中药蒲公英的质量标准研究
作者：凌云 范国强 肖樾 郑俊华
单位：(凌云)海军总医院药剂科(北京 100037)；(范国强)北京市中药科学研究所；(肖樾 郑俊华)北京医产大学药学院
关键词：蒲公英；HPLC；咖啡酸；绿原酸；质量标准
中草药991206摘 要 用HPLC法测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量。采用HP Hypersil C18 色谱柱，200 mm×2.1 mm，5 μm，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH=4.2) 23∶77，检测波长：323 nm，柱温：40 ℃，流速：1.0 mL/min。该法咖啡酸平均回收率99.80%，RSD 2.14%；绿原酸平均回收率99.54%，RSD 2.69%。本法稳定可靠，为药典建立蒲公英药材的质量标准提供了依据。
Studies on Quality Standard of Dandelions (Taraxacum Weber)
, http://www.100md.com
Ling Yun Fan Guoqiang Xiao Yue et al.
(Department of Pharmacy, Navy General Hospital, Beijing 100037)
Abstract The establishment of a quality standard by HPLC for caffeic acid and chlorogenic acid in dandelions, Taraxacum Weber, was reported. The sample was extracted with methanol under ultrasonic management for 30 min. Chromatographic conditions: YMS-ODS C18 column, 200 mm×2.1 mm, 5 μm, a mobile phase consisted of methanol and potassium phosphate (23∶77, pH 4.2); a flow rate of 1.0 mL/min; a detecting wavelength at 323 nm and the column temperature at 40℃. The mean recovery rate of caffeic acid was 99.80%, RSD 2.14%. The mean recovery rate of chlorogenic acid was 99.54%, RSD 2.69%. The method was very stable, accurate, and can be used as a quality standard for dandelions.
, 百拇医药
Key words Taraxacum Weber HPLC caffeic acid chlorogenic acid
蒲公英为常用清热解毒的中药，药理实验表明蒲公英具有广谱抗菌作用，临床用于各种急慢性感染。中华人民共和国药典(1995年版)规定：本品为菊科植物蒲公英 Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、碱地蒲公英 T.sinicum Kitag或同属数种植物的干燥全草。但未详细说明究竟有哪几种植物可作为蒲公英入药[1]。原植物采集和商品调查发现，在国内的不同地区主要有蒲公英属植物17种作为蒲公英入药。它们是否具有同等的临床功效目前尚不清楚，中华人民共和国药典亦无蒲公英药材的质量标准。
我们对蒲公英的化学成分研究，从中分得咖啡酸和绿原酸[2]。咖啡酸和绿原酸具有广谱抗菌作用[3]，测定蒲公英中其含量可作为评价蒲公英质量的依据。我们建立了HPLC法测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量，为药典建立蒲公英药材的质理标准提供了依据。
, 百拇医药
1 仪器和试药
1.1 仪器：美国HP1090M型高效液相色谱仪，自动进样器，二阶阵列检测器，300系列微处理机；CX-250型超声波清洗机。
1.2 试药：常用纯种蒲公英品种均由作者从野外采集并鉴定，蒲公英商品药材各地购买，经作者鉴定通常是常用蒲公英1～4种植物的混合物，标本存放于北京医科大学药学院生药学教研室标本室。咖啡酸和绿原酸对照品均由中国药品生物制品检定所提供。
甲醇为色谱纯，磷酸和磷酸二氢钠为分析纯，水为重蒸去离子水。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：Hypersil C18柱，200 mm×2.1 mm，5 μm，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH=4.2) (23∶77)，检测波长：323 nm，柱温：40℃，流速：1.0 mL/nmin。
, 百拇医药
在此色谱条件下咖啡酸的tR=17.60 min，绿原酸的tR=12.01 min。
2.2 标准曲线：标准溶液的配制：精密称取咖啡酸对照品1.5 mg于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液备用。
精密吸取咖啡酸对照品溶液2.5，5，7.5，10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以咖啡酸的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得一接近通过原点的直线，其回归方程为 Y=8503.72X-5.732，r=0.9999，具有良好的线性关系。
精密称取绿原酸对照品1.0 mg于2 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品备用。精密吸取绿原酸对照品溶液1，2，3，4，5 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以绿原酸的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得一接近通过原点的直线，其回归方程为Y=3 817.233X-6.261，r=0.9999，亦具有良好的线性关系。
, http://www.100md.com
2.3 回收率试验和精密度：采用加样回收法，精密称取已知含量的蒲公英样品适量，添加一定量的咖啡酸和绿原酸对照品，按“样品含量测定”项下的方法进行处理测定，咖啡酸平均回收率为98.80%，RSD=2.14%(n=4)；绿原酸为99.54%，RSD=2.69%(n=4)。实验结果表明本法回收率好，方法可行。
精密称取样品5份，按“样品含量测定”项下的方法进行处理测定，考察方法的精密度，咖啡酸为RSD=1.88%，绿原酸为RSD=0.723%。
2.4 样品含量测定：蒲公英样品60 ℃干燥后粉碎成细粉，过100目筛。取生药粉末0.5 g，精密称定，置10 mL具塞试管中，精密加入含5%甲酸的甲醇溶液5 mL，超声提取30 min，用脂溶性微孔滤膜过滤，取5 μL进样。在上述色谱条件下测定峰面积，代入回归方程计算样品中咖啡酸、绿原酸的含量，结果见表1，2。
表1 国内蒲公英常用17个品种咖啡酸和绿原酸的含量(n=3) 序号
, http://www.100md.com
植物名称
学名
咖啡酸含量
(mg/g)
绿原酸含量
(mg/g)
1
蒙古蒲公英
T.mongolicum
0.345
9.129
2
碱地蒲公英
, 百拇医药
T.sinicum
0.410
6.363
3
东北蒲公英
T.ohwianum
0.197
4.400
4
白缘蒲公英
T.platypecidum
0.402
, http://www.100md.com 37.819
5
反苞蒲公英
T.gryposon
0.229
4.180
6
兴安蒲公英
T.falcilobum
0.559
2.510
7
亚洲蒲公英
, http://www.100md.com
T.asiaticum
0.137
10.328
8
芥叶蒲公英
T.brassicacfolium
0.253
6.609
9
川甘蒲公英
T.lugubre
0.279
, 百拇医药
8.106
10
台湾蒲公英
T.formosanum
0.126
2.745
11
多裂蒲公英
T.dissectum
0.145
6.732
12
药用薄公英
, 百拇医药
T.officinale
0.392
2.911
13
红梗蒲公英
T.erythropodium
微量
8.228
14
白花蒲公英
T.leucanthum
0.201
, 百拇医药
7.060
15
白葶蒲公英
T.eriopodum
0.095
0.679
16
西藏蒲公英
T.tibetanum
0.350
14.180
17
大头蒲公英
, http://www.100md.com
T.calanthodium
微量
0.363
表2 国内蒲公英12种商品药材中咖啡酸
和绿原酸的含量(n=3) 序号
采购地点
咖啡酸含量
(mg/g)
绿原酸含量
(mg/g)
1
江苏常熟
, 百拇医药
0.0894
1.655
2
辽宁凤城
0.1498
1.441
3
陕西宝鸡
微量
1.987
4
内蒙巴盟
0.224
, 百拇医药
2.549
5
昆明
0.1545
1.829
6
广州
0.4648
2.937
7
河北安国
0.142
5.337
, 百拇医药
8
成都
0.0996
0.839
9
哈尔滨
0.2898
4.953
10
西藏昌都
0.2460
8.668
11
, 百拇医药
银川
微量
3.766
12
四川甘孜
0.3723
9.039
3 小结与讨论
3.1 蒲公英为常用清热解毒的中药，对应西医的药理作用就是具有广谱抗菌活性[4]。咖啡酸和绿原酸具有广谱抗菌作用，因此选择测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量作为评价蒲公英质量的依据。
3.2 作者选定含5%甲酸的甲醇溶液作为溶剂超声提取，因为咖啡酸和绿原酸往往以游离和盐的形式存在于生物体内，加酸提取更完全。在流动相的选择中，经过反复摸索，选择酸性流动相，因咖啡酸和绿原酸均是有机酸，酸性可抑制其电离，使峰形稳定，分离度好。
, http://www.100md.com
3.3 国内蒲公英常用17个品种和薄公英12种商品药材中咖啡酸和绿原酸的含量差别很大，含量低的蒲公英品种是否作为药用，值得进一步探讨。药典应尽快建立蒲公英药材的质量标准，规定含量下限，以保证蒲公英临床用药的有效性和合理性。
3.4 我们首次成功地应用HPLC同时测定蒲公英中的有效成分咖啡酸和绿原酸的含量，分离良好，快速、准确、重现性好，可在30 min内完成测定，为药典建立蒲公英药材的质量标准提供了依据。
参考文献
1 中华人民共和国药典.一部.1995：314
2 凌云，等.中国药学杂志，1997，32(10)：384
3 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册.北京：人民卫生出版社，1986：121
4 李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：286
收稿日期：1999-08-17, 百拇医药
单位：(凌云)海军总医院药剂科(北京 100037)；(范国强)北京市中药科学研究所；(肖樾 郑俊华)北京医产大学药学院
关键词：蒲公英；HPLC；咖啡酸；绿原酸；质量标准
中草药991206摘 要 用HPLC法测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量。采用HP Hypersil C18 色谱柱，200 mm×2.1 mm，5 μm，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH=4.2) 23∶77，检测波长：323 nm，柱温：40 ℃，流速：1.0 mL/min。该法咖啡酸平均回收率99.80%，RSD 2.14%；绿原酸平均回收率99.54%，RSD 2.69%。本法稳定可靠，为药典建立蒲公英药材的质量标准提供了依据。
Studies on Quality Standard of Dandelions (Taraxacum Weber)
, http://www.100md.com
Ling Yun Fan Guoqiang Xiao Yue et al.
(Department of Pharmacy, Navy General Hospital, Beijing 100037)
Abstract The establishment of a quality standard by HPLC for caffeic acid and chlorogenic acid in dandelions, Taraxacum Weber, was reported. The sample was extracted with methanol under ultrasonic management for 30 min. Chromatographic conditions: YMS-ODS C18 column, 200 mm×2.1 mm, 5 μm, a mobile phase consisted of methanol and potassium phosphate (23∶77, pH 4.2); a flow rate of 1.0 mL/min; a detecting wavelength at 323 nm and the column temperature at 40℃. The mean recovery rate of caffeic acid was 99.80%, RSD 2.14%. The mean recovery rate of chlorogenic acid was 99.54%, RSD 2.69%. The method was very stable, accurate, and can be used as a quality standard for dandelions.
, 百拇医药
Key words Taraxacum Weber HPLC caffeic acid chlorogenic acid
蒲公英为常用清热解毒的中药，药理实验表明蒲公英具有广谱抗菌作用，临床用于各种急慢性感染。中华人民共和国药典(1995年版)规定：本品为菊科植物蒲公英 Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、碱地蒲公英 T.sinicum Kitag或同属数种植物的干燥全草。但未详细说明究竟有哪几种植物可作为蒲公英入药[1]。原植物采集和商品调查发现，在国内的不同地区主要有蒲公英属植物17种作为蒲公英入药。它们是否具有同等的临床功效目前尚不清楚，中华人民共和国药典亦无蒲公英药材的质量标准。
我们对蒲公英的化学成分研究，从中分得咖啡酸和绿原酸[2]。咖啡酸和绿原酸具有广谱抗菌作用[3]，测定蒲公英中其含量可作为评价蒲公英质量的依据。我们建立了HPLC法测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量，为药典建立蒲公英药材的质理标准提供了依据。
, 百拇医药
1 仪器和试药
1.1 仪器：美国HP1090M型高效液相色谱仪，自动进样器，二阶阵列检测器，300系列微处理机；CX-250型超声波清洗机。
1.2 试药：常用纯种蒲公英品种均由作者从野外采集并鉴定，蒲公英商品药材各地购买，经作者鉴定通常是常用蒲公英1～4种植物的混合物，标本存放于北京医科大学药学院生药学教研室标本室。咖啡酸和绿原酸对照品均由中国药品生物制品检定所提供。
甲醇为色谱纯，磷酸和磷酸二氢钠为分析纯，水为重蒸去离子水。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：Hypersil C18柱，200 mm×2.1 mm，5 μm，流动相：甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH=4.2) (23∶77)，检测波长：323 nm，柱温：40℃，流速：1.0 mL/nmin。
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在此色谱条件下咖啡酸的tR=17.60 min，绿原酸的tR=12.01 min。
2.2 标准曲线：标准溶液的配制：精密称取咖啡酸对照品1.5 mg于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液备用。
精密吸取咖啡酸对照品溶液2.5，5，7.5，10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以咖啡酸的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得一接近通过原点的直线，其回归方程为 Y=8503.72X-5.732，r=0.9999，具有良好的线性关系。
精密称取绿原酸对照品1.0 mg于2 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品备用。精密吸取绿原酸对照品溶液1，2，3，4，5 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以绿原酸的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得一接近通过原点的直线，其回归方程为Y=3 817.233X-6.261，r=0.9999，亦具有良好的线性关系。
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2.3 回收率试验和精密度：采用加样回收法，精密称取已知含量的蒲公英样品适量，添加一定量的咖啡酸和绿原酸对照品，按“样品含量测定”项下的方法进行处理测定，咖啡酸平均回收率为98.80%，RSD=2.14%(n=4)；绿原酸为99.54%，RSD=2.69%(n=4)。实验结果表明本法回收率好，方法可行。
精密称取样品5份，按“样品含量测定”项下的方法进行处理测定，考察方法的精密度，咖啡酸为RSD=1.88%，绿原酸为RSD=0.723%。
2.4 样品含量测定：蒲公英样品60 ℃干燥后粉碎成细粉，过100目筛。取生药粉末0.5 g，精密称定，置10 mL具塞试管中，精密加入含5%甲酸的甲醇溶液5 mL，超声提取30 min，用脂溶性微孔滤膜过滤，取5 μL进样。在上述色谱条件下测定峰面积，代入回归方程计算样品中咖啡酸、绿原酸的含量，结果见表1，2。
表1 国内蒲公英常用17个品种咖啡酸和绿原酸的含量(n=3) 序号
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植物名称
学名
咖啡酸含量
(mg/g)
绿原酸含量
(mg/g)
1
蒙古蒲公英
T.mongolicum
0.345
9.129
2
碱地蒲公英
, 百拇医药
T.sinicum
0.410
6.363
3
东北蒲公英
T.ohwianum
0.197
4.400
4
白缘蒲公英
T.platypecidum
0.402
, http://www.100md.com 37.819
5
反苞蒲公英
T.gryposon
0.229
4.180
6
兴安蒲公英
T.falcilobum
0.559
2.510
7
亚洲蒲公英
, http://www.100md.com
T.asiaticum
0.137
10.328
8
芥叶蒲公英
T.brassicacfolium
0.253
6.609
9
川甘蒲公英
T.lugubre
0.279
, 百拇医药
8.106
10
台湾蒲公英
T.formosanum
0.126
2.745
11
多裂蒲公英
T.dissectum
0.145
6.732
12
药用薄公英
, 百拇医药
T.officinale
0.392
2.911
13
红梗蒲公英
T.erythropodium
微量
8.228
14
白花蒲公英
T.leucanthum
0.201
, 百拇医药
7.060
15
白葶蒲公英
T.eriopodum
0.095
0.679
16
西藏蒲公英
T.tibetanum
0.350
14.180
17
大头蒲公英
, http://www.100md.com
T.calanthodium
微量
0.363
表2 国内蒲公英12种商品药材中咖啡酸
和绿原酸的含量(n=3) 序号
采购地点
咖啡酸含量
(mg/g)
绿原酸含量
(mg/g)
1
江苏常熟
, 百拇医药
0.0894
1.655
2
辽宁凤城
0.1498
1.441
3
陕西宝鸡
微量
1.987
4
内蒙巴盟
0.224
, 百拇医药
2.549
5
昆明
0.1545
1.829
6
广州
0.4648
2.937
7
河北安国
0.142
5.337
, 百拇医药
8
成都
0.0996
0.839
9
哈尔滨
0.2898
4.953
10
西藏昌都
0.2460
8.668
11
, 百拇医药
银川
微量
3.766
12
四川甘孜
0.3723
9.039
3 小结与讨论
3.1 蒲公英为常用清热解毒的中药，对应西医的药理作用就是具有广谱抗菌活性[4]。咖啡酸和绿原酸具有广谱抗菌作用，因此选择测定蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含量作为评价蒲公英质量的依据。
3.2 作者选定含5%甲酸的甲醇溶液作为溶剂超声提取，因为咖啡酸和绿原酸往往以游离和盐的形式存在于生物体内，加酸提取更完全。在流动相的选择中，经过反复摸索，选择酸性流动相，因咖啡酸和绿原酸均是有机酸，酸性可抑制其电离，使峰形稳定，分离度好。
, http://www.100md.com
3.3 国内蒲公英常用17个品种和薄公英12种商品药材中咖啡酸和绿原酸的含量差别很大，含量低的蒲公英品种是否作为药用，值得进一步探讨。药典应尽快建立蒲公英药材的质量标准，规定含量下限，以保证蒲公英临床用药的有效性和合理性。
3.4 我们首次成功地应用HPLC同时测定蒲公英中的有效成分咖啡酸和绿原酸的含量，分离良好，快速、准确、重现性好，可在30 min内完成测定，为药典建立蒲公英药材的质量标准提供了依据。
参考文献
1 中华人民共和国药典.一部.1995：314
2 凌云，等.中国药学杂志，1997，32(10)：384
3 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册.北京：人民卫生出版社，1986：121
4 李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：286
收稿日期：1999-08-17, 百拇医药