化学抑制法和电泳法检测LDH1结果比较
作者：刘泽军 何长生 魏明竟
单位：第三军医大学西南医院检验科(400038)
关键词：抑制，化学性；电泳；乳酸脱氢酶同工酶类
实用医学杂志991144 摘 要 目的：比较化学抑制法测定乳酸脱氢酶同工酶Ⅰ(LDH1)的商用试剂和常规电泳法的相关性。方法：用1，6-己二醇抑制后在CX-7自动生化分析仪上测定LDH1，同时用Paragon电泳仪电泳分离LDH各同工酶带，将两法的LDH1结果进行相关、回归和均数显著性检验。结果：化学抑制法测定结果大于电泳法的结果，两者差异有显著意义(P<0.05)，其原因是抑制剂对M亚基的抑制不完全所致。结论：在使用各种用化学抑制法测定LDH1的商用试剂前，应用常规电泳法检验抑制法对各带的抑制程度，以便适当校正结果。
血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶及血清乳酸脱氢酶同工酶Ⅰ(LDH1)/LDH比值对急性心肌梗塞有很高的诊断价值。抑制法测定LDH1较电泳法简单快速，但用商品试剂时，应注意结果的特异性。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验仪器 CX-7生化全自动分析仪(Beckman)，Paragon电泳系统(Beckman)，光密度计(Appraise Densitometer System,Beckman)。
1.2 方法 LDH总活力测定采用乳酸法试剂盒(上海科华-东菱公司)，LDH1化学抑制法采用TRACE LD-1试剂盒(上海长征公司)，两者都在自动生化分析仪上进行测定；LDH同工酶电泳法采用本室建立的涤纶膜测定法[1]。
1.3 统计 用Microsoft Excel软件的统计函数中的CORREL、LINEST和TTEST三个函数进行相关、回归和均数显著性检验。
2 结果
用化学抑制法和电泳法测定LDH1的相关系数为0.9702(n=20)，回归方程Y＝2.310 X-1，两法结果t检验，P<0.05，差异有非常显著意义。图1为抑制前后的LDH同工酶酶谱形状。
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3 讨论
电泳法和抑制法测定LDH1的结果虽然相关较好，但回归方程中斜率较大，k=2.310，即抑制法的结果几乎是电泳法的2.31倍，两法测定结果经t检验，P<0.05，差异有显著意义。从实验结果看，加入化学抑制剂后，对M亚基抑制得并不完全，只抑制了主要含M亚基的同工酶带M4和M3 H，而对含M亚基较少或相等的同工酶带M H3和M2 H2抑制不完全(见图1)。因此，化学抑制法所得结果并非完全是H4(LDH1)的活力，而是LDH1和抑制后残存的LDH2和LDH3的活力之和，因此其结果大于电泳法所得LDH1的结果，两者均值之间差异有显著意义(P<0.05)。虽然1，6-己二醇具有专一抑制LDH分子中M亚基的特性[2]，但抑制程度与抑制剂的浓度有关。本实验所用试剂盒的1，6-己二醇终浓度为524 mmol/L，但据文献报道，此浓度下只能完全抑制LDH3～LDH5的活性，仍然保留LDH1和部分LDH2活性[3]。而我们的实验结果是只能完全抑制LDH4和LDH5，而保留LDH1和部分LDH2和LDH3的活性。在使用抑制法测定LDH1时，应对抑制剂的不同浓度进行探讨，找出最适宜条件。在使用各种商用试剂前，应先用一些常规的方法如电泳法等检验所用试剂的抑制程度，以便适当校正测定结果，减少可能导致的错误结论。
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图1 加入抑制剂前后的LDH酶谱变化
左为抑制前，右为抑制后
4 参考文献
1 刘泽军，扬 新. 用涤纶膜支持体测定乳酸脱氢酶同工酶. 上海医学检验杂志，1998，13(2)：91～92.
2 Tanishima K,Hayashi I,Matsushima M,et al. Activity of lactate dehydrogenase isoenzymes LD1 and LD2 in serum as determined by using an inhibitor of the M-subunit. Clin Chem,1985,31(7):1175～1177.
3 夏 青，吴文俊，李 炯. 化学抑制法测定乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2. 上海医学检验杂志，1994，9(2)：75～76., http://www.100md.com
单位：第三军医大学西南医院检验科(400038)
关键词：抑制，化学性；电泳；乳酸脱氢酶同工酶类
实用医学杂志991144 摘 要 目的：比较化学抑制法测定乳酸脱氢酶同工酶Ⅰ(LDH1)的商用试剂和常规电泳法的相关性。方法：用1，6-己二醇抑制后在CX-7自动生化分析仪上测定LDH1，同时用Paragon电泳仪电泳分离LDH各同工酶带，将两法的LDH1结果进行相关、回归和均数显著性检验。结果：化学抑制法测定结果大于电泳法的结果，两者差异有显著意义(P<0.05)，其原因是抑制剂对M亚基的抑制不完全所致。结论：在使用各种用化学抑制法测定LDH1的商用试剂前，应用常规电泳法检验抑制法对各带的抑制程度，以便适当校正结果。
血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶及血清乳酸脱氢酶同工酶Ⅰ(LDH1)/LDH比值对急性心肌梗塞有很高的诊断价值。抑制法测定LDH1较电泳法简单快速，但用商品试剂时，应注意结果的特异性。
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1 材料与方法
1.1 实验仪器 CX-7生化全自动分析仪(Beckman)，Paragon电泳系统(Beckman)，光密度计(Appraise Densitometer System,Beckman)。
1.2 方法 LDH总活力测定采用乳酸法试剂盒(上海科华-东菱公司)，LDH1化学抑制法采用TRACE LD-1试剂盒(上海长征公司)，两者都在自动生化分析仪上进行测定；LDH同工酶电泳法采用本室建立的涤纶膜测定法[1]。
1.3 统计 用Microsoft Excel软件的统计函数中的CORREL、LINEST和TTEST三个函数进行相关、回归和均数显著性检验。
2 结果
用化学抑制法和电泳法测定LDH1的相关系数为0.9702(n=20)，回归方程Y＝2.310 X-1，两法结果t检验，P<0.05，差异有非常显著意义。图1为抑制前后的LDH同工酶酶谱形状。
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3 讨论
电泳法和抑制法测定LDH1的结果虽然相关较好，但回归方程中斜率较大，k=2.310，即抑制法的结果几乎是电泳法的2.31倍，两法测定结果经t检验，P<0.05，差异有显著意义。从实验结果看，加入化学抑制剂后，对M亚基抑制得并不完全，只抑制了主要含M亚基的同工酶带M4和M3 H，而对含M亚基较少或相等的同工酶带M H3和M2 H2抑制不完全(见图1)。因此，化学抑制法所得结果并非完全是H4(LDH1)的活力，而是LDH1和抑制后残存的LDH2和LDH3的活力之和，因此其结果大于电泳法所得LDH1的结果，两者均值之间差异有显著意义(P<0.05)。虽然1，6-己二醇具有专一抑制LDH分子中M亚基的特性[2]，但抑制程度与抑制剂的浓度有关。本实验所用试剂盒的1，6-己二醇终浓度为524 mmol/L，但据文献报道，此浓度下只能完全抑制LDH3～LDH5的活性，仍然保留LDH1和部分LDH2活性[3]。而我们的实验结果是只能完全抑制LDH4和LDH5，而保留LDH1和部分LDH2和LDH3的活性。在使用抑制法测定LDH1时，应对抑制剂的不同浓度进行探讨，找出最适宜条件。在使用各种商用试剂前，应先用一些常规的方法如电泳法等检验所用试剂的抑制程度，以便适当校正测定结果，减少可能导致的错误结论。
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图1 加入抑制剂前后的LDH酶谱变化
左为抑制前，右为抑制后
4 参考文献
1 刘泽军，扬 新. 用涤纶膜支持体测定乳酸脱氢酶同工酶. 上海医学检验杂志，1998，13(2)：91～92.
2 Tanishima K,Hayashi I,Matsushima M,et al. Activity of lactate dehydrogenase isoenzymes LD1 and LD2 in serum as determined by using an inhibitor of the M-subunit. Clin Chem,1985,31(7):1175～1177.
3 夏 青，吴文俊，李 炯. 化学抑制法测定乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2. 上海医学检验杂志，1994，9(2)：75～76., http://www.100md.com