食管癌中幽门螺杆菌感染与P53表达
作者：刘节 陈素兰 刘茜
单位：中国人民解放军第四军医大学唐都医院病理科 陕西省西安市 710038
关键词：食管肿瘤；螺杆菌，幽门；螺杆菌感染；P53蛋白
世界华人消化杂志991127 中国图书馆分类号 R 735.1
Subject headings esophageal neoplasms; Helicobacter pylori; Helicobacter infections; P53 protein
众多研究表明，幽门螺杆菌(Hp)与人类慢性胃炎、消化性溃疡和某些胃的恶性肿瘤发生密切相关[1-3]，但有关Hp在食管中感染情况以及其致病作用的报道甚少，又由于肿瘤的发生与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关[4-6]. 故我们应用免疫组化方法检测了食管病变组织Hp感染与P53蛋白表达情况，以探讨Hp感染与P53蛋白表达在食管癌发生的意义
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 随机选用我科1994年以来食管癌标本60例，不典型增生22例，慢性炎症18例以及正常食管粘膜16例. 兔抗Hp抗体和P53单克隆抗体DO_7以及LSAB试剂盒均来源于Dako公司.
1.2 方法 经采用LSAB免疫组化方法. 石蜡切片常规脱蜡，水化，柠檬酸(pH 6.0)加热修复抗原5min，而后步骤按说明进行. Hp抗体稀释度1∶10，P53抗体稀释度1∶100，最后DAB显色，苏木素复染，设阳性及阴性对照组. 经LSAB免疫组化染色后，P53阳性表达见于细胞的核内，呈棕黄色反应，Hp阳性表现为在细胞表面见黄色棒状或弯曲杆状菌体. 对所得结果采用两样本χ2比较的检验.
2 结果
2.1 Hp和p53在食管病中表达 经过LSAB染色后，正常粘膜中Hp感染率仅为19%，慢性炎症为56%. 随着病变的加重，在不典型增生和食管鳞癌中阳性率分别为73%和90%，鳞癌组和不典型增生组与慢性组比较有显著差异(P<0.05). 同样，P53蛋白在上述4组中的阳性表达率分别为0%，6%，41%及63%. 癌组和不典型增生组与慢性炎症组比较p53阳性表达有显著差异(P<0.05，表1). 经过LSAB染色后，Hp在60例Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ分级鳞癌中，阳性率分别为86%，89%和95%，三组间无明显区别(P>0.05)，P53蛋白在Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ分级鳞癌中阳性率为45%，67%和80%，三组间有显著差别(P<0.05，表2).
, 百拇医药
表1 食管病中Hp和P53表达 (n，%) 组织学类型
n
Hp阳性
P53阳性
正常食管粘膜
16
3(19)
0(0)
慢性炎症
18
10(56)
1(6)
, http://www.100md.com 不典型增生
22
16(73)
9(41)
食管鳞癌
60
54(90)
38(63)
表2 鳞癌60例中Hp和P53表达 (n，%) 鳞癌组织
n
Hp阳性
P53阳性
, http://www.100md.com Ⅰ级
22
19(86)
10(45)
Ⅱ级
18
16(89)
12(67)
Ⅲ级
20
19(95)
16(80)
合计
, http://www.100md.com
60
54(90)
38(63)
2.2 Hp感染与P53表达的相互关系 60例食管鳞癌中Hp感染54例，其中伴p53阳性者37例，明显高于Hp阴性伴p53阳性的表达(P<0.05，表3).
表3 食管癌中Hp与P53的关系
Hp
阳性
阴性
P53
阳性
37
, 百拇医药
1
阴性
17
5
3 讨论
Nomura et al[7]报道，15年前发现Hp感染者，胃癌的发生率较Hp阴性者高6倍. 由于胃十二指肠内容物反流作用，因此，食管Hp感染与食管癌变关系正日益受到人们重视. 研究表明，Hp经口腔进入消化道后，由于对胃粘膜上皮及粘液特有的适应性和亲和性，因而Hp在食管短暂停留后，更就易于在胃腔内粘附，定居和生长繁殖，再随着胃食管反流进入食管，通过非特异性粘附与食管上皮细胞直接接触，并在此定居，Hp持续感染将是食管癌发生的诱因之一. 在本研究中，16例正常食管粘膜Hp感染率为19%，慢性炎症组56%，不典型增生组73%，鳞癌组90%，鳞癌组与其他组比较有显著差别. 结果说明，Hp感染可使食管癌前病变发生率明显上升，使食管癌的发生机会增多.
, 百拇医药
p53基因是目前公认的抑癌基因，突变的p53基因已不再是抑癌基因，它发挥着癌基因的作用[4，5]，本组60例食管鳞癌中，P53蛋白阳性表达为63%，与正常粘膜组与慢性炎症组比较有显著差别. 22例不典型增生的P53蛋白阳性率为41%，与正常组与炎症组比较有显著差别. 说明p53基因的突变是食管癌变发生过程中的一个较早的事件. 另外，22例Ⅰ级鳞癌P53蛋白阳性率为45%，18例Ⅱ级鳞癌为67%，20例Ⅲ级鳞癌为80%，三组比较有显著差别. 提示P53蛋白的表达与癌细胞分化程度有明显关系，分化程度越差，P53蛋白表达也就越多，这也就是说p53基因的突变更易出现于较原始的肿瘤细胞中.
食管鳞癌Hp感染与P53蛋白表达的关系报道较少. 我们发现，食管癌Hp感染伴P53蛋白阳性表达明显高于食管癌Hp未感染伴P53蛋白阳性表达，说明Hp感染后，增加了食管粘膜的损伤程度和基因对各种损伤因子的敏感性.通讯作者 刘节
4 参考文献
, http://www.100md.com
1 NIH Consensud Conference. Helicobacter pylori in peptic ulcer disease. JAMA, 1994;272:65-69
2 Fuchs CS, Mayer RJ. Gastric carcinoma. New Eng J Med, 1995;333:32-39
3 Correa P. Helicobacter pylori and gastric carcinogensis. Am J Surg Pathol, 1995;19:S37-43
4 Parenti AR, Ruggen M, Frizzera E. P53 overexpression in the multistep process of esophageal carcinogenesis. Am J Sury Pathol, 1995;19:1418
, http://www.100md.com
5 Benett WP, Holstein MC, Metcalt RA. P53 mution and protein accumulation during multistage human esophageal carcinogenesis. Cancer Res, 1992;52:6092
6 Tam SW, Shay JW, Pagano M. Differential expression and cell cycle regulation of the clclin-dependent kinase-4 inhibitor p16. Cancer Res, 1994;54:5815
7 Nomura A, Stemmermann GN, Chyou PH. Helicobacter pylori infection and gastric carcinoma among Japanese A in Hawaili. N Engl J Med, 1991;325:1132
收稿日期 1999-05-30, http://www.100md.com
单位：中国人民解放军第四军医大学唐都医院病理科 陕西省西安市 710038
关键词：食管肿瘤；螺杆菌，幽门；螺杆菌感染；P53蛋白
世界华人消化杂志991127 中国图书馆分类号 R 735.1
Subject headings esophageal neoplasms; Helicobacter pylori; Helicobacter infections; P53 protein
众多研究表明，幽门螺杆菌(Hp)与人类慢性胃炎、消化性溃疡和某些胃的恶性肿瘤发生密切相关[1-3]，但有关Hp在食管中感染情况以及其致病作用的报道甚少，又由于肿瘤的发生与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关[4-6]. 故我们应用免疫组化方法检测了食管病变组织Hp感染与P53蛋白表达情况，以探讨Hp感染与P53蛋白表达在食管癌发生的意义
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 随机选用我科1994年以来食管癌标本60例，不典型增生22例，慢性炎症18例以及正常食管粘膜16例. 兔抗Hp抗体和P53单克隆抗体DO_7以及LSAB试剂盒均来源于Dako公司.
1.2 方法 经采用LSAB免疫组化方法. 石蜡切片常规脱蜡，水化，柠檬酸(pH 6.0)加热修复抗原5min，而后步骤按说明进行. Hp抗体稀释度1∶10，P53抗体稀释度1∶100，最后DAB显色，苏木素复染，设阳性及阴性对照组. 经LSAB免疫组化染色后，P53阳性表达见于细胞的核内，呈棕黄色反应，Hp阳性表现为在细胞表面见黄色棒状或弯曲杆状菌体. 对所得结果采用两样本χ2比较的检验.
2 结果
2.1 Hp和p53在食管病中表达 经过LSAB染色后，正常粘膜中Hp感染率仅为19%，慢性炎症为56%. 随着病变的加重，在不典型增生和食管鳞癌中阳性率分别为73%和90%，鳞癌组和不典型增生组与慢性组比较有显著差异(P<0.05). 同样，P53蛋白在上述4组中的阳性表达率分别为0%，6%，41%及63%. 癌组和不典型增生组与慢性炎症组比较p53阳性表达有显著差异(P<0.05，表1). 经过LSAB染色后，Hp在60例Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ分级鳞癌中，阳性率分别为86%，89%和95%，三组间无明显区别(P>0.05)，P53蛋白在Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ分级鳞癌中阳性率为45%，67%和80%，三组间有显著差别(P<0.05，表2).
, 百拇医药
表1 食管病中Hp和P53表达 (n，%) 组织学类型
n
Hp阳性
P53阳性
正常食管粘膜
16
3(19)
0(0)
慢性炎症
18
10(56)
1(6)
, http://www.100md.com 不典型增生
22
16(73)
9(41)
食管鳞癌
60
54(90)
38(63)
表2 鳞癌60例中Hp和P53表达 (n，%) 鳞癌组织
n
Hp阳性
P53阳性
, http://www.100md.com Ⅰ级
22
19(86)
10(45)
Ⅱ级
18
16(89)
12(67)
Ⅲ级
20
19(95)
16(80)
合计
, http://www.100md.com
60
54(90)
38(63)
2.2 Hp感染与P53表达的相互关系 60例食管鳞癌中Hp感染54例，其中伴p53阳性者37例，明显高于Hp阴性伴p53阳性的表达(P<0.05，表3).
表3 食管癌中Hp与P53的关系
Hp
阳性
阴性
P53
阳性
37
, 百拇医药
1
阴性
17
5
3 讨论
Nomura et al[7]报道，15年前发现Hp感染者，胃癌的发生率较Hp阴性者高6倍. 由于胃十二指肠内容物反流作用，因此，食管Hp感染与食管癌变关系正日益受到人们重视. 研究表明，Hp经口腔进入消化道后，由于对胃粘膜上皮及粘液特有的适应性和亲和性，因而Hp在食管短暂停留后，更就易于在胃腔内粘附，定居和生长繁殖，再随着胃食管反流进入食管，通过非特异性粘附与食管上皮细胞直接接触，并在此定居，Hp持续感染将是食管癌发生的诱因之一. 在本研究中，16例正常食管粘膜Hp感染率为19%，慢性炎症组56%，不典型增生组73%，鳞癌组90%，鳞癌组与其他组比较有显著差别. 结果说明，Hp感染可使食管癌前病变发生率明显上升，使食管癌的发生机会增多.
, 百拇医药
p53基因是目前公认的抑癌基因，突变的p53基因已不再是抑癌基因，它发挥着癌基因的作用[4，5]，本组60例食管鳞癌中，P53蛋白阳性表达为63%，与正常粘膜组与慢性炎症组比较有显著差别. 22例不典型增生的P53蛋白阳性率为41%，与正常组与炎症组比较有显著差别. 说明p53基因的突变是食管癌变发生过程中的一个较早的事件. 另外，22例Ⅰ级鳞癌P53蛋白阳性率为45%，18例Ⅱ级鳞癌为67%，20例Ⅲ级鳞癌为80%，三组比较有显著差别. 提示P53蛋白的表达与癌细胞分化程度有明显关系，分化程度越差，P53蛋白表达也就越多，这也就是说p53基因的突变更易出现于较原始的肿瘤细胞中.
食管鳞癌Hp感染与P53蛋白表达的关系报道较少. 我们发现，食管癌Hp感染伴P53蛋白阳性表达明显高于食管癌Hp未感染伴P53蛋白阳性表达，说明Hp感染后，增加了食管粘膜的损伤程度和基因对各种损伤因子的敏感性.通讯作者 刘节
4 参考文献
, http://www.100md.com
1 NIH Consensud Conference. Helicobacter pylori in peptic ulcer disease. JAMA, 1994;272:65-69
2 Fuchs CS, Mayer RJ. Gastric carcinoma. New Eng J Med, 1995;333:32-39
3 Correa P. Helicobacter pylori and gastric carcinogensis. Am J Surg Pathol, 1995;19:S37-43
4 Parenti AR, Ruggen M, Frizzera E. P53 overexpression in the multistep process of esophageal carcinogenesis. Am J Sury Pathol, 1995;19:1418
, http://www.100md.com
5 Benett WP, Holstein MC, Metcalt RA. P53 mution and protein accumulation during multistage human esophageal carcinogenesis. Cancer Res, 1992;52:6092
6 Tam SW, Shay JW, Pagano M. Differential expression and cell cycle regulation of the clclin-dependent kinase-4 inhibitor p16. Cancer Res, 1994;54:5815
7 Nomura A, Stemmermann GN, Chyou PH. Helicobacter pylori infection and gastric carcinoma among Japanese A in Hawaili. N Engl J Med, 1991;325:1132
收稿日期 1999-05-30, http://www.100md.com