人食管鳞状细胞癌组织中nm23和p53蛋白表达及意义
作者：谢德荣 李海刚 许怀麟 姚和瑞 陈岱佳 沈溪明
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院(510120)
关键词：食管肿瘤；癌，鳞状细胞；癌基因；基因，p53；基因表达
实用医学杂志991105 摘 要 目的：探讨食管鳞状细胞癌(ESC)组织中nm23、p53蛋白表达及其意义。方法：应用免疫组织化学方法检测63例ESC癌组织中nm23、p53蛋白表达。结果：nm23蛋白表达与淋巴结转移呈负相关，与病理分级、病理分期无关。p53蛋白表达与病理分级、病理分期及淋巴结转移无关。两蛋白表达不存在相关性。nm23阳性、p53阴性，生存期明显长于nm23阴性、p53阳性或其它组合者。结论：nm23低表达在ESC淋巴结转移中起重要作用；nm23、p53基因在ESC癌变与转移过程可能不相关；联合检测nm23和p53蛋白表达对临床判断预后有一定价值。
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nm23和p53基因表达与多种肿瘤的转移潜能和预后有关1～4]。本文应用免疫组织化学技术，探讨人食管鳞状细胞癌(ESC)nm23、p53基因表达与病理分级、病理分期、淋巴结转移及预后的关系。
1 对象与方法
1.1 对象 1984年1月～1996年2月我院手术切除ESC标本63例，男46例，女17例，年龄38～81(中位年龄53)岁；病理分级：高分化36例，中分化15例，低分化12例；病理分期[5]：早期5例，中期8例，晚期50例；淋巴结转移19例，无淋巴结转移44例；有随访资料(至1997年12月)39例；全部病例术前未接受化疗或放疗。
1.2 方法 标本福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色。抗nm23(nm301)抗体和S-P试剂盒为福州Maxim公司产品；抗p53抗体(DO-7)和LSAB试剂盒为Dako公司产品。操作规程参照试剂盒说明书。用已知的阳性组织切片作阳性对照，磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS)代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.3 结果判定 染色反应信号呈棕黄色颗粒。结果分为阴性(-)，弱阳性(+)，中度阳性(++)，强阳性(+++)四级，判断标准参照文献[4，6]。
1.4 统计学方法 相关分析采用Spearman等级分组资料相关分析；生存期的比较采用Kaplan-Meier法。检验水准a=0.05，所有统计学处理采用SPSS 6.0 for Windows完成。
2 结果
2.1 nm23、p53蛋白表达与病理分级、病理分期、淋巴结转移的关系 见表1，阳性表达见图1、2。
2.2 nm23、p53蛋白表达的相关关系 见表2。两者的相关系数rs=0.1316，P=0.2876。
2.3 nm23、p53蛋白表达与生存期的关系 见表3。
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表1 nm23、p53蛋白表达与病理分级、病理分期、淋巴结转移的关系(例) 病理
类型
nm23
p53
-
+
++
+++
rs
P值
-
+
, 百拇医药
++
+++
rs
P值
病理分级
-0.2444
0.0535
-0.0924
0.4983
高分化
8
14
10
, http://www.100md.com
4
12
10
8
6
中分化
6
6
1
2
4
1
4
6
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低分化
3
9
0
0
8
1
2
1
病理分期
-0.0281
0.8270
-0.1792
, http://www.100md.com 0.1599
早 期
1
3
1
0
0
1
2
2
中 期
1
5
2
, 百拇医药
0
3
1
3
1
晚 期
15
21
8
6
21
10
9
10
, http://www.100md.com
淋巴结转移
-0.3280
0.0087
-0.1618
0.2053
未转移组
7
23
9
5
13
11
11
, http://www.100md.com
9
已转移组
10
6
2
1
11
1
3
4
图1 nm23蛋白在ESC中阳性表达，66×
, 百拇医药
图2 p53蛋白在ESC中阳性表达，33×
表2 nm23、p53蛋白表达的相关关系(例) p53
nm23
-
+
++
+++
-
9
11
3
1
+
, 百拇医药
2
5
4
1
++
2
7
2
3
+++
4
6
2
1
, 百拇医药
表3 nm23、p53蛋白表达与生存期的关系(月) 分组
例
数
生存期
中位
生存期
统计
量
P值
nm23
3.00
0.0833
阳性组
, 百拇医药
27
6～84+
19
阴性组
12
3+～114+
12
p53
5.40
0.0201
阳性组
22
, 百拇医药
3～72
12
阴性组
17
3～114+
20
nm23和p53
8.59
0.0136
nm23(+)、p53(-)
11
7+～84+
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20
nm23(-)、p53(+)
6
3～51+
9
其它
22
3+～114+
12
3 讨论
nm23是抑制肿瘤转移基因[7]，它编码与二磷酸核苷激酶高度同源的蛋白质，参与细胞骨架微管蛋白的聚合，影响G蛋白介导的信号传导途径，从而对细胞的运动、生长发挥负调节作用[8]。研究表明[1～4]，nm23低表达与人乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、肝癌淋巴结转移和预后有关。
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本组资料表明，ESC nm23表达与淋巴结转移呈负相关(rs=-0.3280，P＝0.0087)，提示nm23低表达在ESC发生淋巴结转移过程中起重要的作用。淋巴结转移潜能高低可能与肿瘤细胞的分化及浸润程度等有关，但本组资料显示nm23表达水平与病理分级(P＝0.0535)、病理分期(P＝0.8270)无关，推测nm23基因低表达致淋巴结高转移潜能，不是通过影响肿瘤的病理分级、病理分期这一途径而实现的。
p53基因突变或失活在肿瘤演进过程中具有重要的作用。目前应用免疫组织化学技术均为检测突变型p53蛋白。本组资料显示p53蛋白与病理分级(P＝0.4983)、病理分期(P＝0.1599)、淋巴结转移(P＝0.2053)等无关，与文献报道[9]相似。
在大肠癌中，nm23低表达和p53过表达存在高度相关，p53基因对nm23基因存在负调控作用[2]。本实验提示ESC nm23与p53基因表达不存在相关性(P＝0.2876)，估计两者可能不存在相互调控作用。p53突变一般发生在细胞癌变过程，nm23基因失活主要发生在肿瘤转移过程，因而推测nm23、p53基因在ESC癌变与转移过程中可能不存在协同或拮抗作用。
, 百拇医药
本文结果表明，单纯nm23蛋白不影响预后，p53蛋白与预后有关，阴性组生存期长于阳性组。nm23阳性、p53阴性，预后最好，中位生存期达20个月；nm23阴性、p53阳性预后最差，中位生存期仅9个月；其它表达组合者中位生存期12个月，三组差别有统计学意义(P＝0.0136)，提示联合检测nm23和p53对临床判断预后有一定价值。由于两基因不存在相互调控作用，因而推测可能通过未明机制，共同影响患者的预后。
4 参考文献
1 Hennessy C,Henry JA,May FEB,et al. Expression of the antimetastaticgene nm23 in human breast cancer and association with good prognosis. J Natl Cancer Inst,1991,83:281.
2 刘 勇，李启明，路名芝，等. nm23-H1、p53、PCAN表达与大肠癌浸润转移的关系. 临床与实验病理学杂志，1997，13(1)：21.
, 百拇医药
3 Konishi N,Nakaoda S,Tsuzuki T,et al. Expression of nm23-H1 and nm23-H2 protiens in prostate carcinoma. Jpn J Cancer Res,1993,84:1050.
4 黄 蓓，武忠弼，阮幼冰. 人肝癌组织nm23的表达及其与转移的关系. 临床与实验病理学杂志，1997，13(1)：25.
5 刘彤华，李维华，主编. 诊断病理学. 北京：人民卫生出版社，1994. 55.
6 Karin N,DDS,Roger S,et al. p53 expression and proliferration in squamous cell carcinomas of the head and neck. Cancer ,1995,75:87.
, 百拇医药
7 Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al. Evidence for a novel gene asociated with low metastatic potention. J Natl Cancer Inst,1998,80:200.
8 Wallet V,Mutzel R,Troll H,et al. Diatyostelium nucleoside diphosphate
kinase highly homologous to nm23 and protein involved in mammalian tuor metastasis and arosophila development. J Natl Cancer Inst,1990,82:1199.
9 Hironobu S,Shukichi M,Yuji G,et al. Expression of p53 inhuman
esophageal carcinoma:an immunohistochemical study with correlation to proliferating cell nuclear antigen expression. Human Pathology,1992,23:1238., 百拇医药
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院(510120)
关键词：食管肿瘤；癌，鳞状细胞；癌基因；基因，p53；基因表达
实用医学杂志991105 摘 要 目的：探讨食管鳞状细胞癌(ESC)组织中nm23、p53蛋白表达及其意义。方法：应用免疫组织化学方法检测63例ESC癌组织中nm23、p53蛋白表达。结果：nm23蛋白表达与淋巴结转移呈负相关，与病理分级、病理分期无关。p53蛋白表达与病理分级、病理分期及淋巴结转移无关。两蛋白表达不存在相关性。nm23阳性、p53阴性，生存期明显长于nm23阴性、p53阳性或其它组合者。结论：nm23低表达在ESC淋巴结转移中起重要作用；nm23、p53基因在ESC癌变与转移过程可能不相关；联合检测nm23和p53蛋白表达对临床判断预后有一定价值。
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nm23和p53基因表达与多种肿瘤的转移潜能和预后有关1～4]。本文应用免疫组织化学技术，探讨人食管鳞状细胞癌(ESC)nm23、p53基因表达与病理分级、病理分期、淋巴结转移及预后的关系。
1 对象与方法
1.1 对象 1984年1月～1996年2月我院手术切除ESC标本63例，男46例，女17例，年龄38～81(中位年龄53)岁；病理分级：高分化36例，中分化15例，低分化12例；病理分期[5]：早期5例，中期8例，晚期50例；淋巴结转移19例，无淋巴结转移44例；有随访资料(至1997年12月)39例；全部病例术前未接受化疗或放疗。
1.2 方法 标本福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色。抗nm23(nm301)抗体和S-P试剂盒为福州Maxim公司产品；抗p53抗体(DO-7)和LSAB试剂盒为Dako公司产品。操作规程参照试剂盒说明书。用已知的阳性组织切片作阳性对照，磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS)代替一抗作阴性对照。
, 百拇医药
1.3 结果判定 染色反应信号呈棕黄色颗粒。结果分为阴性(-)，弱阳性(+)，中度阳性(++)，强阳性(+++)四级，判断标准参照文献[4，6]。
1.4 统计学方法 相关分析采用Spearman等级分组资料相关分析；生存期的比较采用Kaplan-Meier法。检验水准a=0.05，所有统计学处理采用SPSS 6.0 for Windows完成。
2 结果
2.1 nm23、p53蛋白表达与病理分级、病理分期、淋巴结转移的关系 见表1，阳性表达见图1、2。
2.2 nm23、p53蛋白表达的相关关系 见表2。两者的相关系数rs=0.1316，P=0.2876。
2.3 nm23、p53蛋白表达与生存期的关系 见表3。
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表1 nm23、p53蛋白表达与病理分级、病理分期、淋巴结转移的关系(例) 病理
类型
nm23
p53
-
+
++
+++
rs
P值
-
+
, 百拇医药
++
+++
rs
P值
病理分级
-0.2444
0.0535
-0.0924
0.4983
高分化
8
14
10
, http://www.100md.com
4
12
10
8
6
中分化
6
6
1
2
4
1
4
6
, http://www.100md.com
低分化
3
9
0
0
8
1
2
1
病理分期
-0.0281
0.8270
-0.1792
, http://www.100md.com 0.1599
早 期
1
3
1
0
0
1
2
2
中 期
1
5
2
, 百拇医药
0
3
1
3
1
晚 期
15
21
8
6
21
10
9
10
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淋巴结转移
-0.3280
0.0087
-0.1618
0.2053
未转移组
7
23
9
5
13
11
11
, http://www.100md.com
9
已转移组
10
6
2
1
11
1
3
4
图1 nm23蛋白在ESC中阳性表达，66×
, 百拇医药
图2 p53蛋白在ESC中阳性表达，33×
表2 nm23、p53蛋白表达的相关关系(例) p53
nm23
-
+
++
+++
-
9
11
3
1
+
, 百拇医药
2
5
4
1
++
2
7
2
3
+++
4
6
2
1
, 百拇医药
表3 nm23、p53蛋白表达与生存期的关系(月) 分组
例
数
生存期
中位
生存期
统计
量
P值
nm23
3.00
0.0833
阳性组
, 百拇医药
27
6～84+
19
阴性组
12
3+～114+
12
p53
5.40
0.0201
阳性组
22
, 百拇医药
3～72
12
阴性组
17
3～114+
20
nm23和p53
8.59
0.0136
nm23(+)、p53(-)
11
7+～84+
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20
nm23(-)、p53(+)
6
3～51+
9
其它
22
3+～114+
12
3 讨论
nm23是抑制肿瘤转移基因[7]，它编码与二磷酸核苷激酶高度同源的蛋白质，参与细胞骨架微管蛋白的聚合，影响G蛋白介导的信号传导途径，从而对细胞的运动、生长发挥负调节作用[8]。研究表明[1～4]，nm23低表达与人乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、肝癌淋巴结转移和预后有关。
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本组资料表明，ESC nm23表达与淋巴结转移呈负相关(rs=-0.3280，P＝0.0087)，提示nm23低表达在ESC发生淋巴结转移过程中起重要的作用。淋巴结转移潜能高低可能与肿瘤细胞的分化及浸润程度等有关，但本组资料显示nm23表达水平与病理分级(P＝0.0535)、病理分期(P＝0.8270)无关，推测nm23基因低表达致淋巴结高转移潜能，不是通过影响肿瘤的病理分级、病理分期这一途径而实现的。
p53基因突变或失活在肿瘤演进过程中具有重要的作用。目前应用免疫组织化学技术均为检测突变型p53蛋白。本组资料显示p53蛋白与病理分级(P＝0.4983)、病理分期(P＝0.1599)、淋巴结转移(P＝0.2053)等无关，与文献报道[9]相似。
在大肠癌中，nm23低表达和p53过表达存在高度相关，p53基因对nm23基因存在负调控作用[2]。本实验提示ESC nm23与p53基因表达不存在相关性(P＝0.2876)，估计两者可能不存在相互调控作用。p53突变一般发生在细胞癌变过程，nm23基因失活主要发生在肿瘤转移过程，因而推测nm23、p53基因在ESC癌变与转移过程中可能不存在协同或拮抗作用。
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本文结果表明，单纯nm23蛋白不影响预后，p53蛋白与预后有关，阴性组生存期长于阳性组。nm23阳性、p53阴性，预后最好，中位生存期达20个月；nm23阴性、p53阳性预后最差，中位生存期仅9个月；其它表达组合者中位生存期12个月，三组差别有统计学意义(P＝0.0136)，提示联合检测nm23和p53对临床判断预后有一定价值。由于两基因不存在相互调控作用，因而推测可能通过未明机制，共同影响患者的预后。
4 参考文献
1 Hennessy C,Henry JA,May FEB,et al. Expression of the antimetastaticgene nm23 in human breast cancer and association with good prognosis. J Natl Cancer Inst,1991,83:281.
2 刘 勇，李启明，路名芝，等. nm23-H1、p53、PCAN表达与大肠癌浸润转移的关系. 临床与实验病理学杂志，1997，13(1)：21.
, 百拇医药
3 Konishi N,Nakaoda S,Tsuzuki T,et al. Expression of nm23-H1 and nm23-H2 protiens in prostate carcinoma. Jpn J Cancer Res,1993,84:1050.
4 黄 蓓，武忠弼，阮幼冰. 人肝癌组织nm23的表达及其与转移的关系. 临床与实验病理学杂志，1997，13(1)：25.
5 刘彤华，李维华，主编. 诊断病理学. 北京：人民卫生出版社，1994. 55.
6 Karin N,DDS,Roger S,et al. p53 expression and proliferration in squamous cell carcinomas of the head and neck. Cancer ,1995,75:87.
, 百拇医药
7 Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al. Evidence for a novel gene asociated with low metastatic potention. J Natl Cancer Inst,1998,80:200.
8 Wallet V,Mutzel R,Troll H,et al. Diatyostelium nucleoside diphosphate
kinase highly homologous to nm23 and protein involved in mammalian tuor metastasis and arosophila development. J Natl Cancer Inst,1990,82:1199.
9 Hironobu S,Shukichi M,Yuji G,et al. Expression of p53 inhuman
esophageal carcinoma:an immunohistochemical study with correlation to proliferating cell nuclear antigen expression. Human Pathology,1992,23:1238., 百拇医药