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编号:10214229
知母总多糖的抗炎作用
http://www.100md.com 《第二军医大学学报》 1999年第10期
     作者:陈万生 韩 军 李 力 乔传卓

    单位:第二军医大学药学院生药学教研室,上海,200433;韩 军:第二军医大学长海医院血液内科

    关键词:知母总多糖;前列腺素E;皮质酮;促肾上腺皮质激素

    第二军医大学学报991016 摘要 目的:考察知母总多糖(TPA)的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法:应用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀及大鼠棉球性肉芽肿增生动物模型进行整体药效试验。结果:TPA能显著抑制上述各种动物模型的炎症反应,但不能显著抑制摘除双侧肾上腺大鼠角叉菜胶性足趾肿胀;TPA能显著提高大鼠血浆中皮质酮浓度,而使血浆中ACTH浓度显著降低;TPA还能显著降低炎症组织中PGE含量。结论:TPA对急慢性炎症均有明显的抑制作用,促进肾上腺分泌较高水平的糖皮质激素及抑制炎症组织PGE的合成或释放是其发挥抗炎作用的重要途径。
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    中图分类号 R 285.5 文献标识码:A

    Studies on the anti-inflammatory activity of total polysaccharides of Anemarrhena asphodeloides Bunge

    Chen Wansheng, Han Jun, Li Li, Qiao Chuanzhuo

    (Department of Pharmacognosy, College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai,200433)

    ABSTRACT Objective: To investigate the anti-inflammatory activity of total polysaccharides of Anemarrhena asphodeloides Bunge (TPA) and discuss the mechanism roughly. Methods: We observed activities shown in various models of experimental inflammation including: (1)mouse ear inflammation caused by xylen;(2) increased vascular permeability induced by acetic acid in mice;(3) paw edema caused by carrageenin in rats; (4) granuloma caused by implanted cotton ball in rats. Results: Anti-inflammatory activities of TPA were found in all those models above, but anti-inflammatory activity wasn′t found in rats whose adrenal glands were extirpated. Compared with control group, corticosterone level in plasma of TPA group increased obviously, while ACTH level decreased, PGE level in inflammatory tissue also lowered. Conclusion: TPA could be used to cure not only acute inflammation but also chronic inflammation in animal, and promoting the adrenal gland to secrete glucocorticoid and inhibiting the synthesize and release of PGE in inflammatory tissue might be two important routes of TPA.
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    KEY WORDS total polysaccharides of Anemarrhena asphodeloides Bunge; prostaglandin E; corticosterone; adrenocorticotrophic hormone

    中药知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge 的干燥根茎,具有清热、泻火之功效[1],临床上曾用它与夏枯草配伍外用, 治疗毛囊炎[2]。以往的研究发现,知母具有确切的抗炎作用, 而知母总多糖(TPA)可能是其主要的抗炎活性成分[3]。 本研究应用多种炎症模型对TPA的抗炎作用进行了进一步的验证,并初步探讨TPA的抗炎作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 动物和试药 昆明种小鼠 (20±2) g,雌雄不拘;Wistar大鼠 (150±40) g,雌雄兼备,均由本校实验动物中心提供。TPA 按文献[3]的方法制备,生药饮片以80%乙醇回流3次,药渣晒干后,沸水提取。提取液浓缩,加乙醇至含醇量达80%,沉淀再用水溶解,加乙醇同法沉淀,反复3次,最后1次水溶液以活性炭脱色,沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,真空干燥,得白色粉末,即得TPA,用时以蒸馏水配制成各种浓度。氢化可的松(上海市信谊制药厂);0.5% 依文蓝(BDH公司),用0.9% NaCl溶液配制;吲哚美辛(上海第十七制药厂),用时以1% 羧甲基纤维素钠配成混悬液;二甲苯(上海化学试剂公司);角叉菜胶(Sigma公司);皮质酮放射免疫测定盒由上海内分泌研究所提供,ACTH放射免疫测定盒为天津德普生物技术和产品有限公司产品。
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    1.2 方法

    1.2.1 小鼠耳廓肿胀度测定[4] 昆明种小鼠52只,随机分成5组,分别为空白对照组、TPA 100,200,300 mg/kg组及吲哚美辛阳性对照组。灌胃给药(ig),各组末次给药1 h后,于右耳廓两侧均匀涂布二甲苯30 μl,左耳对照,致炎2 h后处死,剪下两耳廓,用8 mm 打孔器取耳片称量,以两耳片质量差为肿胀度。

    1.2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性测定[4] 昆明种小鼠45只,随机分成3组,分别为空白对照组、TPA给药组(ig,300 mg/kg×3 d)及阳性对照组(吲哚美辛ig,20 mg/kg×1 d)。各组末次给药1 h后,尾静脉注入0.5%依文蓝5 ml/kg, 5 min后腹腔注射(ip) 0.7% 醋酸10 ml/kg,30 min后脱颈椎处死,剖腹用蒸馏水多次冲洗腹腔,冲洗液稀释至10.0 ml,离心,取上清液于721分光光度计 610 nm处测光密度(D),以D值计通透性。
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    1.2.3 角叉菜胶致大鼠足趾肿胀度测定[5] 按毛细管容积法测定。(1) 角叉菜胶致正常大鼠足趾肿胀 大鼠24只,随机分成3组,分别为空白对照组、阳性对照组(吲哚美辛组)以及TPA组,分别ig生理盐水5 ml/kg×3 d,吲哚美辛30 mg/kg(最后1 d给药),TPA 400 mg/kg×3 d,末次给药前测足跖容积,给药后1 h皮下注射(sc)1%角叉菜胶0.15 ml/只致炎,之后 1,2,3,4 h 分别测足跖容积,与致炎前的容积之差即为肿胀度。(2) 角叉菜胶致摘除肾上腺大鼠足趾肿胀 大鼠16只,摘除双侧肾上腺后饲以1% NaCl溶液,分为2组,术后3 d分别ig生理盐水 5 ml/kg和TPA 400 mg/kg×3 d,按上法测肿胀度。

    1.2.4 棉球肉芽肿增生测定[5] 大鼠24只,ip氯胺酮、地西泮(安定)各0.15 ml麻醉,在无菌操作下切开两侧腋下皮肤,各植入30 mg的消毒棉球1个,术后第2天起分为3组, 分别ig 生理盐水5 ml/kg,TPA 400 mg/kg×3 d、氢化可的松20 mg/kg,于第8天处死大鼠,剥离肉芽组织,90℃烘干(约2 h)后称量。
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    1.2.5 炎症组织中前列腺素E (PGE) 的测定[4] 24只大鼠随机分成3组,每组8只,分别ig生理盐水5 ml/kg×3 d、吲哚美辛30 mg/kg (最后1 d给药)、TPA 400 mg/kg×3 d,末次给药 30 min后,于每鼠足跖sc 1%角叉菜胶0.15 ml致炎,5 h 后处死大鼠,将致炎足跖自踝关节以上1 cm处剪下,称量。剪碎皮肤放入7 ml生理盐水中浸泡1 h,离心,取上清液0.3 ml,加KOH甲醇溶液(0.5 mol/ml) 2 ml,在50℃水浴异构化20 min。加甲醇5 ml摇匀,以岛津UV-265型紫外仪于278 nm处测定PGE含量(以D值表示)。

    1.2.6 血浆皮质酮及促肾上腺皮质激素 (ACTH) 测定 大鼠16只随机分为对照组和给药组,分别 ig 给予生理盐水5 ml/kg,TPA 400 mg/kg,共3 d, 末次给药后1 h,以1%角叉菜胶 sc足跖致炎,5 h后麻醉取血,分别用皮质酮放射免疫测定盒及ACTH放免盒测定血浆中皮质酮及ACTH浓度。
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    1.3 统计学处理 实验结果以表示,数据用t检验法统计处理。

    2 结 果

    2.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 结果见表1,显示TPA 3个剂量皆能极显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀。

    表1 TPA对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

    Tab 1 Effects of TPA on swelling of mice

    ears caused by xylen () Group

    Dose(wB/mg.kg-1)
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    n

    Edema(m/mg)

    Control

    9

    9.53±2.99

    TPA

    100×2 d

    11

    4.65±2.80*

    200×2 d

    11

    4.50±3.29*
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    300×2 d

    11

    3.24±2.15*

    Indometacin

    20×1 d

    10

    6.44±4.35*

    *P<0.05 vs control group

    2.2 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性提高的影响 结果显示,空白对照组洗脱液中依文蓝浓度为 (5.11±1.37) μg/ml,TPA给药组为(3.72±1.21) μg/ml(P<0.05),阳性对照组为(1.91±0.71) μg/ml(P<0.01),表明TPA 300 mg/kg 能显著抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加。
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    2.3 对大鼠足趾角叉菜胶致肿的影响 结果表明(表2),TPA对正常大鼠角叉菜胶性足跖肿胀有明显的抑制作用,作用可持续4 h以上。

    表2 TPA对大鼠足趾角叉菜胶致肿的影响

    Tab 2 Effects of TPA on swelling of rats′ paws caused by carrageenin (n=8, ) Group

    Edema(V/ml)

    1 h

    2 h

    3 h

    4 h
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    Control

    0.371±0.129

    0.626±0.159

    0.629±0.156

    0.714±0.153

    Indometacin

    0.196±0.090**

    0.232±0.083**

    0.241±0.046**

    0.190±0.055**
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    TPA

    0.183±0.117**

    0.160±0.042**

    0.205±0.106**

    0.172±0.110**

    **P< 0.01 vs control group

    双侧摘除肾上腺后的大鼠足趾sc 1%角叉菜胶致炎后1,2,3,4 h,TPA组大鼠足趾肿胀度分别为(0.362±0.112),(0.779±0.132),(0.848±0.106),(0.750±0.110) ml,各时间点的TPA对角叉菜胶性肿胀无明显抑制作用。
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    2.4 对棉球肉芽肿增生的影响 8 d后测定肉芽组织质量,生理盐水组为 (1.25±0.34) g/kg,TPA组为 (0.93±0.24) g/kg(P<0.05),氢化可的松组为 (0.63±0.12) g/kg(P<0.01),表明TPA对肉芽肿增生有显著抑制作用。

    2.5 对足跖炎症组织释放PGE的影响 生理盐水组D为0.290±0.047,TPA 组为0.143±0.038 9(P<0.01),吲哚美辛组为0.187±0.037(P<0.01),表明TPA 400 mg/kg能极显著降低炎症组织中PGE的含量。

    2.6 对血浆皮质酮及ACTH浓度的影响 对照组大鼠血浆皮质酮及ACTH浓度分别为 (228.0±44.3) nmol/L和 (73.8±8.4) ng/L,TPA组则为 (289.3±40.7) nmol/L (P<0.05) 和 (55.4±13.6) ng/L(P<0.05)。表明TPA 400 mg/kg能显著升高血浆中皮质酮浓度,而使ACTH浓度明显降低。
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    3 讨 论

    TPA对多种致炎剂引起的急性毛细血管通透性增高、炎性渗出增加、组织水肿均有明显的抑制作用,对慢性肉芽组织增生也具有显著抑制作用,对去双侧肾上腺大鼠无明显的抗炎、抗肿胀作用,能使角叉菜胶炎症模型的Wistar大鼠血浆皮质酮水平明显上升、ACTH水平明显下降,揭示TPA具有确切的抗炎作用,它的抗炎作用依赖于垂体-肾上腺系统,它本身不具有糖皮质激素样作用,它对垂体-肾上腺系统的影响并不是作用于垂体水平,而是加强肾上腺功能,促进其分泌较高水平的糖皮质激素,血浆中较高水平的糖皮质激素负反馈抑制了垂体的功能,而使ACTH分泌、释放减少。

    前列腺素是一种重要的炎症介质,具有广泛的生理及病理作用,TPA能够极显著降低炎症组织中的PGE含量,揭示TPA抑制PGE的合成或释放是其抗炎的又一个重要环节。

    文章编号:0258-879X(1999)10-0758-03
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    参考文献

    1 江苏新医学院. 中药大辞典(上)[M].上海:上海科学技术出版社,1985. 1366

    2 李林普. 知母、夏枯草煎剂湿敷等治疗19例穿掘性头皮毛囊周围炎的报告[J]. 临床皮肤科杂志, 1985,14(5):275

    3 陈万生,乔传卓. 知母抗炎作用初探[J]. 药学情报通迅, 1993,11(3):14

    4 祝兰卿,廖锡麟,冯正康,等. 枸橼酸乙胺嗪的抗炎作用[J]. 中国药理学报, 1989, 10(1):78

    5 高 尔,李华洲,岳启安,等. 兔脑磷脂的抗炎与免疫调节作用[J]. 中国药理学通报, 1996, 12(2): 146

    (1999-01-25收稿,1999-07-20修回), http://www.100md.com


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