中药黄蜀葵花对大鼠阿霉素肾病的作用
作者：尹莲芳
单位：尹莲芳(210009 南京铁道医学院附属医院肾科)
关键词：黄蜀葵花；阿霉素肾病；大鼠
中药黄蜀葵花对大鼠阿霉素肾病的作用 摘 要：目的 探讨中药黄蜀葵花治疗肾病综合征(NS)的作用。方法 应用阿霉素静脉注射法建立肾病大鼠模型，同时给予黄蜀葵花干预治疗，观察其对血浆蛋白、血脂及肾功能的影响。结果 黄蜀葵花可以明显提高NS大鼠血浆蛋白水平，降低NS大鼠明显增高的血脂水平。并明显改善NS大鼠尿钠排泄(UNaV)和内生肌酐清除率(Ccr)。结论 中药黄蜀葵花可以明显改善NS大鼠临床症状。黄蜀葵花的上述作用是改善NS大鼠临床症状的作用机制。
近年来在临床上应用中药黄蜀葵花及其提取物制剂治疗肾小球疾病，对改善水肿，降低蛋白尿等取得明显效果，但对其治疗机制的研究报道甚少。我们用阿霉素诱导NS大鼠模型，观察黄蜀葵花干预治疗后，血浆总蛋白、白蛋白、甘油三酯、胆固醇及肾功能改变的情况，以探讨黄蜀葵花对NS大鼠的治疗作用。
, 百拇医药
一、材料和方法
1.模型建立及分组
雄性SD大鼠，体重200g左右，随机分为三组：1、NS模型组n＝9。2、NS黄蜀葵花治疗组n＝9。3、正常对照组n＝10。NS模型采用阿霉素5.0mg/kg尾静脉注射法建立。黄蜀葵花治疗组给予黄蜀葵花冲剂2g/kg灌胃每日一次，共3周；其余两组给予等量生理盐水灌胃，阿霉素注射0，1，2，3周，分别于代谢笼内留24小时尿做蛋白定量、尿钠、尿肌酐测定。3周后，处死大鼠取血清测定肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、胆固醇(Tch)、甘油三酯水平(TG)。
2.观察项目及测定方法
(1)肾功能及生化检验：①内生肌酐清除率(Ccr)：尿肌酐浓度(U)×尿量(V/min)÷血肌酐浓度(单位为ml.min-1/100g体重)。②24小时尿蛋白定量(24hrUprV)：代谢笼收集24小时尿，用邻苯三酚红法测量。③24小时尿钠测定：用火焰光度计法。④血肌酐(Scr)用苦味酸法测定。⑤血尿素氮：尿素酶法。⑥血清甘油三酯浓度(TG)：酶法。⑦血清总胆固醇浓度(Tch)：酶法。
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(2)统计方法 实验数据采用
±s表示，组间比较采用t检验，以P<0.05有统计学意义。
二、结果
1.阿霉素注射后，1周、2周、3周NS大鼠蛋白尿水平逐渐加重，至实验结束时，模型组与正常对照组相比有显著差异(P<0.01)。见表1。黄蜀葵花治疗3周后的治疗组大鼠蛋白尿与模型组相比稍降低，但无统计学意义(P>0.05)，可能与服药时间短有关。阿霉素治疗3周后，查三组大鼠BUN、SCr，发现三组大鼠BUN、SCr均在正常范围，且相比无显著差异，见表1。但与正常对照组相比，NS组大鼠出现明显低蛋白血症及高脂血症(P<0.05)，提示NS模型的建立是成功的。采用黄蜀葵花灌胃治疗后，发现治疗组NS大鼠低蛋白血症及高脂血症明显改善，其中血浆白蛋白明显升高，见表2。
, 百拇医药
2.黄蜀葵花对Ccr、尿钠排泄及尿量的影响见表2
NS组大鼠Ccr、UNaV、UV均较正常对照组明显减少(P<0.05)，黄蜀葵花治疗组与模型组相比，Ccr、UNaV、UV均明显升高(P<0.05)。
表1 阿霉素注射三周后，三组大鼠BUN、Cr值及尿蛋白变化(±s)
BUN(mmol/L)
Cr(μmol/L)
24hrUprV(mg)
正常对照组
, 百拇医药
6.63±1.09
75.86±4.95
12.34±8.55
肾病组
5.81±1.78
69.62±17.25
50.99±22.62**
中药治疗组
6.58±1.14
72.33±11.19
42.92±18.35**
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与正常组比较 **P<0.01 表2 阿霉素注射三周及黄蜀葵花治疗后，三组大鼠血浆蛋白、血脂值、Ccr、及尿钠排泄结果(±s)
TP
(g/L)
Alb
(g/L)
Tch
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
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Ccr
(ml.min-1.100g-1)
UNaV
(μmol.min-1.100g-1)
UV
(μl.min-1.100g-1)
正常对照组
68.71±3.25
27.86±1.57
, 百拇医药
1.62±0.20
0.56±0.18
0.06±0.01
0.50±0.18
6.21±1.34
肾病组
48.75±3.91*
19.66±2.50*
4.62±1.50*
6.36±5.13*
0.01±0.005*
, 百拇医药
0.22±0.06*
4.12±2.02*
中药治疗组
59.22±5.47＃
23.11±1.16＃
2.57±1.41＃
3.09±1.59＃
0.05±0.04＃
0.48±0.15＃
8.93±2.10＃
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正常对照组与肾病组相比，P<0.05； ＃肾病组与中药治疗组相比，P<0.05 三、讨论
我们的实验结果表明黄蜀葵花能有效地增高肾病大鼠的血浆总蛋白水平，显著降低血脂水平，部分保护肾小球功能，但未能明显减少大量蛋白尿。
黄蜀葵花系锦葵科植物黄蜀葵(Abelmoschus manihotL.Medic)的干燥花。有文献报道[1，2]以该单味药制成的冲剂对慢性肾炎有很好疗效，但作用机制尚不清楚。近年来，从中药黄蜀葵花中分离出5种黄酮类成分[2]，分别鉴定为槲皮素-3-洋槐糖甙、槲皮素-3′-3葡萄糖甙、金丝桃甙、槲皮素及杨梅素。已知黄酮具有降低血浆黏度及抗血小板聚集作用，并能改变患者体内脂质含量[3]。黄蜀葵花降血脂的机制还不清楚，除了其直接作用于肝脏抑制胆固醇及甘油三酯的合成以外，可能的原因有，黄蜀葵花通过升高NS大鼠血浆白蛋白，使肝脏由于低蛋白血症而诱发的脂蛋白合成代偿性增加过程得到抑制，但由于黄蜀葵花升高白蛋白的程度还远没有达到正常水平值，上述机理可能仅起部分作用。多项研究证实，脂蛋白可刺激肾小球系膜增殖[4，5]，导致肾小球硬化，使肾脏损害进行性加重，同时使血浆白蛋白丢失增多，加剧低蛋白血症；低蛋白血症反过来又可刺激脂蛋白合成增多，造成恶性循环。黄蜀葵花通过纠正低蛋白血症、高脂血症所致的恶性循环，改善NS业已存在的高凝状态，延缓肾功能恶化。
, 百拇医药
有文献报道[6]阿霉素肾病的发病机理与氧自由基的作用和脂质过氧化对肾脏的损害有关，阿霉素在体内产生的自由基诱发了肾小球上皮细胞脂质过氧化反应，破坏了肾小球滤过膜的结构和功能，最终导致滤过屏障的选择性变化而致病。体外实验已证实[7]槲皮素可与超氧阴离子反应，阻止自由基反应的引发；和铁离子络合，阻止羟自由基形成；与脂质过氧化基(Roo)反应，阻止脂质过氧化过程，提高机体抗氧化能力，从而对阿霉素肾病有控制作用，延缓肾脏病变进一步发展。黄蜀葵花所含主要成分是以槲皮素为基本母核的黄酮类化合物[1]，通过抗氧化作用，可以阻遏NS氧自由基造成的肾功能损害，以保护肾脏。
本实验中发现，NS大鼠Ccr、UNaV、UV均较正常对照组明显减少，而黄蜀葵花治疗后，NS大鼠Ccr、UNaV、UV均有明显增加。业已表明黄蜀葵花有抗炎、利尿、消肿、解痉作用[8]；有实验已证实[9]槲皮素能抑制内皮素释放，从而发挥其扩张血管的作用。我们推测黄蜀葵花所含有效成分槲皮素能扩张周围血管、改善组织灌流，特别是肾血流灌注以达到改善肾血流动力学及利尿作用。不仅如此，我们还发现黄蜀葵花通过对NS大鼠肾小管Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用而发挥其利尿作用的机制[10]。黄蜀葵花对NS大鼠肾血流动力学的改善及肾脏排钠能力的提高，可以部分消除NS大鼠的水钠潴留，从而减轻水肿、改善临床症状。■
, http://www.100md.com
基金项目：为铁道部教卫司科学基金资助项目(TW97079)
参考文献：
[1]徐柏颐.薄层扫描法测定黄蜀葵花及其制剂中槲皮素的含量.南京中医药大学学报，1996(2)：32.
[2]王光荣.黄蜀葵花的化学成分研究.植物学报，1981，23(3)：222
[3]余传隆.中药辞海.北京：中国医药科技出版社，1993，2290.
[4]Moorhead JF，Chan MK，Johnson WK，et al.Lipid nephrotoxitity in chronic progressive glomerular and tubulointerstitial diseases.Lancet，1982，2：1309.
, 百拇医药
[5]Keane WF，Mulcahy WS，Richard JD，et al.Hyperlipidemia and progresive renal disease.Kidney Int，1991，39：S41.
[6]郑荣秀，田迎春，刘戈力，等.超氧化物歧化酶和维生素E对大鼠阿霉素肾病的防护作用.中华医学杂志，1996，76(6)：463.
[7]Afranasev IB，Dorozhko AL，Brodskii AV，et al.Chelating and free radical scavenging mechanism of inhibitory action of rutin and guercetin in lipid peroxiadtion.Biochem pharm.1989，38：1763.
[8]顾海珠，宋金斌.黄蜀葵花的研究进展.中药材.1998，21(3)：158.
[9]顾振伦，赵雪英.槲皮素对培养内皮细胞释放内皮素的影响.中国药理学报，1996，(5)：442.
[10]尹莲芳，濮家伉，钰祥，等.黄蜀葵花对阿霉素肾病大鼠钠潴留改善作用的机制.中华肾脏病杂志，1999，15：324-325.
收稿日期：1999-06-25
修稿日期：1999-08-14, http://www.100md.com
单位：尹莲芳(210009 南京铁道医学院附属医院肾科)
关键词：黄蜀葵花；阿霉素肾病；大鼠
中药黄蜀葵花对大鼠阿霉素肾病的作用 摘 要：目的 探讨中药黄蜀葵花治疗肾病综合征(NS)的作用。方法 应用阿霉素静脉注射法建立肾病大鼠模型，同时给予黄蜀葵花干预治疗，观察其对血浆蛋白、血脂及肾功能的影响。结果 黄蜀葵花可以明显提高NS大鼠血浆蛋白水平，降低NS大鼠明显增高的血脂水平。并明显改善NS大鼠尿钠排泄(UNaV)和内生肌酐清除率(Ccr)。结论 中药黄蜀葵花可以明显改善NS大鼠临床症状。黄蜀葵花的上述作用是改善NS大鼠临床症状的作用机制。
近年来在临床上应用中药黄蜀葵花及其提取物制剂治疗肾小球疾病，对改善水肿，降低蛋白尿等取得明显效果，但对其治疗机制的研究报道甚少。我们用阿霉素诱导NS大鼠模型，观察黄蜀葵花干预治疗后，血浆总蛋白、白蛋白、甘油三酯、胆固醇及肾功能改变的情况，以探讨黄蜀葵花对NS大鼠的治疗作用。
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一、材料和方法
1.模型建立及分组
雄性SD大鼠，体重200g左右，随机分为三组：1、NS模型组n＝9。2、NS黄蜀葵花治疗组n＝9。3、正常对照组n＝10。NS模型采用阿霉素5.0mg/kg尾静脉注射法建立。黄蜀葵花治疗组给予黄蜀葵花冲剂2g/kg灌胃每日一次，共3周；其余两组给予等量生理盐水灌胃，阿霉素注射0，1，2，3周，分别于代谢笼内留24小时尿做蛋白定量、尿钠、尿肌酐测定。3周后，处死大鼠取血清测定肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、胆固醇(Tch)、甘油三酯水平(TG)。
2.观察项目及测定方法
(1)肾功能及生化检验：①内生肌酐清除率(Ccr)：尿肌酐浓度(U)×尿量(V/min)÷血肌酐浓度(单位为ml.min-1/100g体重)。②24小时尿蛋白定量(24hrUprV)：代谢笼收集24小时尿，用邻苯三酚红法测量。③24小时尿钠测定：用火焰光度计法。④血肌酐(Scr)用苦味酸法测定。⑤血尿素氮：尿素酶法。⑥血清甘油三酯浓度(TG)：酶法。⑦血清总胆固醇浓度(Tch)：酶法。
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(2)统计方法 实验数据采用
±s表示，组间比较采用t检验，以P<0.05有统计学意义。二、结果
1.阿霉素注射后，1周、2周、3周NS大鼠蛋白尿水平逐渐加重，至实验结束时，模型组与正常对照组相比有显著差异(P<0.01)。见表1。黄蜀葵花治疗3周后的治疗组大鼠蛋白尿与模型组相比稍降低，但无统计学意义(P>0.05)，可能与服药时间短有关。阿霉素治疗3周后，查三组大鼠BUN、SCr，发现三组大鼠BUN、SCr均在正常范围，且相比无显著差异，见表1。但与正常对照组相比，NS组大鼠出现明显低蛋白血症及高脂血症(P<0.05)，提示NS模型的建立是成功的。采用黄蜀葵花灌胃治疗后，发现治疗组NS大鼠低蛋白血症及高脂血症明显改善，其中血浆白蛋白明显升高，见表2。
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2.黄蜀葵花对Ccr、尿钠排泄及尿量的影响见表2
NS组大鼠Ccr、UNaV、UV均较正常对照组明显减少(P<0.05)，黄蜀葵花治疗组与模型组相比，Ccr、UNaV、UV均明显升高(P<0.05)。
表1 阿霉素注射三周后，三组大鼠BUN、Cr值及尿蛋白变化(
±s)BUN(mmol/L)
Cr(μmol/L)
24hrUprV(mg)
正常对照组
, 百拇医药
6.63±1.09
75.86±4.95
12.34±8.55
肾病组
5.81±1.78
69.62±17.25
50.99±22.62**
中药治疗组
6.58±1.14
72.33±11.19
42.92±18.35**
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与正常组比较 **P<0.01 表2 阿霉素注射三周及黄蜀葵花治疗后，三组大鼠血浆蛋白、血脂值、Ccr、及尿钠排泄结果(
±s)TP
(g/L)
Alb
(g/L)
Tch
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
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Ccr
(ml.min-1.100g-1)
UNaV
(μmol.min-1.100g-1)
UV
(μl.min-1.100g-1)
正常对照组
68.71±3.25
27.86±1.57
, 百拇医药
1.62±0.20
0.56±0.18
0.06±0.01
0.50±0.18
6.21±1.34
肾病组
48.75±3.91*
19.66±2.50*
4.62±1.50*
6.36±5.13*
0.01±0.005*
, 百拇医药
0.22±0.06*
4.12±2.02*
中药治疗组
59.22±5.47＃
23.11±1.16＃
2.57±1.41＃
3.09±1.59＃
0.05±0.04＃
0.48±0.15＃
8.93±2.10＃
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正常对照组与肾病组相比，P<0.05； ＃肾病组与中药治疗组相比，P<0.05 三、讨论
我们的实验结果表明黄蜀葵花能有效地增高肾病大鼠的血浆总蛋白水平，显著降低血脂水平，部分保护肾小球功能，但未能明显减少大量蛋白尿。
黄蜀葵花系锦葵科植物黄蜀葵(Abelmoschus manihotL.Medic)的干燥花。有文献报道[1，2]以该单味药制成的冲剂对慢性肾炎有很好疗效，但作用机制尚不清楚。近年来，从中药黄蜀葵花中分离出5种黄酮类成分[2]，分别鉴定为槲皮素-3-洋槐糖甙、槲皮素-3′-3葡萄糖甙、金丝桃甙、槲皮素及杨梅素。已知黄酮具有降低血浆黏度及抗血小板聚集作用，并能改变患者体内脂质含量[3]。黄蜀葵花降血脂的机制还不清楚，除了其直接作用于肝脏抑制胆固醇及甘油三酯的合成以外，可能的原因有，黄蜀葵花通过升高NS大鼠血浆白蛋白，使肝脏由于低蛋白血症而诱发的脂蛋白合成代偿性增加过程得到抑制，但由于黄蜀葵花升高白蛋白的程度还远没有达到正常水平值，上述机理可能仅起部分作用。多项研究证实，脂蛋白可刺激肾小球系膜增殖[4，5]，导致肾小球硬化，使肾脏损害进行性加重，同时使血浆白蛋白丢失增多，加剧低蛋白血症；低蛋白血症反过来又可刺激脂蛋白合成增多，造成恶性循环。黄蜀葵花通过纠正低蛋白血症、高脂血症所致的恶性循环，改善NS业已存在的高凝状态，延缓肾功能恶化。
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有文献报道[6]阿霉素肾病的发病机理与氧自由基的作用和脂质过氧化对肾脏的损害有关，阿霉素在体内产生的自由基诱发了肾小球上皮细胞脂质过氧化反应，破坏了肾小球滤过膜的结构和功能，最终导致滤过屏障的选择性变化而致病。体外实验已证实[7]槲皮素可与超氧阴离子反应，阻止自由基反应的引发；和铁离子络合，阻止羟自由基形成；与脂质过氧化基(Roo)反应，阻止脂质过氧化过程，提高机体抗氧化能力，从而对阿霉素肾病有控制作用，延缓肾脏病变进一步发展。黄蜀葵花所含主要成分是以槲皮素为基本母核的黄酮类化合物[1]，通过抗氧化作用，可以阻遏NS氧自由基造成的肾功能损害，以保护肾脏。
本实验中发现，NS大鼠Ccr、UNaV、UV均较正常对照组明显减少，而黄蜀葵花治疗后，NS大鼠Ccr、UNaV、UV均有明显增加。业已表明黄蜀葵花有抗炎、利尿、消肿、解痉作用[8]；有实验已证实[9]槲皮素能抑制内皮素释放，从而发挥其扩张血管的作用。我们推测黄蜀葵花所含有效成分槲皮素能扩张周围血管、改善组织灌流，特别是肾血流灌注以达到改善肾血流动力学及利尿作用。不仅如此，我们还发现黄蜀葵花通过对NS大鼠肾小管Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用而发挥其利尿作用的机制[10]。黄蜀葵花对NS大鼠肾血流动力学的改善及肾脏排钠能力的提高，可以部分消除NS大鼠的水钠潴留，从而减轻水肿、改善临床症状。■
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参考文献：
[1]徐柏颐.薄层扫描法测定黄蜀葵花及其制剂中槲皮素的含量.南京中医药大学学报，1996(2)：32.
[2]王光荣.黄蜀葵花的化学成分研究.植物学报，1981，23(3)：222
[3]余传隆.中药辞海.北京：中国医药科技出版社，1993，2290.
[4]Moorhead JF，Chan MK，Johnson WK，et al.Lipid nephrotoxitity in chronic progressive glomerular and tubulointerstitial diseases.Lancet，1982，2：1309.
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[5]Keane WF，Mulcahy WS，Richard JD，et al.Hyperlipidemia and progresive renal disease.Kidney Int，1991，39：S41.
[6]郑荣秀，田迎春，刘戈力，等.超氧化物歧化酶和维生素E对大鼠阿霉素肾病的防护作用.中华医学杂志，1996，76(6)：463.
[7]Afranasev IB，Dorozhko AL，Brodskii AV，et al.Chelating and free radical scavenging mechanism of inhibitory action of rutin and guercetin in lipid peroxiadtion.Biochem pharm.1989，38：1763.
[8]顾海珠，宋金斌.黄蜀葵花的研究进展.中药材.1998，21(3)：158.
[9]顾振伦，赵雪英.槲皮素对培养内皮细胞释放内皮素的影响.中国药理学报，1996，(5)：442.
[10]尹莲芳，濮家伉，钰祥，等.黄蜀葵花对阿霉素肾病大鼠钠潴留改善作用的机制.中华肾脏病杂志，1999，15：324-325.
收稿日期：1999-06-25
修稿日期：1999-08-14, http://www.100md.com