白介素-1受体拮抗剂基因多态性与狼疮肾炎
作者：吴红赤 殷恒强 邸 波 解汝娟
单位：吴红赤 殷恒强 邸 波 解汝娟 哈尔滨医科大学第一临床医学院肾内科，150001
关键词：
中国急救医学991119 本研究对IL-1ra基因多态性在中国汉族正常人群与狼疮性肾炎(LN)病人的分布差异进行研究，阐明其临床表现及预后之间可能存在的联系。
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 LN组 LN患者68例，女49例，男19例，平均年龄38.2(16～60)岁。所有患者均符合1982年美国风湿病学会(ARA)修订的关于系统性红斑狼疮的诊断标准，并有肾损害的临床及实验室依据。在68例患者中有42例随访，随访初期所有患者肾功能正常(Scr<130 μmol/L)。根据随访期末的Scr水平将患者分为肾功能稳定组(Scr<130 μmol/L，n=26)，肾功能恶化组(Scr>130 μmol/L，n=16)。
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1.1.2 正常对照组 70名(男30名，女40名)，系健康献血员，平均年龄39.3(19～59)岁。
1.2 DNA提取 取肝素抗凝血2 ml，采用淋巴细胞分离液分离白细胞，加八十二烷基磺酸钠及蛋白酶K，37℃保温过夜，应用等体积酚、氯仿(1∶1)和氯仿抽提，加入无水乙醇沉淀DNA，真空冷冻干燥后将DNA溶于去离子水中4℃保存。
1.3 IL-1ra基因多态性分析 IL-1ra基因多态性表现为数目可变的串联重复(VNTK)。其重度序列长86 bp，在人类可有五种不同的重复组合等位基因，分别为代表4、2、5、3个拷贝数串联重复的IL-1RN*1、IL-1RN*2、IL-1RN*3、IL-1RN*4等位基因和6个重复体(IL-1RN*5)[1]。IL-1ra基因VNTR多态性PeR引物为：51CTCAGCAACACTCCTAT31，51TCCTGGTCTGCAGGTAA31，PcR反应体系50μl，94℃，1min；60℃，1min;72℃,2min;共35个循环。2%琼脂糖溴乙锭电泳，紫外灯下判断结果，摄影留取照片。
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1.4 统计学处理 计算出正常人群和LN患者IL-1ra基因型频率，然后经Hardy—Weinberg遗传平衡定律检验，表明各基因型已达遗传平衡，具有群体代表性，组间差异采用χ2检验。
2 结果
2.1 LN患者和正常人IL-1ra基因多态性的分布 在本研究中，正常人群出现4个等位基因，分别为IL-1RN*1、IL-1RN*2、IL-1RN*3、IL-1RN*4等位基因，未出现IL-1RN*5等位基因。在LN患者中，仅出现IL-1RN*1、IL-1RN*2两个等位基因，其中IL-1RN*1最多见，IL-1RN*2次之。正常对照组和LN组的男女之间IL-1ra基因型和IL-1RN*2等位基因携带率差异不显著。正常人群和LN患者IL-1ra基因型和IL-1RN*2等位基因携带率的分布差异不明显，见表1。
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表1 正常人群与LN病人IL-1RN等位基因频率分布 等位基因
正常人例数(%)
LN病人例数(%)
P值
IL-1RN*1
47(66.5)
49(72.4)
>0.05
IL-1RN*2
21(30.2)
19(27.6)
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>0.05
IL-1RN*3
1(1.7)
-
-
IL-1RN*4
1(1.6)
-
-
IL-1RN*5
- -
-
, 百拇医药
-
2.2 IL-1RN*2等位基因与LN患者临床特征的关系，见表2。表2 IL-1RN*2等位基因与LN病人临床特征的联系 临床特征
携带IL-1RN*2组
(n=19)
不携带IL-1RN*2组
(n=49)
P值
高血压(≥20/12kPa)
7
, 百拇医药 15
>0.05
光敏感
11
14
<0.05
血 尿(10个/HP)
17
27
<0.01
蛋白尿(>3g/24h)
7
8
, 百拇医药
>0.05
Sor(≥130μmol/L)
6
17
>0.05
抗ds-DNA抗体(+)
11
17
>0.05
携带IL-1RN*2等位基因组患者的光敏感(P<0.05)、血尿(P<0.01)，在高血压、蛋白尿、血清肌酐、抗ds-DNA抗体阳性率方面无统计学差异。
, http://www.100md.com 2.3 IL-1RN*2等位基因与LN患者预后的关系，见表3。表3 IL-1RN*2与LN病人肾功能演变的联系
n
IL-1RN*2携带
肾功能稳定组
26
5
肾功能恶化组
16
2
表3显示，肾功能稳定组与肾功能恶化组LN患者的IL-1RN*2等位基因携带率无统计学差异。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 IL-1ra基因多态性在LN患者中的分布
美国Blackmore 等人对白种人群的研究发现，LN患者IL-1RN*2等位基因频率明显升高，提示IL-1RN*2与LN密切相关[1]。本研究发现，IL-1ra不同等位基因在中国人群中的分布以IL-1RN*1最多见，IL-1RN*2次之，其它等位基因罕见，这种分布与英国白种人相似。我们的研究结果显示，LN病人与正常对照组比较，IL-1ra基因型和IL-1RN*2等位基因的携带率均无统计学差异。
3.2 IL-1ra基因多态性与LN患者临床特征的关系
, 百拇医药
本研究发现，携带IL-1RN*2等位基因的LN病人光敏感发生率明显高于非IL-1RN*2携带者。光敏感是LN患者常见表现，紫外光(UV)可触发LN发作或加重病情。UV刺激单核巨噬细胞释放其它重要炎症细胞因子如IL-6产生，从而加重局部炎症反应。有报导[2]不同个体培养的角质细胞产生细胞内IL-1ra数量不同，IL-1ra低者，细胞间粘附分子1水平高，更易发生光敏感。我们推测，携带IL-1RN*2等位基因的LN患者光敏感和LN活动性病变发生率高可能与血循环IL-1ra水平较低有关。
3.3 IL-1ra基因多态性与LN患者预后的关系
42例平均随访48.2个月的LN患者，治疗方案相似(以强的松、雷公藤和环磷酰胺为主)，结果IL-1RN*2等位基因的发生频率在肾功能稳定组与肾功能恶化组之间差异不显著，IL-1RN*2等位基因与LN患者预后的关系及对激素治疗的反应需长期随访进一步加一阐明。
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参考文献
[1]Blakemore AIF,Tarlow J,Cork MJ,et al .Interlevkinl receptor antagonist gene polymorphism as a disease severity factor in systemic lupus erythcmatosus.Arthritis Rheum ,1994,37:1380.
[2]Norris DA.Pathomechanism of photosensitive lupus erythermatosus .J Invest Dermatol ,1993,100(Suppl):58s.
收稿：1998-12-11
修回：1999-04-25, 百拇医药
单位：吴红赤 殷恒强 邸 波 解汝娟 哈尔滨医科大学第一临床医学院肾内科，150001
关键词：
中国急救医学991119 本研究对IL-1ra基因多态性在中国汉族正常人群与狼疮性肾炎(LN)病人的分布差异进行研究，阐明其临床表现及预后之间可能存在的联系。
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 LN组 LN患者68例，女49例，男19例，平均年龄38.2(16～60)岁。所有患者均符合1982年美国风湿病学会(ARA)修订的关于系统性红斑狼疮的诊断标准，并有肾损害的临床及实验室依据。在68例患者中有42例随访，随访初期所有患者肾功能正常(Scr<130 μmol/L)。根据随访期末的Scr水平将患者分为肾功能稳定组(Scr<130 μmol/L，n=26)，肾功能恶化组(Scr>130 μmol/L，n=16)。
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1.1.2 正常对照组 70名(男30名，女40名)，系健康献血员，平均年龄39.3(19～59)岁。
1.2 DNA提取 取肝素抗凝血2 ml，采用淋巴细胞分离液分离白细胞，加八十二烷基磺酸钠及蛋白酶K，37℃保温过夜，应用等体积酚、氯仿(1∶1)和氯仿抽提，加入无水乙醇沉淀DNA，真空冷冻干燥后将DNA溶于去离子水中4℃保存。
1.3 IL-1ra基因多态性分析 IL-1ra基因多态性表现为数目可变的串联重复(VNTK)。其重度序列长86 bp，在人类可有五种不同的重复组合等位基因，分别为代表4、2、5、3个拷贝数串联重复的IL-1RN*1、IL-1RN*2、IL-1RN*3、IL-1RN*4等位基因和6个重复体(IL-1RN*5)[1]。IL-1ra基因VNTR多态性PeR引物为：51CTCAGCAACACTCCTAT31，51TCCTGGTCTGCAGGTAA31，PcR反应体系50μl，94℃，1min；60℃，1min;72℃,2min;共35个循环。2%琼脂糖溴乙锭电泳，紫外灯下判断结果，摄影留取照片。
, http://www.100md.com
1.4 统计学处理 计算出正常人群和LN患者IL-1ra基因型频率，然后经Hardy—Weinberg遗传平衡定律检验，表明各基因型已达遗传平衡，具有群体代表性，组间差异采用χ2检验。
2 结果
2.1 LN患者和正常人IL-1ra基因多态性的分布 在本研究中，正常人群出现4个等位基因，分别为IL-1RN*1、IL-1RN*2、IL-1RN*3、IL-1RN*4等位基因，未出现IL-1RN*5等位基因。在LN患者中，仅出现IL-1RN*1、IL-1RN*2两个等位基因，其中IL-1RN*1最多见，IL-1RN*2次之。正常对照组和LN组的男女之间IL-1ra基因型和IL-1RN*2等位基因携带率差异不显著。正常人群和LN患者IL-1ra基因型和IL-1RN*2等位基因携带率的分布差异不明显，见表1。
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表1 正常人群与LN病人IL-1RN等位基因频率分布 等位基因
正常人例数(%)
LN病人例数(%)
P值
IL-1RN*1
47(66.5)
49(72.4)
>0.05
IL-1RN*2
21(30.2)
19(27.6)
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>0.05
IL-1RN*3
1(1.7)
-
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IL-1RN*4
1(1.6)
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IL-1RN*5
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2.2 IL-1RN*2等位基因与LN患者临床特征的关系，见表2。表2 IL-1RN*2等位基因与LN病人临床特征的联系 临床特征
携带IL-1RN*2组
(n=19)
不携带IL-1RN*2组
(n=49)
P值
高血压(≥20/12kPa)
7
, 百拇医药 15
>0.05
光敏感
11
14
<0.05
血 尿(10个/HP)
17
27
<0.01
蛋白尿(>3g/24h)
7
8
, 百拇医药
>0.05
Sor(≥130μmol/L)
6
17
>0.05
抗ds-DNA抗体(+)
11
17
>0.05
携带IL-1RN*2等位基因组患者的光敏感(P<0.05)、血尿(P<0.01)，在高血压、蛋白尿、血清肌酐、抗ds-DNA抗体阳性率方面无统计学差异。
, http://www.100md.com 2.3 IL-1RN*2等位基因与LN患者预后的关系，见表3。表3 IL-1RN*2与LN病人肾功能演变的联系
n
IL-1RN*2携带
肾功能稳定组
26
5
肾功能恶化组
16
2
表3显示，肾功能稳定组与肾功能恶化组LN患者的IL-1RN*2等位基因携带率无统计学差异。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 IL-1ra基因多态性在LN患者中的分布
美国Blackmore 等人对白种人群的研究发现，LN患者IL-1RN*2等位基因频率明显升高，提示IL-1RN*2与LN密切相关[1]。本研究发现，IL-1ra不同等位基因在中国人群中的分布以IL-1RN*1最多见，IL-1RN*2次之，其它等位基因罕见，这种分布与英国白种人相似。我们的研究结果显示，LN病人与正常对照组比较，IL-1ra基因型和IL-1RN*2等位基因的携带率均无统计学差异。
3.2 IL-1ra基因多态性与LN患者临床特征的关系
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本研究发现，携带IL-1RN*2等位基因的LN病人光敏感发生率明显高于非IL-1RN*2携带者。光敏感是LN患者常见表现，紫外光(UV)可触发LN发作或加重病情。UV刺激单核巨噬细胞释放其它重要炎症细胞因子如IL-6产生，从而加重局部炎症反应。有报导[2]不同个体培养的角质细胞产生细胞内IL-1ra数量不同，IL-1ra低者，细胞间粘附分子1水平高，更易发生光敏感。我们推测，携带IL-1RN*2等位基因的LN患者光敏感和LN活动性病变发生率高可能与血循环IL-1ra水平较低有关。
3.3 IL-1ra基因多态性与LN患者预后的关系
42例平均随访48.2个月的LN患者，治疗方案相似(以强的松、雷公藤和环磷酰胺为主)，结果IL-1RN*2等位基因的发生频率在肾功能稳定组与肾功能恶化组之间差异不显著，IL-1RN*2等位基因与LN患者预后的关系及对激素治疗的反应需长期随访进一步加一阐明。
, http://www.100md.com
参考文献
[1]Blakemore AIF,Tarlow J,Cork MJ,et al .Interlevkinl receptor antagonist gene polymorphism as a disease severity factor in systemic lupus erythcmatosus.Arthritis Rheum ,1994,37:1380.
[2]Norris DA.Pathomechanism of photosensitive lupus erythermatosus .J Invest Dermatol ,1993,100(Suppl):58s.
收稿：1998-12-11
修回：1999-04-25, 百拇医药