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编号:10231767
白头翁体内抗肿瘤作用的实验研究
http://www.100md.com 《中草药》 1999年第12期
     作者:蔡鹰 陆瑜 梁秉文 余国祥 谢瑛 张能方 亢寿海

    单位:(蔡鹰 陆瑜 梁秉文 余国祥 谢瑛)解放军第四五四医院(南京 210002);(张能方 亢寿海)江苏省肿瘤医院

    关键词:白头翁;抗肿瘤作用;胸腺指数;脾指数

    中草药991221 摘 要 以荷S180瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型,研究了白头翁注射液(PWAE)的体内抗肿瘤作用。PWAE有明显的抗体内移植瘤和延长荷瘤小鼠存活期作用,并且PWAE还能降低荷瘤小鼠脾指数,升高胸腺指数,使之趋向正常值。提示PWAE不仅能抑制体内肿瘤生长,还能提高机体的免疫能力。

    白头翁为毛茛科植物Pulsatilla chinensis Regel,已发现其水提液(PWE)、醇提液(PAE)在体外能显著抑制7721、HeLa、MKN-45细胞的生长[1],笔者对其体内抗肿瘤作用进行了实验研究。
, 百拇医药
    1 材料

    白头翁:本院中药房提供。白头翁水提取2次,4层纱布过滤,滤液浓缩,加入95%酒精使含醇量达70%,置冰箱过夜,取上清液,回收酒精,再配成含醇量80%混悬液,置冰箱过夜,取上清液,回收酒精和水至干,加蒸馏水配成0.5 g生药/mL溶液,3号垂熔漏斗过滤,高温高压灭菌,即为白头翁注射液(PWAE)。环磷酰胺:上海华联制药有限公司产品,批号980612。

    S180及艾氏腹水瘤株:江苏省肿瘤医院定期传代瘤株。

    昆明种小鼠,18~22 g,购自南京医科大学实验动物中心。

    2 方法

    2.1 小鼠荷瘤:取接种6 d的S180及艾氏腹水型小鼠腹水,用灭菌生理盐水(1:3)稀释,经右上肢靠右肩甲骨处sc或ip 0.2 mL (4×106~6×106个瘤细胞,活细胞率>95%),制成实体瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。
, 百拇医药
    2.2 药物剂量与给药途径:按实验设计剂量ip(实体瘤型)或im(腹水瘤型)给药,阴性对照组用生理盐水ip或im,阳性对照组用环磷酰胺ip或im,每只小鼠每天用药1次。

    2.3 抑瘤率、脾指数和胸腺指数的计算:荷S180实体瘤型小鼠于接种后24 h随机分组,连续给药8 d,8 d后称重、处死,分别取瘤、脾和胸腺,体重,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数并进行统计学处理[2]

    2.4 存活率的计算:艾氏腹水型小鼠于接种后24 h随机分组,连续给药8 d,停药后继续观察,直到自然死亡,计算其存活延长率。

    3 结果

    3.1 对荷S180瘤小鼠的抑瘤作用:见表1。

    表1 对荷S180小鼠肿瘤的抑制作用(±s) 组别
, 百拇医药
    剂量

    (g生药/kg.d)

    动物数

    (只)

    体重变化(g)

    瘤重

    抑瘤率

    疗前

    疗后

    对照

    -

    15

    19.4±1.8
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    28.9±0.7

    2.47±1.02

    0

    PWAE

    3

    12

    19.5±0.9

    27.1±0.5

    0.91±0.49

    63.2**

    1

    12

, http://www.100md.com     19.1±0.6

    28.2±0.4

    1.33±1.26

    46.2**

    0.3

    12

    18.9±1.3

    29.4±0.8

    1.91±0.47

    22.6*

    环磷酰胺

    0.01
, http://www.100md.com
    12

    19.3±0.7

    29.6±1.3

    1.03±0.57

    58.3**

    与对照组相比:*P<0.05 **P<0.013.2 对艾氏腹水型小鼠存活期的影响:见表2。

    表2 对艾氏腹水型小鼠存活期的影响(±s) 组 别

    剂量

    (g生药/kg.d)
, 百拇医药
    动物数

    (只)

    存活

    (d)

    延长率

    (%)

    对照

    -

    14

    12.57±1.21

    0

    PWAE

    3
, 百拇医药
    10

    18.60±0.76

    48.0**△

    1

    10

    17.40±1.32

    38.4**

    0.3

    10

    14.70±0.54

    16.9*

    环磷酰胺
, 百拇医药
    0.01

    10

    16.30±0.87

    29.7**

    与对照组相比:*P<0.05 **P<0.01

    与环磷酰胺组相比:P<0.05

    3.3 对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响:见表3。结果表明,PWAE 3 g生药/kg.d有明显抑瘤作用(63.2 %),且能明显延长艾氏腹水型小鼠的存活期(48.0 %),随着剂量减小,抑瘤率和存活期也减小。PWAE 3 g生药/kg.d与阳性对照组环磷酰胺组相比,抑瘤率与后者(58.3 %)相近(P>0.05),存活期延长率比后者(29.7 %)高(P<0.05)。小鼠荷瘤后,引起免疫指标不正常,表现为脾指数升高,为正常鼠的198.1 %,胸腺指数下降,为正常鼠的56.5 %,PWAE不同剂量组均能使荷瘤小鼠脾指数降低,胸腺指数升高,向正常值靠拢。3 g生药/kg.d剂量组降低脾指数最显著(127.8 %),与对照组相比有显著差异(P<0.01),与环磷酰胺组相比无显著差异(P>0.05)。1 g生药/kg.d剂量组上升胸腺指数最显著,与对照组相比有显著差异(P<0.01),与环磷酰胺组(69.4 %)相比有显著差异(P<0.01),说明其效果比后者强。综上所述,PWAE不仅能抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长小鼠生命,而且有改善荷瘤小鼠免疫机能的作用。
, 百拇医药
    表3 对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响(±s) 组 别

    剂 量

    (g生药/kg.d)

    动物数

    (只)

    脾指数

    比率

    (%)

    胸腺指数

    比率##
, 百拇医药
    (%)

    正常组

    -

    12

    6.76±0.58

    2.32±0.43

    对照

    -

    18

    13.39±0.45

    198.1

    1.31±0.57

    56.5
, 百拇医药
    PWAE

    3

    12

    8.63±0.62*

    127.8

    1.70±0.95

    73.3

    1

    12

    9.86±0.52

    145.9

    1.92±0.24△*
, 百拇医药
    78.6

    0.3

    12

    10.23±1.36

    151.3

    1.55±0.37

    66.8

    环磷酰胺

    0.01

    12

    9.32±0.87

    137.9

    1.61±0.69
, 百拇医药
    69.4

    空白对照组、各用药组与正常组脾指数比率; ##空白对照组、各用药组与正常组胸腺指数比率。

    与对照组相比:*P<0.01;与环磷酰胺组相比:P<0.01

    4 讨论

    4.1 白头翁含皂苷,虽然有报道白头翁煎剂及白头翁皂苷毒性都很低,后者溶血指数仅1∶666[3],考虑到用药安全性,故实验时暂未采用静脉给药。由于笔者在白头翁体外抗肿瘤实验研究[1]时,发现白头翁抗肿瘤活性成分易溶于水,亦能溶于醇,所以,采用水提醇沉法制成注射剂腹腔给药观察其抗移植瘤作用。口服给药是否有效有待于进一步研究。

    4.2 有报道白头翁皂苷A3 100 μg/mL在体外对P388细胞有抑制生长作用(抑制率53.7 %),白头翁粉末乙醇提取物经乙醚脱脂、脱色素后,分别用乙酸乙酯及正丁醇萃取,得到皂苷A和B[4],故笔者曾用白头翁乙酸乙酯(50,10,5 g生药/kg.d)、正丁醇(12.5,5,1.25 g生药/kg.d)提取物ip给药未发现有明显抗S180移植瘤作用。说明其体内有效抗肿瘤成分不是白头翁皂苷A,B。还有报道从白头翁根中提取到一种新的多环烷类三萜酸:白头翁酸,并且体外实验结果表明白头翁酸有抗P388、Lewis肺癌和人大细胞肺癌的作用[5],本实验水提醇沉提取物有效,至少说明抗肿瘤成分极性较大,是否是白头翁酸有待进一步证实。
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    4.3 体外实验结果[1]提示PAE、PWE有直接杀灭瘤细胞的作用,体内实验结果则说明PWAE还能通过提高机体免疫力来达到抗肿瘤作用。至于其具体作用机制以及作用细胞周期的哪一阶段有待进一步研究。

    作者简介:蔡鹰,女,32岁,南京中医药大学中药学项士研究生毕业,现丰解放军

    第四五四医院工作,任主管药师,从呈新药开发质量标准制订研究工作,近年来从事于抗肿瘤中草药筛选工作,发表论文10余篇.

    参考文献

    1 蔡鹰,等.中草药,1999,30(6):441

    2 徐叔云,等.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,1982:363

    3 江苏新医学院编.中药大辞典.上册.上海:上海人民出版社,1977:703

    4 陈文侃,等.化学学报,1990,48(7):501

    5 Ye W C, et al. Phytochemistry, 1996,42(3):799

    (1999-04-08 收稿, http://www.100md.com