氧化低密度脂蛋白与一氧化氮的相互作用及对血小板功能的影响
作者：张慧英 钱志尧 许贻白 王贤军
单位：(浙江省湖州市中心医院，浙江湖州313000)
关键词：氧化低密度脂蛋白；一氧化氮；血小板聚集；动脉粥样硬化
现代康复991020
[摘要]目的：探讨氧化低密度脂蛋白(OXLDL)与一氧化氮(NO)的相互作用及对血小板聚集功能的影响。方法：检测48例动脉粥样硬化(AS)患者血浆OXLDL与血小板孵育后的血小板聚集率，及OXLDL与NO相互作用后的水平变化。同时与46例正常人作对照。结果：患者血浆OXLDL显著增加血小板聚集率(P<0.01)，OXLDL与NO相互作用后明显降低NO水平。血小板聚集的增加与OXLDL呈正相关(r=0.631P<0.01)，而与NO呈负相关(r=0.562P<0.01)。结论：OXLDL激活血小板，灭活NO，二者的平衡紊乱与AS的发生发展有关。
, http://www.100md.com
[中图分类号]R541.4[文献标识码]B
[文章编号]1007-5496(1999)10-1194-02
氧化低密度脂蛋白(OXLDL)与一氧化氮(NO)在动脉粥样硬化(AS)的发生发展中关系密切[1]。二者对血小板功能的不同影响，确定了它们的AS形成病理基础中的不同地位。近年来对AS患者NO及OXLDL水平变化的研究较多，它们之间的相互作用、对血小板聚集功能的影响，少见报道。本研究通过观察AS患者血浆OXLDL对血小板聚集的变化及与NO的相互作用，进一步探讨二者在AS中不同致病机制。
1 资料与方法
1.1 研究对象 对照组：系我院健康检查者46例，男28例，女18例，年龄48～78岁(59.82±5.56)岁，均系无心脑血管疾病及糖尿病、高血脂症者。AS组：选择符合1979年全国诊断标准的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者48例，男38例，女10例，年龄51～82岁，(61.87±12.75)岁。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 分离LDL 以密度梯度超速离心法分离LDL，以胆固醇(LDL-C)计量。LDL与血小板在37℃孵育20min后测定血小板功能[2]。LDL-C终浓度为1.0mg/ml。
1.2.2 测定体内OXLDL 取空腹晨间肘静脉血，分离血浆，用ELISA法行OXLDL测定[3]。试剂盒提供：上海荣盛生物试剂厂。
1.2.3 体外OXLDL制备 按照Michael等[4]CuSO4透析法，将分离得到的LDL体外制成氧化型LDL，低温贮备，与血小板孵育时终浓度为1.0mg/ml。
1.2.4 血小板聚集功能测定 采用TYXN-91智能血液凝集仪，空腹取正常人静脉血，3.28%枸椽酸钠抗凝，500r/min离心10min，上层富含血小板血浆再600r/min离心10min，获得压积血小板，生理盐水洗涤2次，配成血小板悬液，血小板浓度为2×108/ml，以2um的ADP为诱导剂，测定血小板聚集功能。然后以同一个体血小板分别与对照组或AS患者的LDL及体外氧化后的OXLDL37℃孵育20min，再测血小板聚集功能。
, http://www.100md.com
1.2.5 NO的测定 采用Griess法[5]，利用荼乙烯二胺分光光度测量NO2浓度，间接反映NO含量，分别测定LDL和OXLDL与血小板悬液孵育前后的NO浓度。
1.3 统计方法 所有结果均以均值±标准差(x±s)表示。各项检测指标间均数行t检验，并作相关分析。
2 结果
2.1 血浆OXLDL水平 对照组为(398.42±217.37)ug/L，AS组为(930.7±187.3)ug/L，明显高于对照组(P<0.01)。
2.2 LDL、OXLDL对血小板聚集的作用 对照组；加LDL前的最大聚集率为(53.81±11.30)%，加LDL后为(56.23±17.38)%，差异无显著性(P>0.05)。AS组：加LDL前的最大聚集率为(52.04±15.71)%，加LDL后为(65.98±45.38)%，有显著差异(P<0.01)。AS组中29例患者LDL经体外氧化前后血小板最大聚集率分别为53.65±27.71和70.38±17.92。加氧化修饰LDL的血小板聚集率比氧化前明显增高(P<0.01)。
, 百拇医药
2.3 LDL、OXLDL对NO的作用 对照组，加LDL前的血浆NO为(0.301±0.020)umol/ml，加LDL后为(0.290±0.012)umol/ml，差异不显著(P>0.05)。AS组：加LDL前的血浆NO为(0.331±0.017)umol/ml，加LDL后为(0.212±0.071)umol/ml有显著差异(P<0.01)，29例AS者LDL体外氧化前后的血浆NO为(0.331±0.017)umol/ml和(0.108±0.057)umol/ml，氧化修饰后的LDL明显降低血浆NO(P<0.01)。
2.4 血小板聚集改变和血浆OXLDL及NO含量关系 AS者LDL对血小板聚集的增强和血浆OXLDL值呈正相关(r=0.631 P<0.01)，和血浆NO含量呈负相关(r=-0.542 P<0.01)，而和血浆LDL值无相关性(r=0.217 P>0.05)。
3 讨论
, http://www.100md.com OXLDL是AS的危险因子，它增强血小板聚集，促进血栓形成，使动脉内膜受损，又有利于脂质侵入血管内膜及内膜下，导致粥样斑块形成。正常内皮细胞合成的NO是最强的血管松弛物质之一，能抑制血小板聚集及白细胞粘附，平滑肌细胞增殖，是一种抗AS物质。二者功能调节平衡紊乱，与AS的发生发展有关。
OXLDL促进血小板聚集是AS形成的途径之一。Linda等研究发现脂蛋白与血小板有特殊亲和力，提示血小板上有LDL受体。我们将LDL、OXLDL与血小板共同孵育，结果表明，AS患者LDL对血小板聚集有明显增强作用，这种血小板聚集的增强和血浆OXLDL水平呈明显正相关，而和血浆LDL水平无相关性。当LDL经体外氧化后，对血小板聚集的增强又比氧化前更加明显。提示，LDL对血小板的激活主要是通过OXLDL的作用。
OXLDL减少NO水平，抑制NO功能是其致AS的另一途径。OXLDL与NO之间存在密切的相互关系。OXLDL具有细胞毒作用，抑制一氧化氮合成酶，使NO合成减少，同时对NO有直接灭活作用。本文通过对OXLDL与NO的相互作用研究发现，OXLDL在促进血小板聚集的同时，血浆NO水平明显降低，两者呈负相关。Myers研究表明，OXLDL对NO功能的抑制作用，在孵育后1h内开始，并伴随OXLDL的孵育而持续存在。我们的研究与文献一致，提示OXLDL直接灭活NO，减弱NO抑制血小板聚集功能。使血小板聚集率增加，从而有利于血栓形成。
, http://www.100md.com
脂质的过氧化其对NO的灭活作用，是AS发生发展的病理基础之一，应用抗氧化剂抑制LDL的过氧化，或提供外源性NO等途径，降低血小板聚集功能，对防治AS具有重要意义。
[作者简介]张慧英(1955-)，女，副主任医师。
参考文献
[1] Steinberg D,Parthasarathy S,Carew TE,et al.Modification of low density lipoprotein that increase its atherogenicity[J].N Engl J Med,1989,320(14):915
[2] Aviram M,Brood JG.Platelet activvation by plasma lipopro tein[J].Pron Cardis,1987,30:61
, 百拇医药
[3]王华梁,陈思聪,张国之,等.双抗夹心法检测血浆氧化修饰低密度脂蛋白[J].上海医学检验杂志,1994,9:135
[4] Michael D,Richard A.In vitro cell injury by oxidizedlow den sity lipoprotein involves lipid hydroperoxide induced formation of alkoxyl,lipid and peroxyl radicals[J].J Clin Invest,1995,95:1866
[5] GreenL,Wagner D,Glogouski J,et al.Analysis of nitrate,nitvite and [15 N]nitrate in biological fluids[J].Anal Biochem,1982,126:131
[收稿日期]1999-04-05, 百拇医药
单位：(浙江省湖州市中心医院，浙江湖州313000)
关键词：氧化低密度脂蛋白；一氧化氮；血小板聚集；动脉粥样硬化
现代康复991020
[摘要]目的：探讨氧化低密度脂蛋白(OXLDL)与一氧化氮(NO)的相互作用及对血小板聚集功能的影响。方法：检测48例动脉粥样硬化(AS)患者血浆OXLDL与血小板孵育后的血小板聚集率，及OXLDL与NO相互作用后的水平变化。同时与46例正常人作对照。结果：患者血浆OXLDL显著增加血小板聚集率(P<0.01)，OXLDL与NO相互作用后明显降低NO水平。血小板聚集的增加与OXLDL呈正相关(r=0.631P<0.01)，而与NO呈负相关(r=0.562P<0.01)。结论：OXLDL激活血小板，灭活NO，二者的平衡紊乱与AS的发生发展有关。
, http://www.100md.com
[中图分类号]R541.4[文献标识码]B
[文章编号]1007-5496(1999)10-1194-02
氧化低密度脂蛋白(OXLDL)与一氧化氮(NO)在动脉粥样硬化(AS)的发生发展中关系密切[1]。二者对血小板功能的不同影响，确定了它们的AS形成病理基础中的不同地位。近年来对AS患者NO及OXLDL水平变化的研究较多，它们之间的相互作用、对血小板聚集功能的影响，少见报道。本研究通过观察AS患者血浆OXLDL对血小板聚集的变化及与NO的相互作用，进一步探讨二者在AS中不同致病机制。
1 资料与方法
1.1 研究对象 对照组：系我院健康检查者46例，男28例，女18例，年龄48～78岁(59.82±5.56)岁，均系无心脑血管疾病及糖尿病、高血脂症者。AS组：选择符合1979年全国诊断标准的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者48例，男38例，女10例，年龄51～82岁，(61.87±12.75)岁。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 分离LDL 以密度梯度超速离心法分离LDL，以胆固醇(LDL-C)计量。LDL与血小板在37℃孵育20min后测定血小板功能[2]。LDL-C终浓度为1.0mg/ml。
1.2.2 测定体内OXLDL 取空腹晨间肘静脉血，分离血浆，用ELISA法行OXLDL测定[3]。试剂盒提供：上海荣盛生物试剂厂。
1.2.3 体外OXLDL制备 按照Michael等[4]CuSO4透析法，将分离得到的LDL体外制成氧化型LDL，低温贮备，与血小板孵育时终浓度为1.0mg/ml。
1.2.4 血小板聚集功能测定 采用TYXN-91智能血液凝集仪，空腹取正常人静脉血，3.28%枸椽酸钠抗凝，500r/min离心10min，上层富含血小板血浆再600r/min离心10min，获得压积血小板，生理盐水洗涤2次，配成血小板悬液，血小板浓度为2×108/ml，以2um的ADP为诱导剂，测定血小板聚集功能。然后以同一个体血小板分别与对照组或AS患者的LDL及体外氧化后的OXLDL37℃孵育20min，再测血小板聚集功能。
, http://www.100md.com
1.2.5 NO的测定 采用Griess法[5]，利用荼乙烯二胺分光光度测量NO2浓度，间接反映NO含量，分别测定LDL和OXLDL与血小板悬液孵育前后的NO浓度。
1.3 统计方法 所有结果均以均值±标准差(x±s)表示。各项检测指标间均数行t检验，并作相关分析。
2 结果
2.1 血浆OXLDL水平 对照组为(398.42±217.37)ug/L，AS组为(930.7±187.3)ug/L，明显高于对照组(P<0.01)。
2.2 LDL、OXLDL对血小板聚集的作用 对照组；加LDL前的最大聚集率为(53.81±11.30)%，加LDL后为(56.23±17.38)%，差异无显著性(P>0.05)。AS组：加LDL前的最大聚集率为(52.04±15.71)%，加LDL后为(65.98±45.38)%，有显著差异(P<0.01)。AS组中29例患者LDL经体外氧化前后血小板最大聚集率分别为53.65±27.71和70.38±17.92。加氧化修饰LDL的血小板聚集率比氧化前明显增高(P<0.01)。
, 百拇医药
2.3 LDL、OXLDL对NO的作用 对照组，加LDL前的血浆NO为(0.301±0.020)umol/ml，加LDL后为(0.290±0.012)umol/ml，差异不显著(P>0.05)。AS组：加LDL前的血浆NO为(0.331±0.017)umol/ml，加LDL后为(0.212±0.071)umol/ml有显著差异(P<0.01)，29例AS者LDL体外氧化前后的血浆NO为(0.331±0.017)umol/ml和(0.108±0.057)umol/ml，氧化修饰后的LDL明显降低血浆NO(P<0.01)。
2.4 血小板聚集改变和血浆OXLDL及NO含量关系 AS者LDL对血小板聚集的增强和血浆OXLDL值呈正相关(r=0.631 P<0.01)，和血浆NO含量呈负相关(r=-0.542 P<0.01)，而和血浆LDL值无相关性(r=0.217 P>0.05)。
3 讨论
, http://www.100md.com OXLDL是AS的危险因子，它增强血小板聚集，促进血栓形成，使动脉内膜受损，又有利于脂质侵入血管内膜及内膜下，导致粥样斑块形成。正常内皮细胞合成的NO是最强的血管松弛物质之一，能抑制血小板聚集及白细胞粘附，平滑肌细胞增殖，是一种抗AS物质。二者功能调节平衡紊乱，与AS的发生发展有关。
OXLDL促进血小板聚集是AS形成的途径之一。Linda等研究发现脂蛋白与血小板有特殊亲和力，提示血小板上有LDL受体。我们将LDL、OXLDL与血小板共同孵育，结果表明，AS患者LDL对血小板聚集有明显增强作用，这种血小板聚集的增强和血浆OXLDL水平呈明显正相关，而和血浆LDL水平无相关性。当LDL经体外氧化后，对血小板聚集的增强又比氧化前更加明显。提示，LDL对血小板的激活主要是通过OXLDL的作用。
OXLDL减少NO水平，抑制NO功能是其致AS的另一途径。OXLDL与NO之间存在密切的相互关系。OXLDL具有细胞毒作用，抑制一氧化氮合成酶，使NO合成减少，同时对NO有直接灭活作用。本文通过对OXLDL与NO的相互作用研究发现，OXLDL在促进血小板聚集的同时，血浆NO水平明显降低，两者呈负相关。Myers研究表明，OXLDL对NO功能的抑制作用，在孵育后1h内开始，并伴随OXLDL的孵育而持续存在。我们的研究与文献一致，提示OXLDL直接灭活NO，减弱NO抑制血小板聚集功能。使血小板聚集率增加，从而有利于血栓形成。
, http://www.100md.com
脂质的过氧化其对NO的灭活作用，是AS发生发展的病理基础之一，应用抗氧化剂抑制LDL的过氧化，或提供外源性NO等途径，降低血小板聚集功能，对防治AS具有重要意义。
[作者简介]张慧英(1955-)，女，副主任医师。
参考文献
[1] Steinberg D,Parthasarathy S,Carew TE,et al.Modification of low density lipoprotein that increase its atherogenicity[J].N Engl J Med,1989,320(14):915
[2] Aviram M,Brood JG.Platelet activvation by plasma lipopro tein[J].Pron Cardis,1987,30:61
, 百拇医药
[3]王华梁,陈思聪,张国之,等.双抗夹心法检测血浆氧化修饰低密度脂蛋白[J].上海医学检验杂志,1994,9:135
[4] Michael D,Richard A.In vitro cell injury by oxidizedlow den sity lipoprotein involves lipid hydroperoxide induced formation of alkoxyl,lipid and peroxyl radicals[J].J Clin Invest,1995,95:1866
[5] GreenL,Wagner D,Glogouski J,et al.Analysis of nitrate,nitvite and [15 N]nitrate in biological fluids[J].Anal Biochem,1982,126:131
[收稿日期]1999-04-05, 百拇医药