金水六君煎口服液对慢性支气管炎小鼠血清IL-2水平等影响的研究★
作者：赵长鹰 唐 颖 沈英森 陈再智 陈小娟 陈丽娟
单位：
关键词：＠金水六君煎；药理学；IL-2；＠迟发性超敏反应；动物；小鼠
新中医991217 提 要 以金水六君煎制成口服液，检测慢性支气管炎模型小鼠血清IL-2水平及迟发性超敏反应强度的变化。结果：金水六君煎口服液可提高慢支模型小鼠血清IL-2含量，增强小鼠迟发性超敏反应强度。提示：金水六君煎口服液能够调节机体免疫功能，尤其可增强机体细胞免疫力。
金水六君煎口服液治疗慢性支气管炎已取得了较好的效果〔1〕。为了进一步探讨本方治疗作用机理，笔者检测了慢性支气管炎小鼠血清IL-2水平及小鼠迟发性超敏反应强度。现将实验结果报道如下。
1 慢性支气管炎小鼠血清IL-2水平测定
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1.1 材料与方法 按照IL-2放免药盒说明书中方法测定。取57只体重18～22 g NIH小鼠(NIH小鼠及其标准饲料均由广东省医用实验动物场提供，动物检测合格证书号为97A017，以下实验均同)。随机分为正常动物空白对照组(以下简称正常组)，模型对照组(以下简称模型组)，金水六君煎高剂量组(以下简称金高组)，金水六君煎低剂量组(以下简称金低组)，急支糖浆组(以下简称急支组)，每组10只(模型组17只)。各组动物均在同一环境下饲养，喂养条件相同。
将正常组以外的4组动物，放入一个40 cm×40 cm×30 cm玻璃缸中，上盖一玻璃盖，并将30 g刨花放于一瓷碗里，置于玻璃缸内。点燃刨花，盖上玻璃盖，缸上一边留有一条5 mm的缝隙，熏烟烟雾刺激30分钟，每天1次，共6周。模型组从第6周起，每天处死1只造模小鼠，通过形态学观察(光镜下：上皮细胞损害、炎细胞浸润、杯状细胞增生)，在第7周时可达慢支模型标准。然后予以药物治疗：分别为金高组与金低组小鼠灌胃4 g总生药/kg及2 g总生药/kg，急支组小鼠灌胃20 ml/kg，正常组、模型组灌胃等容量生理盐水0.2 ml/10g，每天1次，共3周。摘眼球取血，4℃冰箱内静置4小时，取样品血清100 μl，依次加入IL-2抗血清、125I-IL-2，摇匀，4℃保存，24小时后，加入分离剂500 μl，充分混匀，室温放置15分钟后，4℃ 3500 rpm离心20分钟，吸弃上清液，由自动γ计数器上直接得出样品浓度。
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1.2 结果 见表1。
表1 血清IL-2含量检测结果(
±s) 组 别
小鼠数
(只)
剂量(g总生
药/kg)
IL-2含量
(ng/ml)
正常组
10
0.2ml/10g
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生理盐水
14.94±2.86※
模型组
10
0.2ml/10g
生理盐水
7.39±3.27
金高组
10
4
14.19±3.35※
金低组
, 百拇医药
10
2
10.41±5.2
急支组
10
20ml/kg
13.3±2.87※
※与模型组比较 P<0.01
从表1可知，慢支模型组血清IL-2含量较正常小鼠明显下降(P<0.01)；金高组及急支组血清IL-2含量均明显高于模型组，差异有非常显著性意义(P<0.01)；金高组与急支组比较差异无显著性意义(P>0.05)；金低组与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。提示高剂量金水六君煎口服液能够通过体内的生物调节，刺激内源性IL-2的产生，从而提高免疫应答。
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2 迟发性超敏反应强度的测定
2.1 材料与方法 按迟发性超敏反应强度测定法〔2〕。取20±2 g NIH小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组(n＝10)，即金水六君煎高剂量组(灌胃4 g总生药/kg，金水六君煎低剂量组(灌胃2 g总生药/kg)，急支糖浆组(灌胃20 ml/kg)，空白对照组(予等容量生理盐水0.2 ml/10g)，连续给药3周。以无菌技术制成6只KM小鼠脾细胞混合悬液1×108/ml，实验第14天，每只小鼠腹腔注射脾细胞悬液0.1 ml，第21天，每只用8只小鼠脾细胞悬液50 μl(浓度为2×108/ml)，注射一侧脚掌皮下，对侧脚掌同法给予等量生理盐水，次日处死动物，用游标卡尺测量脚掌厚度，两脚掌厚度之差即为迟发性超敏反应强度。
2.2 结果 见表2。
表2 迟发性超敏反应强度检测结果(±s) 组 别
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小鼠数
(只)
脚掌肿胀度(×0.1mm)
空白组
10
5.33±0.91※
急支组
10
6.90±0.85※
金低组
10
6.81±0.97※
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金高组
10
7.53±0.78※
※与空白组比较P<0.05
从表2可知，不同剂量金水六君煎和急支糖浆均显著增强小鼠脚掌肿胀度，与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05)。亦即金水六君煎口服液高、低剂量均可增强迟发性超敏反应强度，表明其可以促进T淋巴细胞的活化，增强T细胞介导的细胞免疫功能。
3 讨论
IL-2在机体的抗感染免疫中起着重要的作用，它是一种由T淋巴细胞产生的具有多种生物效应的淋巴因子，是调节免疫应答的重要介质，是T、B细胞活化、分化并发挥效应功能所必须的T细胞因子。它对T细胞、B细胞和NK细胞都有明显的刺激作用，并可诱生LAK细胞、干扰素等〔3〕。本研究结果显示，慢支模型小鼠血清IL-2含量较正常组明显下降(P<0.01)，这与文献报道〔4〕慢支患者血清IL-2含量低下是一致的，而高剂量金水六君煎口服液可显著提高慢支模型小鼠血清IL-2含量，提示高剂量金水六君煎口服液能够通过体内的生物调节，刺激内源性IL-2的产生，从而提高免疫应答。
, 百拇医药
迟发性超敏反应反映了整体细胞免疫机能，金水六君煎口服液高、低剂量均可增强迟发性超敏反应强度，表明其可以促进T淋巴细胞的活化，增强T细胞介导的细胞免疫功能。
实验结果提示，金水六君煎口服液能够调节机体免疫功能，尤其可增强机体细胞免疫力，为临床使用金水六君煎口服液治疗慢性支气管炎提供了一些实验依据。需要指出的是中药复方对机体免疫功能的调节是多层次、多环节上的一个复杂过程，该药对免疫系统各个环节的影响，尚有待进一步深入研究。
★ 国务院侨办课题
参考文献
1 赵长鹰，沈英森，孟 辉，等.金水六君煎口服液治疗慢性支气管炎的临床及实验研究.中国中西医结合杂志，1997，17(5)∶2964
2 童 鲲，吴练中.玉屏风散加味对小鼠免疫功能的增强作用.中成药，1995，17(1)∶27
3 Tatatsugu Taniguchi and yasuhiro Minami.白细胞素2/白细胞介素2受体系统的新进展.国外医学.免疫学分册，1993(6)∶334
4 郑士荣，李 文，余小萍，等.补肾益气复方治疗慢性支气管炎的疗效及免疫调节作用观察.上海中医药杂志，1993(5)∶1
(收稿日期：1999-06-04), http://www.100md.com
单位：
关键词：＠金水六君煎；药理学；IL-2；＠迟发性超敏反应；动物；小鼠
新中医991217 提 要 以金水六君煎制成口服液，检测慢性支气管炎模型小鼠血清IL-2水平及迟发性超敏反应强度的变化。结果：金水六君煎口服液可提高慢支模型小鼠血清IL-2含量，增强小鼠迟发性超敏反应强度。提示：金水六君煎口服液能够调节机体免疫功能，尤其可增强机体细胞免疫力。
金水六君煎口服液治疗慢性支气管炎已取得了较好的效果〔1〕。为了进一步探讨本方治疗作用机理，笔者检测了慢性支气管炎小鼠血清IL-2水平及小鼠迟发性超敏反应强度。现将实验结果报道如下。
1 慢性支气管炎小鼠血清IL-2水平测定
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1.1 材料与方法 按照IL-2放免药盒说明书中方法测定。取57只体重18～22 g NIH小鼠(NIH小鼠及其标准饲料均由广东省医用实验动物场提供，动物检测合格证书号为97A017，以下实验均同)。随机分为正常动物空白对照组(以下简称正常组)，模型对照组(以下简称模型组)，金水六君煎高剂量组(以下简称金高组)，金水六君煎低剂量组(以下简称金低组)，急支糖浆组(以下简称急支组)，每组10只(模型组17只)。各组动物均在同一环境下饲养，喂养条件相同。
将正常组以外的4组动物，放入一个40 cm×40 cm×30 cm玻璃缸中，上盖一玻璃盖，并将30 g刨花放于一瓷碗里，置于玻璃缸内。点燃刨花，盖上玻璃盖，缸上一边留有一条5 mm的缝隙，熏烟烟雾刺激30分钟，每天1次，共6周。模型组从第6周起，每天处死1只造模小鼠，通过形态学观察(光镜下：上皮细胞损害、炎细胞浸润、杯状细胞增生)，在第7周时可达慢支模型标准。然后予以药物治疗：分别为金高组与金低组小鼠灌胃4 g总生药/kg及2 g总生药/kg，急支组小鼠灌胃20 ml/kg，正常组、模型组灌胃等容量生理盐水0.2 ml/10g，每天1次，共3周。摘眼球取血，4℃冰箱内静置4小时，取样品血清100 μl，依次加入IL-2抗血清、125I-IL-2，摇匀，4℃保存，24小时后，加入分离剂500 μl，充分混匀，室温放置15分钟后，4℃ 3500 rpm离心20分钟，吸弃上清液，由自动γ计数器上直接得出样品浓度。
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1.2 结果 见表1。
表1 血清IL-2含量检测结果(
±s) 组 别小鼠数
(只)
剂量(g总生
药/kg)
IL-2含量
(ng/ml)
正常组
10
0.2ml/10g
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生理盐水
14.94±2.86※
模型组
10
0.2ml/10g
生理盐水
7.39±3.27
金高组
10
4
14.19±3.35※
金低组
, 百拇医药
10
2
10.41±5.2
急支组
10
20ml/kg
13.3±2.87※
※与模型组比较 P<0.01
从表1可知，慢支模型组血清IL-2含量较正常小鼠明显下降(P<0.01)；金高组及急支组血清IL-2含量均明显高于模型组，差异有非常显著性意义(P<0.01)；金高组与急支组比较差异无显著性意义(P>0.05)；金低组与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。提示高剂量金水六君煎口服液能够通过体内的生物调节，刺激内源性IL-2的产生，从而提高免疫应答。
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2 迟发性超敏反应强度的测定
2.1 材料与方法 按迟发性超敏反应强度测定法〔2〕。取20±2 g NIH小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组(n＝10)，即金水六君煎高剂量组(灌胃4 g总生药/kg，金水六君煎低剂量组(灌胃2 g总生药/kg)，急支糖浆组(灌胃20 ml/kg)，空白对照组(予等容量生理盐水0.2 ml/10g)，连续给药3周。以无菌技术制成6只KM小鼠脾细胞混合悬液1×108/ml，实验第14天，每只小鼠腹腔注射脾细胞悬液0.1 ml，第21天，每只用8只小鼠脾细胞悬液50 μl(浓度为2×108/ml)，注射一侧脚掌皮下，对侧脚掌同法给予等量生理盐水，次日处死动物，用游标卡尺测量脚掌厚度，两脚掌厚度之差即为迟发性超敏反应强度。
2.2 结果 见表2。
表2 迟发性超敏反应强度检测结果(
±s) 组 别, http://www.100md.com
小鼠数
(只)
脚掌肿胀度(×0.1mm)
空白组
10
5.33±0.91※
急支组
10
6.90±0.85※
金低组
10
6.81±0.97※
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金高组
10
7.53±0.78※
※与空白组比较P<0.05
从表2可知，不同剂量金水六君煎和急支糖浆均显著增强小鼠脚掌肿胀度，与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05)。亦即金水六君煎口服液高、低剂量均可增强迟发性超敏反应强度，表明其可以促进T淋巴细胞的活化，增强T细胞介导的细胞免疫功能。
3 讨论
IL-2在机体的抗感染免疫中起着重要的作用，它是一种由T淋巴细胞产生的具有多种生物效应的淋巴因子，是调节免疫应答的重要介质，是T、B细胞活化、分化并发挥效应功能所必须的T细胞因子。它对T细胞、B细胞和NK细胞都有明显的刺激作用，并可诱生LAK细胞、干扰素等〔3〕。本研究结果显示，慢支模型小鼠血清IL-2含量较正常组明显下降(P<0.01)，这与文献报道〔4〕慢支患者血清IL-2含量低下是一致的，而高剂量金水六君煎口服液可显著提高慢支模型小鼠血清IL-2含量，提示高剂量金水六君煎口服液能够通过体内的生物调节，刺激内源性IL-2的产生，从而提高免疫应答。
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迟发性超敏反应反映了整体细胞免疫机能，金水六君煎口服液高、低剂量均可增强迟发性超敏反应强度，表明其可以促进T淋巴细胞的活化，增强T细胞介导的细胞免疫功能。
实验结果提示，金水六君煎口服液能够调节机体免疫功能，尤其可增强机体细胞免疫力，为临床使用金水六君煎口服液治疗慢性支气管炎提供了一些实验依据。需要指出的是中药复方对机体免疫功能的调节是多层次、多环节上的一个复杂过程，该药对免疫系统各个环节的影响，尚有待进一步深入研究。
★ 国务院侨办课题
参考文献
1 赵长鹰，沈英森，孟 辉，等.金水六君煎口服液治疗慢性支气管炎的临床及实验研究.中国中西医结合杂志，1997，17(5)∶2964
2 童 鲲，吴练中.玉屏风散加味对小鼠免疫功能的增强作用.中成药，1995，17(1)∶27
3 Tatatsugu Taniguchi and yasuhiro Minami.白细胞素2/白细胞介素2受体系统的新进展.国外医学.免疫学分册，1993(6)∶334
4 郑士荣，李 文，余小萍，等.补肾益气复方治疗慢性支气管炎的疗效及免疫调节作用观察.上海中医药杂志，1993(5)∶1
(收稿日期：1999-06-04), http://www.100md.com