618环氧树脂平板在免疫电镜包埋中的应用
作者：周萍
单位：第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心，重庆 400042
关键词：618环氧树脂；免疫电镜
中图法分类号 R446
中图法分类号 R446.8 文献标识码 B
Use of 618 EPON plate in embeding of immune electromicroscopy
免疫电镜超薄切片在样品的制备过程中过去常采用载玻片摊片，该法使硬化后摊在栽玻片上的组织与样品头不易剥离，成功率较低，我们在工作中摸索应用618环氧树脂包埋剂制备的薄片进行摊片，较好的解决了剥离困难，提高了制样的成功率，现将该方法简介如下。
1 操作步骤
①切片10～20 μm，用3%的戊二醛固定，如为包埋前染色则在染色后用冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗，转入3%戊二醛固定；②冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗；③1%OsO4后固定2 h；④50%，70%丙酮各脱水8～10 min；⑤饱和醋酸铀过夜；⑥90%丙酮脱水8～10 min；⑦100%丙酮脱水4次，每次8～10 min；⑧环氧丙烷置换10～15 min；⑨环氧丙烷∶618=1∶1，1 h 35°C～40°C；⑩纯包埋剂(不加DMP-30)，2 h 35°C～40°C；
包埋剂(加DMP-30)，3 h 35°C～40°C；
包埋：用已配好的618包埋剂倒在塑料包埋框背面，尽量让其平，薄。然后放入60°C～70°C烤箱中硬化。制成大小不等的618包埋剂平板备用。
将已制作好的618载玻片平板放平。把已在包埋剂(加DMP-30)中浸透好的厚片(10～20 ml)用小镊子夹起放在平板上(记住各厚片的编号)。用牙签把厚片辗平整。使其不卷屈，不皱折。然后用已废弃的包埋头后端放在辗平的原片上，放入烤箱过夜，升温至60°C～70°C硬化48 h。
2 体会
用618环氧树脂制备的平板代替过去用玻璃栽玻片来摊片，解决了包埋头子不易与玻璃栽片相分离的缺点。
用618环氧树脂制备的平板直接摊片，由于平板和废弃的包埋头子同质，因此能紧密牢固的结合，合制成的免疫电镜包埋块中的厚片平整，不卷屈，易于切出理想的片子来。
废弃的包埋头，节约材料，降低成本，具有经济实用的优点。
作者简介：周 萍，女，35岁，主管技师
参考文献
[1] 蔡文琴，王泊
主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都：四川科技出版社，P133-149.
[2]蔡文琴.胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用[J].解剖学杂志，1998，8(2)：19-21.
[3]孙 瑜，蔡文琴，李 巍，等.改良低温包埋胶体金免疫电镜技术[J].第三军医大学学报，1991，13(8)：417-418.
收稿日期：1999-06-15；修回日期：1999-09-20, 百拇医药
单位：第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心，重庆 400042
关键词：618环氧树脂；免疫电镜
中图法分类号 R446
中图法分类号 R446.8 文献标识码 B
Use of 618 EPON plate in embeding of immune electromicroscopy
免疫电镜超薄切片在样品的制备过程中过去常采用载玻片摊片，该法使硬化后摊在栽玻片上的组织与样品头不易剥离，成功率较低，我们在工作中摸索应用618环氧树脂包埋剂制备的薄片进行摊片，较好的解决了剥离困难，提高了制样的成功率，现将该方法简介如下。
1 操作步骤
①切片10～20 μm，用3%的戊二醛固定，如为包埋前染色则在染色后用冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗，转入3%戊二醛固定；②冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗；③1%OsO4后固定2 h；④50%，70%丙酮各脱水8～10 min；⑤饱和醋酸铀过夜；⑥90%丙酮脱水8～10 min；⑦100%丙酮脱水4次，每次8～10 min；⑧环氧丙烷置换10～15 min；⑨环氧丙烷∶618=1∶1，1 h 35°C～40°C；⑩纯包埋剂(不加DMP-30)，2 h 35°C～40°C；
包埋剂(加DMP-30)，3 h 35°C～40°C；包埋：用已配好的618包埋剂倒在塑料包埋框背面，尽量让其平，薄。然后放入60°C～70°C烤箱中硬化。制成大小不等的618包埋剂平板备用。将已制作好的618载玻片平板放平。把已在包埋剂(加DMP-30)中浸透好的厚片(10～20 ml)用小镊子夹起放在平板上(记住各厚片的编号)。用牙签把厚片辗平整。使其不卷屈，不皱折。然后用已废弃的包埋头后端放在辗平的原片上，放入烤箱过夜，升温至60°C～70°C硬化48 h。
2 体会
用618环氧树脂制备的平板代替过去用玻璃栽玻片来摊片，解决了包埋头子不易与玻璃栽片相分离的缺点。
用618环氧树脂制备的平板直接摊片，由于平板和废弃的包埋头子同质，因此能紧密牢固的结合，合制成的免疫电镜包埋块中的厚片平整，不卷屈，易于切出理想的片子来。
废弃的包埋头，节约材料，降低成本，具有经济实用的优点。
作者简介：周 萍，女，35岁，主管技师
参考文献
[1] 蔡文琴，王泊
主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都：四川科技出版社，P133-149.[2]蔡文琴.胶体金标记法在免疫细胞化学电镜的应用[J].解剖学杂志，1998，8(2)：19-21.
[3]孙 瑜，蔡文琴，李 巍，等.改良低温包埋胶体金免疫电镜技术[J].第三军医大学学报，1991，13(8)：417-418.
收稿日期：1999-06-15；修回日期：1999-09-20, 百拇医药