对70%冷乙醇固定单细胞悬液保存时间的观察
作者：陈兆珍
单位：陈兆珍(第三军医大学基础医学部中心实验室) 重庆，400038
关键词：细胞保存；乙醇；流式细胞仪
第三军医大学学报991032 Observation on preservation period of fixing single cell suspension in cold 70% ethanol
中图法分类号 R329.2+8 文献标识码：B
在用流式细胞仪对细胞进行周期分析时，为了防止细胞的自溶和破坏，通常要对样品进行固定。而使用最多也是最方便的固定液便是70%冷乙醇。但人们一般认为用此固定液固定的样品保存时间不宜过长，一般为1～2周[1]。我们对70%冷乙醇固定的样品进行了为期5个月的观察测定，固定5个月后和固定2 d的样品相比较，CV值及周期分布都无明显的变化，说明70%冷乙醇固定的样品至少可以保存5个月以上。
1 方法
将制备好的单细胞(BCaD-37人乳腺癌细胞)悬液的沉淀加0.05 ml PBS充分吹散。将此细胞悬液用吸管迅速加到事先准备好的70%冷乙醇中，放进4°C冰箱，保存备用。乙醇的体积视细胞的多少而定，一般5～10 ml为宜。
每次实验取固定样品若干，用PBS洗去固定液，加RNA酶37°C冰浴消化30 min，加碘化丙啶(PI)染色30 min后上机测定。流式细胞仪为美国BD公司生产的FACStarPlus。从固定后第2天开始，分别在2 d、1、2、3、4、5个月共测6次。
2 结果
前后进行的6次测试基本无变化，见图1。固定后2 d与固定后5个月比较，CV值和细胞周期分布均无明显变化，见表1。
图1 6次测试结果的直方图
从左至右分别为固定后2 d，1、2、3、4、5个月
表1 70%冷乙醇固定样品不同时间CV值及细胞周期分布
CV值(%)
G0+G1
S
G2+M
第2天
6.53
43.93
24.45
21.99
5个月
6.91
44.97
22.41
21.50
3 讨论
用70%冷乙醇固定的单细胞悬液进行流式细胞仪分析，至少可以保存5个月以上。而且此固定液既经济又方便。这样就为较长时间内保存大量样品提供了条件。由于样品量的限制，此实验没能继续做下去。能否可以保存更长的时间，这将有待日后进行更深入的探索。作者简介：陈兆珍，男，42岁，实验师
参考文献
1 左连富.流式细胞术样品制备技术.北京：华夏出版社，1991.44～45
(收稿：1999-03-15；修回：1999-07-28), http://www.100md.com
单位：陈兆珍(第三军医大学基础医学部中心实验室) 重庆，400038
关键词：细胞保存；乙醇；流式细胞仪
第三军医大学学报991032 Observation on preservation period of fixing single cell suspension in cold 70% ethanol
中图法分类号 R329.2+8 文献标识码：B
在用流式细胞仪对细胞进行周期分析时，为了防止细胞的自溶和破坏，通常要对样品进行固定。而使用最多也是最方便的固定液便是70%冷乙醇。但人们一般认为用此固定液固定的样品保存时间不宜过长，一般为1～2周[1]。我们对70%冷乙醇固定的样品进行了为期5个月的观察测定，固定5个月后和固定2 d的样品相比较，CV值及周期分布都无明显的变化，说明70%冷乙醇固定的样品至少可以保存5个月以上。
1 方法
将制备好的单细胞(BCaD-37人乳腺癌细胞)悬液的沉淀加0.05 ml PBS充分吹散。将此细胞悬液用吸管迅速加到事先准备好的70%冷乙醇中，放进4°C冰箱，保存备用。乙醇的体积视细胞的多少而定，一般5～10 ml为宜。
每次实验取固定样品若干，用PBS洗去固定液，加RNA酶37°C冰浴消化30 min，加碘化丙啶(PI)染色30 min后上机测定。流式细胞仪为美国BD公司生产的FACStarPlus。从固定后第2天开始，分别在2 d、1、2、3、4、5个月共测6次。
2 结果
前后进行的6次测试基本无变化，见图1。固定后2 d与固定后5个月比较，CV值和细胞周期分布均无明显变化，见表1。
图1 6次测试结果的直方图
从左至右分别为固定后2 d，1、2、3、4、5个月
表1 70%冷乙醇固定样品不同时间CV值及细胞周期分布
CV值(%)
G0+G1
S
G2+M
第2天
6.53
43.93
24.45
21.99
5个月
6.91
44.97
22.41
21.50
3 讨论
用70%冷乙醇固定的单细胞悬液进行流式细胞仪分析，至少可以保存5个月以上。而且此固定液既经济又方便。这样就为较长时间内保存大量样品提供了条件。由于样品量的限制，此实验没能继续做下去。能否可以保存更长的时间，这将有待日后进行更深入的探索。作者简介：陈兆珍，男，42岁，实验师
参考文献
1 左连富.流式细胞术样品制备技术.北京：华夏出版社，1991.44～45
(收稿：1999-03-15；修回：1999-07-28), http://www.100md.com