原发性肝癌肿瘤微血管密度及凋亡指数的表达
作者：徐洪雨 毕 莉 杨幼林 关希丽 徐金凤
单位：徐洪雨 杨幼林 哈尔滨医科大学第一临床医学院消化内科，150001；毕 莉 检验科；关希丽 病理科；徐金凤 家庭病房
关键词：肝癌；微血管密度；凋亡指数
中国急救医学990908 摘要：目的 探讨原发性肝癌中肿瘤微血管密度(MVD)与细胞凋亡的关系，以及二者与肿瘤生物学行为的关系。方法 选择32例原发性肝癌手术标本，采用免疫组织化学方法测定Ⅷ因子的蛋白表达，采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果 原发性肝癌中肿瘤微血管密度(MVD)为30.96±12.32；肝癌组织的凋亡指数11.69±4.24，且二者的表达呈负相关。结论 肿瘤微血管密度在原发性肝癌的生长和转移中起到重要的作用。
中图分类号：R 735.7；R 735.7
, 百拇医药
文献标识码：A
文章编号：1002-1949(1999)09-0530-02
Expression of the microvessel density and apoptosis index in primary liver cancer
XU Hong-yu,BI Li,YANG You-lin,et al.
First Hospital of Harbin Medical University,Harbin 150001,China
Abstract Objective To evalute the relation of the expression of microvessel density and the apoptosis index;to study the relation between the expression and the cancer clinic.Methods A retrospective study was done in 32 primary liver cancer patients.To determine the expression of Ⅷ factor using immunhistochemical staining.To investigate the apoptosis index using TUNEL way.Results The expression of the microvessel density (MVD)was 30.96±12.32 in primary liver cancer.The Apoptosis index was 11.69±4.24 in primary liver cancers.Two of them were negative relevent,The relative index was-0.561.Conclusion The microvessel density playes an important role in the growth and metastasis of primary liver cancers.
, 百拇医药
Key words primary liver cancer； Microvessel density ； Apoptosis index
大量的研究证明，实体瘤的生长和转移有赖于新生血管形成[1]。肿瘤血管密度被认为是一个反映肿瘤血管生成的指标。有文献报道，肿瘤的新生血管数量与临床预后有密切相关；胃癌、脑肿瘤的新生血管化程度与肿瘤侵袭性及其预后有相关性，是一个独立的预后因素[2～4]。原发性肝癌具有短时间内即可发生肝内门脉广泛转移的特点，自然病程仅为3～6个月，是严重威胁人民生命的一种恶性肿瘤。我们采用免疫组织化学方法检测Ⅷ因子在原发性肝癌中的表达，同时采用TUNEL法测定肿瘤细胞的凋亡指数，以探讨肿瘤微血管密度与原发性肝癌的肿瘤生物学行为及凋亡指数的相关性。
1 资料与方法
1.1 原发性肝癌标本
, 百拇医药
32例标本均为本院1994～1998年间外科手术切除标本，经病理检查证实为肝细胞癌。其中男27例，女5例，年龄35～62岁，平均43.76岁，术前未经过任何化疗和放疗，选择12例病理证实为肝硬化的标本作为对照。标本经福尔马林固定，常规脱水包埋，5μm连续切片，分别用常规HE染色和不同的免疫组织化学及原位杂交染色。
1.2 染色方法
1.2.1 免疫组织化学染色 采用ABC法。ABC试剂盒、Ⅷ因子抗体及阳性对照片均购自武汉博士德生物工程有限公司。染色步骤按产品说明书进行。阴性对照设PBS替代一抗体的空白对照和正常兔血清(1：50)替代一抗体替代对照。
1.2.2 原位细胞凋亡检测 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法，试剂盒购自武汉博士德生物有限公司。染色步骤按产品说明书进行。
, 百拇医药
1.3 观察指标
1.3.1 微血管染色及定量方法 采用Weidner报导的方法进行[6]。先在40倍光镜下扫视整个切片，寻找高血管密度区，即“热点”，再在200倍视野下计数染成棕色的血管数目，结果用单个200倍视野下最多的血管数目来表示。
1.3.2 凋亡指数判定 细胞核内棕色颗粒为阳性。计数1000个细胞凋亡细胞所占的百分比为凋亡指数。
1.4 统计学分析 相关数据分别用t检验，χ2检验或直线相关进行统计学分析。
2 结果
2.1 微血管分布、定量及凋亡指数测定结果
, http://www.100md.com
微血管分布在癌组织内，且分布呈异质性，在不同区域其微血管数量不同；寻找“热点”后计数微血管密度为30.96±12.32。肝癌组织的凋亡指数为11.69±4.24。
2.2 原发性肝癌病例的临床病理资料 见附表。
附表 原发性肝癌病例的临床病理资料
MVD(
±s)
P值
例数
32
肿瘤直径
≤5cm
, http://www.100md.com
22.67±8.34
>5cm
37.95±15.28
<0.05
肿瘤包膜
有
28.43±10.59
无
31.99±11.97
>0.05
肿瘤分化
高分化
, 百拇医药 31.45±11.34
低分化
30.87±11.69
>0.05
门脉癌栓
有
20.77±7.89
无
40.11±12.34
<0.01
2.3 原发性肝癌中微血管密度与凋亡指数的关系
原发性肝癌中微血管密度与凋亡指数呈负相关，相关系数为r=-0.561。
, 百拇医药
3 讨论
原发性肝癌为临床常见的恶性肿瘤，年发病率达到原发性肝癌为临床常见的恶性肿瘤，年发病率达到31/10万，而且肝癌患者术前难以确定有无微小转移。因此，术后复发和转移成为目前临床亟需解决的问题。肿瘤血管形成程度与临床转归有关的研究，提示了血管形成与肿瘤侵袭性之间相关性。肿瘤血管密度是反映肿瘤血管生成的一个重要指标，对肿瘤的浸润和转移有重要影响。已有学者证明，肿瘤血管生成是反映胃癌、乳腺癌及脑肿瘤患者预后的因子[1～3]。
目前多数学者认为采用对血管内皮细胞抗原的免疫组织化学技术进行肿瘤血管定量的方法准确可靠。平均血管密度(MVD)被认为是能反映肿瘤血管生成的一个指标，且有可能成为预测肿瘤转移复发和预后的一项指标[5，6]。本研究采用此方法测得肝癌组织的MVD为30.96±12.32，而且我们还观察到在微血管化密度较高的区域，新生血管化程度活跃，这与陶厚权在胃癌中的研究结果相似[2]。研究发现肿瘤的大小之间MVD有显著差异，有无门脉癌栓之间的MVD亦有显著差异，这提示MVD在肿瘤的生长和转移方面发挥了重要的作用。
, http://www.100md.com
本研究采用TUNEL法测定肝癌组织的凋亡指数为11.69±4.24，且与MVD的表达呈负相关。我们认为这是由于MVD的高表达，说明有大量新生血管的形成，为肿瘤组织提供了充足的养分，使肿瘤细胞的生存期延长，肿瘤细胞的凋亡率下降，从而使肿瘤细胞的生长速度加快，恶性程度更高。
因此我们认为微血管密度对于原发性肝癌的生长和转移起到重要的作用。临床上应进一步制备相应的抑制剂，抑制肿瘤血管的生成，阻断肿瘤营养的供给，从而达到抑制肝癌的生长和转移的目的，延长肝癌患者的生存期。本课题受黑龙江省自然科学基金资助
参考文献
[1]张海滨，田野苹，叶天星.血管内皮生长因子与实体肿瘤〔J〕.国外医学.生理、病理科学与临床分册，1998，18(2)：117.
[2]陶厚权，林言浅，王瑞年，等.血管内皮生长因子表达在胃癌浸润转移中的作用〔J〕.中华消化杂志，1998，18(5)：287.
, 百拇医药
[3]陶厚权，王瑞年.血管内皮生长因子与脑肿瘤〔J〕.国外医学神经病学神经外科学分册，1996，23(2)：146.
[4]Kiyoshi Maeda,Yong-suk Chung,Yoshinari Ogawa， et al.Prognostic Value of Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Gastic Carcinoma〔J〕.Cancer,1996,77(5):858.
[5]夏景林，杨秉辉，叶胜龙.原发性肝癌肿瘤血管密度及其表达的临床病理意义.中华肿瘤杂志，1998，20(6)：440.
[6]Weidner N.Curred pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumors〔J〕.Breast Cancer Res Treat,1995,36:169-180.
收稿：1998-12-07
修回：1999-04-10, 百拇医药
单位：徐洪雨 杨幼林 哈尔滨医科大学第一临床医学院消化内科，150001；毕 莉 检验科；关希丽 病理科；徐金凤 家庭病房
关键词：肝癌；微血管密度；凋亡指数
中国急救医学990908 摘要：目的 探讨原发性肝癌中肿瘤微血管密度(MVD)与细胞凋亡的关系，以及二者与肿瘤生物学行为的关系。方法 选择32例原发性肝癌手术标本，采用免疫组织化学方法测定Ⅷ因子的蛋白表达，采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果 原发性肝癌中肿瘤微血管密度(MVD)为30.96±12.32；肝癌组织的凋亡指数11.69±4.24，且二者的表达呈负相关。结论 肿瘤微血管密度在原发性肝癌的生长和转移中起到重要的作用。
中图分类号：R 735.7；R 735.7
, 百拇医药
文献标识码：A
文章编号：1002-1949(1999)09-0530-02
Expression of the microvessel density and apoptosis index in primary liver cancer
XU Hong-yu,BI Li,YANG You-lin,et al.
First Hospital of Harbin Medical University,Harbin 150001,China
Abstract Objective To evalute the relation of the expression of microvessel density and the apoptosis index;to study the relation between the expression and the cancer clinic.Methods A retrospective study was done in 32 primary liver cancer patients.To determine the expression of Ⅷ factor using immunhistochemical staining.To investigate the apoptosis index using TUNEL way.Results The expression of the microvessel density (MVD)was 30.96±12.32 in primary liver cancer.The Apoptosis index was 11.69±4.24 in primary liver cancers.Two of them were negative relevent,The relative index was-0.561.Conclusion The microvessel density playes an important role in the growth and metastasis of primary liver cancers.
, 百拇医药
Key words primary liver cancer； Microvessel density ； Apoptosis index
大量的研究证明，实体瘤的生长和转移有赖于新生血管形成[1]。肿瘤血管密度被认为是一个反映肿瘤血管生成的指标。有文献报道，肿瘤的新生血管数量与临床预后有密切相关；胃癌、脑肿瘤的新生血管化程度与肿瘤侵袭性及其预后有相关性，是一个独立的预后因素[2～4]。原发性肝癌具有短时间内即可发生肝内门脉广泛转移的特点，自然病程仅为3～6个月，是严重威胁人民生命的一种恶性肿瘤。我们采用免疫组织化学方法检测Ⅷ因子在原发性肝癌中的表达，同时采用TUNEL法测定肿瘤细胞的凋亡指数，以探讨肿瘤微血管密度与原发性肝癌的肿瘤生物学行为及凋亡指数的相关性。
1 资料与方法
1.1 原发性肝癌标本
, 百拇医药
32例标本均为本院1994～1998年间外科手术切除标本，经病理检查证实为肝细胞癌。其中男27例，女5例，年龄35～62岁，平均43.76岁，术前未经过任何化疗和放疗，选择12例病理证实为肝硬化的标本作为对照。标本经福尔马林固定，常规脱水包埋，5μm连续切片，分别用常规HE染色和不同的免疫组织化学及原位杂交染色。
1.2 染色方法
1.2.1 免疫组织化学染色 采用ABC法。ABC试剂盒、Ⅷ因子抗体及阳性对照片均购自武汉博士德生物工程有限公司。染色步骤按产品说明书进行。阴性对照设PBS替代一抗体的空白对照和正常兔血清(1：50)替代一抗体替代对照。
1.2.2 原位细胞凋亡检测 采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法，试剂盒购自武汉博士德生物有限公司。染色步骤按产品说明书进行。
, 百拇医药
1.3 观察指标
1.3.1 微血管染色及定量方法 采用Weidner报导的方法进行[6]。先在40倍光镜下扫视整个切片，寻找高血管密度区，即“热点”，再在200倍视野下计数染成棕色的血管数目，结果用单个200倍视野下最多的血管数目来表示。
1.3.2 凋亡指数判定 细胞核内棕色颗粒为阳性。计数1000个细胞凋亡细胞所占的百分比为凋亡指数。
1.4 统计学分析 相关数据分别用t检验，χ2检验或直线相关进行统计学分析。
2 结果
2.1 微血管分布、定量及凋亡指数测定结果
, http://www.100md.com
微血管分布在癌组织内，且分布呈异质性，在不同区域其微血管数量不同；寻找“热点”后计数微血管密度为30.96±12.32。肝癌组织的凋亡指数为11.69±4.24。
2.2 原发性肝癌病例的临床病理资料 见附表。
附表 原发性肝癌病例的临床病理资料
MVD(
±s)P值
例数
32
肿瘤直径
≤5cm
, http://www.100md.com
22.67±8.34
>5cm
37.95±15.28
<0.05
肿瘤包膜
有
28.43±10.59
无
31.99±11.97
>0.05
肿瘤分化
高分化
, 百拇医药 31.45±11.34
低分化
30.87±11.69
>0.05
门脉癌栓
有
20.77±7.89
无
40.11±12.34
<0.01
2.3 原发性肝癌中微血管密度与凋亡指数的关系
原发性肝癌中微血管密度与凋亡指数呈负相关，相关系数为r=-0.561。
, 百拇医药
3 讨论
原发性肝癌为临床常见的恶性肿瘤，年发病率达到原发性肝癌为临床常见的恶性肿瘤，年发病率达到31/10万，而且肝癌患者术前难以确定有无微小转移。因此，术后复发和转移成为目前临床亟需解决的问题。肿瘤血管形成程度与临床转归有关的研究，提示了血管形成与肿瘤侵袭性之间相关性。肿瘤血管密度是反映肿瘤血管生成的一个重要指标，对肿瘤的浸润和转移有重要影响。已有学者证明，肿瘤血管生成是反映胃癌、乳腺癌及脑肿瘤患者预后的因子[1～3]。
目前多数学者认为采用对血管内皮细胞抗原的免疫组织化学技术进行肿瘤血管定量的方法准确可靠。平均血管密度(MVD)被认为是能反映肿瘤血管生成的一个指标，且有可能成为预测肿瘤转移复发和预后的一项指标[5，6]。本研究采用此方法测得肝癌组织的MVD为30.96±12.32，而且我们还观察到在微血管化密度较高的区域，新生血管化程度活跃，这与陶厚权在胃癌中的研究结果相似[2]。研究发现肿瘤的大小之间MVD有显著差异，有无门脉癌栓之间的MVD亦有显著差异，这提示MVD在肿瘤的生长和转移方面发挥了重要的作用。
, http://www.100md.com
本研究采用TUNEL法测定肝癌组织的凋亡指数为11.69±4.24，且与MVD的表达呈负相关。我们认为这是由于MVD的高表达，说明有大量新生血管的形成，为肿瘤组织提供了充足的养分，使肿瘤细胞的生存期延长，肿瘤细胞的凋亡率下降，从而使肿瘤细胞的生长速度加快，恶性程度更高。
因此我们认为微血管密度对于原发性肝癌的生长和转移起到重要的作用。临床上应进一步制备相应的抑制剂，抑制肿瘤血管的生成，阻断肿瘤营养的供给，从而达到抑制肝癌的生长和转移的目的，延长肝癌患者的生存期。本课题受黑龙江省自然科学基金资助
参考文献
[1]张海滨，田野苹，叶天星.血管内皮生长因子与实体肿瘤〔J〕.国外医学.生理、病理科学与临床分册，1998，18(2)：117.
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, 百拇医药
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[4]Kiyoshi Maeda,Yong-suk Chung,Yoshinari Ogawa， et al.Prognostic Value of Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Gastic Carcinoma〔J〕.Cancer,1996,77(5):858.
[5]夏景林，杨秉辉，叶胜龙.原发性肝癌肿瘤血管密度及其表达的临床病理意义.中华肿瘤杂志，1998，20(6)：440.
[6]Weidner N.Curred pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumors〔J〕.Breast Cancer Res Treat,1995,36:169-180.
收稿：1998-12-07
修回：1999-04-10, 百拇医药