供肝灌洗液中透明质酸含量与肝脏冷保存损伤及术后成活率的关系
作者：焦成文 徐冠南 付志仁 丁国善 李先兴 吴剑英
单位：解放军455医院外科 上海 200336
关键词：原位肝移植；猪；透明质酸；冷保存损伤；原发性无功能
肝胆胰外科杂志000119 摘 要：目的：观察冷保存后供肝灌洗液中透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)水平与肝功能及成 活率的关系。方法：行23例猪原位肝移植术，供肝植入前，用4℃乳酸林格氏液经门静脉内灌洗肝脏，测量灌洗液中的HA含量。同时，分别于术后2小时、24小时及72小时取血测肝功能(ALT及LDH)，取其中最高值(即峰值)。结果：以HA值为400μg/L作为界限 ，把实验猪分为两组，结果发现血清ALT及LDH峰值在两组间无显著差异，而24小时及2成活率也没有显著差异。结论：供肝灌液洗中HA含量与术后早期肝功能和成活率无关。即测量灌洗液中的HA含量不能预测供肝功能和术后成活情况。
, http://www.100md.com
分类号：R 文献标识码：A
文章编号：1007-1954(2000)01-00 35-02
The correlation between the efllyebt levels of hvaluronic acid of grafts and the cold preservation damage or the survival rate
JIAO Cheng-wen，XU Guan-nan，FU Zhi-ren
(Department of general surgery Changzheng hospital, the Second Military Medical Unive rsity,Shanghai,200003)
Abstract：Objective：To study the correlation between the effluent levels of hyaluronic acid(HA)of grafts after cold preservation and the grafts function or the survival rate.Methods：In the experiment,23 cases of porcine orthotopic liver transplantation were performed.Before implantation the donor livers were perfused with cold Ringer's lactated solution through purtal vein and the effluent levels of HA were measure d.After implantation serum ALT and LDH were measured at the different time (2 hours later,24 hours laster and 72 hours later),and teir peak values were recorded.Results：we divided the experimental animals into two groups according to the effluent levels of HA,which were more or less than 400 μg/L,finding that the serum peak ALT and LDH were not significant different between the two groups,and that 24-hour survival rate and 2-week survival rate were not signifi cant different either.Conclusions：There exited no correlation betwe en the effluent levels of HA and the grafts function or the survival rate.That is to say,the effluent levels of HA could not predict the grafts function and the survival rate.
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Key words：orthotopic liver transp lantation；pig；hyaluronic acid；cold preservation damage；PNF▲
供肝植入前，如何较准确地判断其成活力，是人们所关心的问题。进入九十年代，人们开始注意到透明质酸(HA)在这方面的潜在用途。本文就供肝灌洗液中HA水平与肝功能及动物成活情况之间的关系探讨如下。
1 材料和方法
上海白猪70头，体重20～30kg，性别不限，供受体组各23头，其余24头作为输血组，供受体采用同窝猪，共进行23例原位肝移植术，其中5例因为术中死亡排除在外，n=18。术前禁食12小时，禁水6小时。供肝冷保存后植入受体内前，用4℃乳酸林格氏液从门静脉内灌洗肝脏，肝上下腔夹闭，灌洗液从肝下下腔流出，取最初流出的50ml液体，离心后取上清液，保存于-70℃冰箱中待测。检测方法为放射免疫分析法(所用药盒为海军医学研究所提供的HA放免药盒)。同时分别于术后2小时、24小时及72小时分别采血，检测ALT及LDH，取最高值(即峰值)。记录冷缺血时间。所得数据用t检验及卡方检验。
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2 结果
2.1 以HA值400μg/L为界限，将动物分为两组(H组和L组)，H组8例，L组10例。H组HA值为583.1±105.3μg/L，L组HA值为242.7±92.9μg/L。
2.2 冷缺血时间：H组194.0±27.4min，L组185.2±32.1min，二者间无显著差异(P>0.05)。
2.3 术后3天内LAT及LDH的峰值如表1。
表1 术后3天内肝功能峰值(U/L) 组别
n
ALT
LDH
H组
, 百拇医药
8
123.5±34.6
1010.8±90.9
L组
10
93.4±34.8*
953.8±214.3*
与H组比：*P>0.05
2.4 两组24小时和2周成活率比较如表2。
表2 两组24小时和2周成活率比较 组别
例数
, 百拇医药
2小时成活例数(%)
2周成活例数(%)
H组
8
4(50)
2(25)
L组
10
5(50)
3(30)
与H组比：*P>0.05
3 讨论
供肝质量的好坏是决定移植后能否成活的重要因素之一。而供肝质量的决定因素则是多样的，除了其本身的健康营养状况外，更重要的还有热缺血及冷保存损伤。虽然随着手术技巧的提高及保存液性能的改进，两种损伤均有一定程度的减轻，但是，肝移植体原发性无功能(PrimaryNonfunction,PNF)的发生率仍可达2%～7%[1]。在供肝植入受体内之前，如果能较准确地预测它的功能，预知它是否适宜于移植，这对移植工作者来说，无疑是一个莫大的帮助。国外一些植物工作者在这方面作了不少研究工作。八十年代末九十年代初，人们开始注意到透明质酸(HA)在这方面具有潜在的应用价值。
, 百拇医药
HA是一种大分子葡萄糖胺多糖，基本结构是杂二糖，以糖苷键连接成直链的大分子，没有支链。其分子量因糖链长短不一而在一定范围内变化为4000～8×106。它广泛分布于软组织中，人脐带、关节液和牛鼻软骨中含量最高，人体尿液和血液中含量极低，血清浓度仅10～100μ/L。HA在许多发育和调控过程如细胞粘附、器官成形、创伤愈合、肿瘤发生和血管形成中起重要作用[2]。HA由间质细胞合成，合成后由淋巴管进入淋巴结，部分被代谢，其余进入血循环。主要在肝脏代谢，由肝内皮细胞清除[3，4]。半衰期仅为2～5min。用放射免疫法测得的正常人血清中HA浓度范围为10～100μ/L。
传统的肝功能检查反映的是肝细胞损害程度，而HA反映的是肝窦内皮细胞的功能。在肝移植过程中，无论是冷保存损伤还是排斥反应所致的肝损害，首先受累的是内皮细胞，而HA是经内皮细胞代谢的，故测定冷保存后供肝灌洗液中的HA含量及发生排斥反应时测量血清中的HA水平，从理论上来说，比传统的肝功能检查，具有更好的敏感性。八十年代中后期，人们开始注意到在各种肝病中HA含量升高[5,6,7,8]，其在各种肝病的监测中起重要作用。八十年代末期，Adams等[9]提出测量血清中HA含量能敏感地反映肝移植排斥反应。Pollard等[10]也有类似见解，并指出血清HA水平能区分排斥反应与其它并发症。
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随后，Bronsther等首先报道并得出了冷保存后供肝灌洗液中HA含量与供肝功能及成活率之间存在密切关系的结论[11]。他们以400μg/L作为HA值的界限，把病人分为大于400μg/L组和小于400μg/L组，结果发现，术后肝功能峰值在两组间有显著差异，肝功能峰值与HA含量呈正相关，且两组病人肝移植体原发性无功能(PNF)的发生率有显著性差异。Rao等[12]亦有类似的结论。
本实验参照Bronsther的方法，以400μg/L为界限，把所测得的供肝灌洗液中的HA值分为大于和小于400μg/L两组。然后比较术后早期两组的肝功能峰值和24小时及2周成活率，结果发现两组的肝功能及成活率均无显著性差异(P>0.05)。换句话说，供肝灌洗液中HA含量的高低，不能反映移植后的肝功能及成活情况，不能作为衡量供肝是否适宜于移植的标准。这个结论与Karayalcin及Suehiro等[13,14]的报道一致。
, 百拇医药
作为反映肝窦内皮细胞功能的HA未能反映移植术后肝功能，我们并不能从这一点来否认HA是反映肝窦内皮细胞损伤程度的一个指标。有人提出，肝窦内皮细胞损伤本身并不能很好地预兆肝移植后的结果。因此，移植前如何更准确地判断供肝的功能，还需我们进一步研究探索，找出更好的判断指标。■
作者简介：焦成文(1967-)，男，上海人，主治医师，硕士。
参考文献：
[1]Pruim J,Van WW,Knol E,et al.Donor data in liver grafts with primary non-function-a preliminary analysis by the European liver registry[J].Transplantat ion,1989,21(1)∶2383-2384.
[2]Raja RH,McGary CT,Weigel PH,et al.Affinity and distribution of sur face and intracellular hyaluronic acid receptors in isolated rat liver endothelial cells[J].J Biol Chem,1988,263(32)∶16661-16668.
, http://www.100md.com
[3]Smedsrod B,Peropft H,Eriksson S,et al.Studies in vitro on the uptake and degradation of sodium hyaluronnate in rat liver endothelia cells[J].Bio chem J,1984,223∶617-626.
[4]Frase JRE,Engstrom Laurent A,Nyberg A,et al.Removal of hyaluronic acid from the circulation in rheumatoid disease and primary billiary cirrhosis[J]. J Lab Clin Med,1986,107(1)∶79-85.
[5]Engstrom Laurent A,Loof L,Nyberg A,et al.Increased serum levels of hyaluronate in liver disease[J].Hepatology,1985,5∶638-642.
, http://www.100md.com
[6]Frebourg T,Delpech B,Bercoff E,et al.Serum hyaluronate in liver diseases:study by enzymoimmunological assay[J].Hepatology,1986,6∶382-385.
[7]Neberg A,Engstrom Laurent A,and Loof L.Serum hyaluronate in primary billiary cirrhosis A biochemical marker for progressive liver damage[J].Hepatology,1988,8∶142-146.
[8]张鲁榕.透明质酸在肝病中的基础和临床研究[J].第二军医大学学报，1990，11∶188.
[9]Adams DH,Wang L,and Neuberger JM.Serum hyaluronic acid following liver transplantation:evidence of hepatic endothlial damage[J].Transplant Proc，198 9,21(1)∶2274.
, 百拇医药
[10]Pollard SG,Forbe MA,Metcalfe SM,et al.Hyaluronic acid in the asse ssment of liver graft function[J].Transplant Proc,1990,22(5)∶2301-2302.
[11]Bronther OL,Rao PN,Pinna AD,et al.Effluent levels of hyaluronic acid can predict ultimate graft outcome after clinical liver transplantation:A prospe ctive series[J].Transplant Proc,1993,25(1)∶1538-1540.
[12]Rao PN,Bronsther OL,Pinna AD,et al.Prediction of early graft function by effluent levels of hyaluronic acid in clinical livertransplantation[J].Tra nsplant Proc,1993,25(2)∶2141-2142.
, http://www.100md.com
[13]Karayalcin K,Harrison JD,Attard A,et al.Can effluent hyaluronic acid or creatine kinase predict sinusoidal injury severity after cold ischemia[J]? Transplantation,1993,56∶1336-1339.
[14]Suehiro T,Boros P,Curtiss S,et al.Perioperative hyaluronic acid levels in orthtopic liver transplant recipient[J].Transplant proc,1995,27(1)∶1261.
收稿日期：1999-10-18, http://www.100md.com
单位：解放军455医院外科 上海 200336
关键词：原位肝移植；猪；透明质酸；冷保存损伤；原发性无功能
肝胆胰外科杂志000119 摘 要：目的：观察冷保存后供肝灌洗液中透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)水平与肝功能及成 活率的关系。方法：行23例猪原位肝移植术，供肝植入前，用4℃乳酸林格氏液经门静脉内灌洗肝脏，测量灌洗液中的HA含量。同时，分别于术后2小时、24小时及72小时取血测肝功能(ALT及LDH)，取其中最高值(即峰值)。结果：以HA值为400μg/L作为界限 ，把实验猪分为两组，结果发现血清ALT及LDH峰值在两组间无显著差异，而24小时及2成活率也没有显著差异。结论：供肝灌液洗中HA含量与术后早期肝功能和成活率无关。即测量灌洗液中的HA含量不能预测供肝功能和术后成活情况。
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分类号：R 文献标识码：A
文章编号：1007-1954(2000)01-00 35-02
The correlation between the efllyebt levels of hvaluronic acid of grafts and the cold preservation damage or the survival rate
JIAO Cheng-wen，XU Guan-nan，FU Zhi-ren
(Department of general surgery Changzheng hospital, the Second Military Medical Unive rsity,Shanghai,200003)
Abstract：Objective：To study the correlation between the effluent levels of hyaluronic acid(HA)of grafts after cold preservation and the grafts function or the survival rate.Methods：In the experiment,23 cases of porcine orthotopic liver transplantation were performed.Before implantation the donor livers were perfused with cold Ringer's lactated solution through purtal vein and the effluent levels of HA were measure d.After implantation serum ALT and LDH were measured at the different time (2 hours later,24 hours laster and 72 hours later),and teir peak values were recorded.Results：we divided the experimental animals into two groups according to the effluent levels of HA,which were more or less than 400 μg/L,finding that the serum peak ALT and LDH were not significant different between the two groups,and that 24-hour survival rate and 2-week survival rate were not signifi cant different either.Conclusions：There exited no correlation betwe en the effluent levels of HA and the grafts function or the survival rate.That is to say,the effluent levels of HA could not predict the grafts function and the survival rate.
, http://www.100md.com
Key words：orthotopic liver transp lantation；pig；hyaluronic acid；cold preservation damage；PNF▲
供肝植入前，如何较准确地判断其成活力，是人们所关心的问题。进入九十年代，人们开始注意到透明质酸(HA)在这方面的潜在用途。本文就供肝灌洗液中HA水平与肝功能及动物成活情况之间的关系探讨如下。
1 材料和方法
上海白猪70头，体重20～30kg，性别不限，供受体组各23头，其余24头作为输血组，供受体采用同窝猪，共进行23例原位肝移植术，其中5例因为术中死亡排除在外，n=18。术前禁食12小时，禁水6小时。供肝冷保存后植入受体内前，用4℃乳酸林格氏液从门静脉内灌洗肝脏，肝上下腔夹闭，灌洗液从肝下下腔流出，取最初流出的50ml液体，离心后取上清液，保存于-70℃冰箱中待测。检测方法为放射免疫分析法(所用药盒为海军医学研究所提供的HA放免药盒)。同时分别于术后2小时、24小时及72小时分别采血，检测ALT及LDH，取最高值(即峰值)。记录冷缺血时间。所得数据用t检验及卡方检验。
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2 结果
2.1 以HA值400μg/L为界限，将动物分为两组(H组和L组)，H组8例，L组10例。H组HA值为583.1±105.3μg/L，L组HA值为242.7±92.9μg/L。
2.2 冷缺血时间：H组194.0±27.4min，L组185.2±32.1min，二者间无显著差异(P>0.05)。
2.3 术后3天内LAT及LDH的峰值如表1。
表1 术后3天内肝功能峰值(U/L) 组别
n
ALT
LDH
H组
, 百拇医药
8
123.5±34.6
1010.8±90.9
L组
10
93.4±34.8*
953.8±214.3*
与H组比：*P>0.05
2.4 两组24小时和2周成活率比较如表2。
表2 两组24小时和2周成活率比较 组别
例数
, 百拇医药
2小时成活例数(%)
2周成活例数(%)
H组
8
4(50)
2(25)
L组
10
5(50)
3(30)
与H组比：*P>0.05
3 讨论
供肝质量的好坏是决定移植后能否成活的重要因素之一。而供肝质量的决定因素则是多样的，除了其本身的健康营养状况外，更重要的还有热缺血及冷保存损伤。虽然随着手术技巧的提高及保存液性能的改进，两种损伤均有一定程度的减轻，但是，肝移植体原发性无功能(PrimaryNonfunction,PNF)的发生率仍可达2%～7%[1]。在供肝植入受体内之前，如果能较准确地预测它的功能，预知它是否适宜于移植，这对移植工作者来说，无疑是一个莫大的帮助。国外一些植物工作者在这方面作了不少研究工作。八十年代末九十年代初，人们开始注意到透明质酸(HA)在这方面具有潜在的应用价值。
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HA是一种大分子葡萄糖胺多糖，基本结构是杂二糖，以糖苷键连接成直链的大分子，没有支链。其分子量因糖链长短不一而在一定范围内变化为4000～8×106。它广泛分布于软组织中，人脐带、关节液和牛鼻软骨中含量最高，人体尿液和血液中含量极低，血清浓度仅10～100μ/L。HA在许多发育和调控过程如细胞粘附、器官成形、创伤愈合、肿瘤发生和血管形成中起重要作用[2]。HA由间质细胞合成，合成后由淋巴管进入淋巴结，部分被代谢，其余进入血循环。主要在肝脏代谢，由肝内皮细胞清除[3，4]。半衰期仅为2～5min。用放射免疫法测得的正常人血清中HA浓度范围为10～100μ/L。
传统的肝功能检查反映的是肝细胞损害程度，而HA反映的是肝窦内皮细胞的功能。在肝移植过程中，无论是冷保存损伤还是排斥反应所致的肝损害，首先受累的是内皮细胞，而HA是经内皮细胞代谢的，故测定冷保存后供肝灌洗液中的HA含量及发生排斥反应时测量血清中的HA水平，从理论上来说，比传统的肝功能检查，具有更好的敏感性。八十年代中后期，人们开始注意到在各种肝病中HA含量升高[5,6,7,8]，其在各种肝病的监测中起重要作用。八十年代末期，Adams等[9]提出测量血清中HA含量能敏感地反映肝移植排斥反应。Pollard等[10]也有类似见解，并指出血清HA水平能区分排斥反应与其它并发症。
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随后，Bronsther等首先报道并得出了冷保存后供肝灌洗液中HA含量与供肝功能及成活率之间存在密切关系的结论[11]。他们以400μg/L作为HA值的界限，把病人分为大于400μg/L组和小于400μg/L组，结果发现，术后肝功能峰值在两组间有显著差异，肝功能峰值与HA含量呈正相关，且两组病人肝移植体原发性无功能(PNF)的发生率有显著性差异。Rao等[12]亦有类似的结论。
本实验参照Bronsther的方法，以400μg/L为界限，把所测得的供肝灌洗液中的HA值分为大于和小于400μg/L两组。然后比较术后早期两组的肝功能峰值和24小时及2周成活率，结果发现两组的肝功能及成活率均无显著性差异(P>0.05)。换句话说，供肝灌洗液中HA含量的高低，不能反映移植后的肝功能及成活情况，不能作为衡量供肝是否适宜于移植的标准。这个结论与Karayalcin及Suehiro等[13,14]的报道一致。
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作为反映肝窦内皮细胞功能的HA未能反映移植术后肝功能，我们并不能从这一点来否认HA是反映肝窦内皮细胞损伤程度的一个指标。有人提出，肝窦内皮细胞损伤本身并不能很好地预兆肝移植后的结果。因此，移植前如何更准确地判断供肝的功能，还需我们进一步研究探索，找出更好的判断指标。■
作者简介：焦成文(1967-)，男，上海人，主治医师，硕士。
参考文献：
[1]Pruim J,Van WW,Knol E,et al.Donor data in liver grafts with primary non-function-a preliminary analysis by the European liver registry[J].Transplantat ion,1989,21(1)∶2383-2384.
[2]Raja RH,McGary CT,Weigel PH,et al.Affinity and distribution of sur face and intracellular hyaluronic acid receptors in isolated rat liver endothelial cells[J].J Biol Chem,1988,263(32)∶16661-16668.
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[3]Smedsrod B,Peropft H,Eriksson S,et al.Studies in vitro on the uptake and degradation of sodium hyaluronnate in rat liver endothelia cells[J].Bio chem J,1984,223∶617-626.
[4]Frase JRE,Engstrom Laurent A,Nyberg A,et al.Removal of hyaluronic acid from the circulation in rheumatoid disease and primary billiary cirrhosis[J]. J Lab Clin Med,1986,107(1)∶79-85.
[5]Engstrom Laurent A,Loof L,Nyberg A,et al.Increased serum levels of hyaluronate in liver disease[J].Hepatology,1985,5∶638-642.
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[6]Frebourg T,Delpech B,Bercoff E,et al.Serum hyaluronate in liver diseases:study by enzymoimmunological assay[J].Hepatology,1986,6∶382-385.
[7]Neberg A,Engstrom Laurent A,and Loof L.Serum hyaluronate in primary billiary cirrhosis A biochemical marker for progressive liver damage[J].Hepatology,1988,8∶142-146.
[8]张鲁榕.透明质酸在肝病中的基础和临床研究[J].第二军医大学学报，1990，11∶188.
[9]Adams DH,Wang L,and Neuberger JM.Serum hyaluronic acid following liver transplantation:evidence of hepatic endothlial damage[J].Transplant Proc，198 9,21(1)∶2274.
, 百拇医药
[10]Pollard SG,Forbe MA,Metcalfe SM,et al.Hyaluronic acid in the asse ssment of liver graft function[J].Transplant Proc,1990,22(5)∶2301-2302.
[11]Bronther OL,Rao PN,Pinna AD,et al.Effluent levels of hyaluronic acid can predict ultimate graft outcome after clinical liver transplantation:A prospe ctive series[J].Transplant Proc,1993,25(1)∶1538-1540.
[12]Rao PN,Bronsther OL,Pinna AD,et al.Prediction of early graft function by effluent levels of hyaluronic acid in clinical livertransplantation[J].Tra nsplant Proc,1993,25(2)∶2141-2142.
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[13]Karayalcin K,Harrison JD,Attard A,et al.Can effluent hyaluronic acid or creatine kinase predict sinusoidal injury severity after cold ischemia[J]? Transplantation,1993,56∶1336-1339.
[14]Suehiro T,Boros P,Curtiss S,et al.Perioperative hyaluronic acid levels in orthtopic liver transplant recipient[J].Transplant proc,1995,27(1)∶1261.
收稿日期：1999-10-18, http://www.100md.com