢救。我们的研究结果表明654-2组肺损伤程度和ET-1 mRNA表达与内毒素组比明显减轻，对肺损伤具有保护作用，654-2抑制ET-1 mRAN转录的机制究竟是其对核转录入因子的直接作用或是间接作用，如抗氧自由基减少炎性因子产生释放所致，尚待深入研究。
参考文献
[1]Mitaka C,Hirata Y,Nagura,et al.Circulaling endothelin-1 comcetration in acute respiratory failure.Chest,1993,104:476.
[2]NaKano J,Takiznwa H,ohtoshi T,et al.Endotoxin and pro-inflannatory cytokines stimalate endothelin-1 expression anet release by airway epithelial cells.Chin Exp Allergy,1996,24:330.
, 百拇医药
[3]Drllml W,Stelter RL,Waldhausl W,et al.Endothelin-1 in adult rspiratory distress syndrome.Am Rev Respir Dis,1993,148:1169.
[4]Nagase T,FuKchir,JE,et al.Endotholin-1 stimutales arachidonate,15-lipoxygenase activity and oxygen radical formation in the distal lung.Biochem Biophys Res Commun,1990,168:485.
[5]Battistini B,Forget MA,Laisht D.Petential rotes for endthelin in systenic inrflammatory response symdrome with a particular relationship to cytokines.Shock,1996,5:167.
收稿：1998-07-14
修回：1999-02-20, 百拇医药