卵巢癌多药耐药基因表达的临床研究
作者：周琦 徐建业 朱晓玲 卢萍
单位：重庆市肿瘤医院 400030
关键词：卵巢癌 多药耐药 基因表达
重庆医学000106
摘 要：目的：探讨多药耐药基因(MDR1)阳性表达与卵巢恶性肿瘤耐药产生、化疗疗效及生存率的关系。方法：应用逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)检测29例卵巢恶性肿瘤组织标本MDR1阳性表达，并用β2微球蛋白(β2M)基因作内对照，对29例卵巢恶性肿瘤患者术后化疗疗效观察及生存率进行随访。结果：卵巢恶性肿瘤手术切除组织标本MDR1阳性表达为55.2%，其中术前化疗的病例为5例，占MDR1阳性表达的31.3%。MDR1阳性表达在患者年龄、临床期别、病理类型及分化程度等方面差异无显著性。在化疗有效组中，MDR1阳性表达和MDR1阴性分别为43.8%和84.6%，MDR1阴性和MDR1阳性表达的5年生存率分别为46.2%和6.3%，两者差异均有显著性。结论：卵巢恶性肿瘤组织中MDR1阳性表达与临床化疗耐药有关，并影响其生存率，MDR1检测可作为判断恶性肿瘤预后的客观指标之一。
, 百拇医药
Clinical Research for Multidrug Resistance Gene Expression in Ovarian Carcinoma
Zhou Qi,Xu Jianye,Zhu Xiaoling, Lu Ping
Chongqing Tumour Hospital,Chongqing，400030
Abstract：Objectives:To investigate the relationship between multidrug resistance gene(MDR1) expression and drug resistance to chemotherapy and survival rate of ovarian carcinoma. Methods: The reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)was used to detect MDR1 mRNA in ovarian carcinoma biopsy samples of 29 cases. The chemotherapy effects and survival rate of 29 cases were observed.Results: The rate of MDR1 expression in ovarian carcinomas was 55.2%.Five of 29 cases had presurgical chemotherapy accounting for 31.1% of cases with positive MDR1 expression.No signifcant correlation was observed between the positive rate of MDR1 expression and clinical stages,pathological types and pathological differentiation.Positive and negative MDR1 gene expression were 43.8% and 84.6% in chemotherpy efficiency cases and 5 year survival rates were 46.2% and 6.3% in MDR1(-)and MDR1(+) group respectively. Conclusions：The over-expression of MDR1 was correlated with drug resistance of clinical chemotherapy,curative effect and survival rate in ovarian cancer.The over-expression of MDR1 in ovarian carcinoma may be used as an objective index of predicting prognosis.
, 百拇医药
Key Word：Ovarian cancer MDR1 Gene expression
化疗是治疗卵巢恶性肿瘤的重要手段之一。随着化疗方案的不断改进和新抗癌药的使用，化疗疗效虽有所提高，但仍有相当一部分患者因化疗不敏感，导致化疗失败，其主要原因是对化疗药物的耐药。近年来的研究表明，肿瘤多药耐药基因(MDR1)的阳性表达可产生化疗耐药，化疗耐药可能会影响卵巢恶性肿瘤的生存率[1，5]。我们用逆转录―多聚酶链反应(RT-PCR)检测卵巢恶性肿瘤MDR1基因表达，并对其化疗疗效和生存率进行观察随访，旨在探讨MDR1表达与化疗疗效及肿瘤预后的关系，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象：研究病例均系我院1993年2月～1994年6月间住院患者，共计29例，均为卵巢恶性肿瘤，全部病例以病理学诊断为准。其中卵巢上皮癌26例，非上皮癌3例。临床期别，Ⅰ、Ⅱ期11例，Ⅲ、Ⅳ期18例。
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1.2 MDR1表达的检测：将手术时无菌新鲜肿瘤组织标本取材后，立即存放于-70℃冰箱待检。采用热酚法提取组织总RHA，紫外光分光光度仪测定OD260、OD280值，对总RNA纯度及RNA定量分析。用逆转录酶按随机六聚脱氧核糖核酸引物法合成CDNA，PCR法扩增，并用溴乙啶染色后紫外光透视下观察进行结果判定，以β2微球蛋白(β2M)基因作内对照。
1.3 治疗方法：29例均采用手术加化疗的治疗方法，其中5例术前行静脉或腹腔化疗，29例中术后化疗>6疗程的25例，<6疗程的4例，化疗以CAP方案为主，生殖细胞肿瘤以VBP方案化疗。29例均行最大限度肿瘤细胞减灭术，术后残存肿瘤<2cm24例，>2cm25例。
1.4 疗效评定与随访：疗效评定按国际癌症联盟(UICC)标准[2]，全部病例均随访,随访率100%，按生命表法计算生存率。
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1.5 统计学处理：采用卡方检验。
2 结 果
2.1 MDR1阳性表达与临床的关系：29例卵巢恶性肿瘤MDR1阳性表达为55.2%，对MDR1阳性表达和MDR1阴性两组的主要临床特征进行比较，两组在年龄、临床期别、病理类型及分化、残存肿瘤大小、化疗疗程数之间无差异，见表1。MDR1阳性表达中有5例于术前曾给予不同方式的化疗，占MDR1阳性表达的31.3%。
表1 MDR1(+)与MDR1(-)临床特征比较 临床特征
MDR1(+)
MDR1(-)
, http://www.100md.com
P
中位年龄(岁)
47.5
49
期别
Ⅰ、Ⅱ期
5
6
Ⅲ、Ⅳ期
11
7
>0.05
病理类型
, 百拇医药
上皮癌
14
12
内胚窦癌
1
0
>0.05
透明细胞癌
1
1
分化程度
低
9
7
, 百拇医药
中
5
5
>0.05
高
2
1
残存肿瘤大小
≤2.0cm
13
11
>2.0cm
3
, http://www.100md.com 2
>0.05
化疗疗程数
≤6疗程
3
4
>6疗程
13
9
>0.05
术前化疗
5
0
2.2 MDR1表达与化疗近期疗效的关系：将术后化疗缓解与部分缓解视为有效，MDR1阳性表达与MDR1阴性的化疗近期疗效见表2，其MDR1阳性表达与MDR1阴性组化疗疗效比较，差异有显著性(P<0.05)。表2 MDR1表达与疗效的关系 疗 效
, 百拇医药
MDR1(+)
MDR1(-)
P
化疗有效
43.8%(7/16)
84.6%(11/13)
<0.05
化疗无效
56.2%(9/16)
15.4%(2/13)
<0.05
总计(例)
, 百拇医药
16
13
2.3 MDR1表达与生存率的关系：29例病例我们均进行随访，本组总的1年生存率为72.4%(21/29)。3年生存率为44.8%(13/29)，5年生存率为24.1%(7/29)，MDR1阳性表达与MDR1阴性的生存率比较见图1所示，其1年生存率分别为62.5%、84.6%，3年生存率分别为25%、69.2%，5年生存率分别为6.3%、46.2%，其差异有显著性(P<0.05)。
图1 MDR1表达与生存率的关系(―MDR1阴性，MDR1阳性，总生丰率)
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 卵巢恶性肿瘤MDR1的阳性表达：人类肿瘤多药耐药基因家族由MDR1和MDR3组成，文献表明，主要是MDR1过度表达与肿瘤耐药性有关[3、4]，MDR1编码分子量为17万道尔顿的一种细胞膜蛋白，其过度表达能降低细胞内有效的药物浓度，是导致肿瘤耐药的主要原因之一。卵巢癌细胞MDR1阳性表达已被证实，我们应用PT-PCR检测卵巢恶性肿瘤组织中的MDR1，并采用β2M基因作内对照，减少了PCR反应体系中各种因素的影响，结果可靠。本组病例为肿瘤组织取样，其MDR1阳性表达率55.2%，与Tatyana等的研究报道的结果相似[4]。目前卵巢癌MDR1阳性表达率差异较大，可能与取材部位有关，而与临床期别和组织病理类型无关。
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3.2 MDR1表达与化疗疗效的关系：卵巢癌的化疗疗效受多种因素的影响，普遍认为与病理类型、残存肿瘤的大小、化疗药剂量及疗程有关，但化疗耐药是影响疗效的又一重要因素。对于化疗耐药问题，目前仍集中在MDR1阳性表达以及其他因素如谷胱甘肽-S-转移酶，DNA拓扑异构酶等的研究。本组观察表明，MDR1阴性与MDR1阳性表达与化疗疗效存在明显的相关性，其中MDR1阳性表达中有5例为检测前进行过化疗，占本组MDR1阳性表达的31.3%，提示化疗可诱导产生耐药，即诱导生成MDR1，亦可以解释卵巢癌在化疗过程中的开始几个疗程有效，多个疗程后则疗效降低，即产生耐药。也提示临床可通过MDR1检测及逆转方法研究以指导其用药，减少耐药发生，提高化疗疗效是切实可行的方法。未经化疗的卵巢恶性肿瘤患者仍有MDR1基因表达，说明MDR1基因表达除诱导产生外还有相当一部分为卵巢恶性肿瘤所固有的表达，由于MDR1基因在同一病理类型，同一临床期别的卵巢恶性肿瘤组织中的表达不同，从而导致其疗效的差异。因此，筛选诱导产生MDR1基因的药物和逆转MDR1阳性表达是提高化疗疗效的有效途径，值得深入研究。
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3.3 MDR1阳性表达与预后的关系：影响卵巢恶性肿瘤的预后因素很多，通常与患者的经济状况、是否彻底手术以及化疗疗程数有关，但目前对其预后没有客观的监测指标，有学者对白血病、淋巴瘤等血液系统疾病MDR1阳性表达的研究中发现，MDR1阳性表达为白血病不良预后因素[6、7]。本组结果也显示MDR1阴性与MDR1阳性表达5年生存率分别为46.2%和6.3%，说明MDR1阳性表达不但与产生化疗耐药有关，还提示MDR1阳性表达患者预后不良。因此，检测卵巢恶性肿瘤患者肿瘤组织中MDR1，可以为临床合理选用化疗药物提供依据，MDR1表达亦可望成为判断其预后的客观指标之一。
参考文献
[1]Johnson SW,Oyols RF.Mechanisms of drug resistance in ovarian cancer. Cancer,1993,71:644
, http://www.100md.com
[2]Miller AB,Hoogestraten B,Stacuet M,et al. Reporting results of cancer treatment.Cancer，1981,47:27
[3]Nonan KB,Beck C,Holgmayer TA,et al.Quantitative analysis of MDR1(Multidrug resistance)gene expression in human tumor by polymerase chain reaction.Pro Natl Acad Sci USA,1990,87:1160
[4]徐建业，周琦，沈平，等.用逆转录―多聚酶链反应检测卵巢癌及大肠癌患者多药耐药基因的表达.重庆医药，1997，26：7
[5]Holgmayer TA,Hilsenbeck S,Von Hoff DD,et al.Clinical correlation of MDR1(P-glycoprotein)gene expression in ovarian and small-cell lung carcinomas.J Natl Cancer lnst,1992,84:1484
[6]Pirker R,Wallner J.MDR1 RNA expression is an independent Prognostic factor in acute myeloid leukemia.Blood,1992,80:557
[7]Campos L,Guyotat D,Fiere D,et al.Clinical significance of multidrug resistance P-glycoprotein(P170)expression to acute lymphoblastic leukemia cell at diagnosis.Blood,1992,79:473, http://www.100md.com
单位：重庆市肿瘤医院 400030
关键词：卵巢癌 多药耐药 基因表达
重庆医学000106
摘 要：目的：探讨多药耐药基因(MDR1)阳性表达与卵巢恶性肿瘤耐药产生、化疗疗效及生存率的关系。方法：应用逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)检测29例卵巢恶性肿瘤组织标本MDR1阳性表达，并用β2微球蛋白(β2M)基因作内对照，对29例卵巢恶性肿瘤患者术后化疗疗效观察及生存率进行随访。结果：卵巢恶性肿瘤手术切除组织标本MDR1阳性表达为55.2%，其中术前化疗的病例为5例，占MDR1阳性表达的31.3%。MDR1阳性表达在患者年龄、临床期别、病理类型及分化程度等方面差异无显著性。在化疗有效组中，MDR1阳性表达和MDR1阴性分别为43.8%和84.6%，MDR1阴性和MDR1阳性表达的5年生存率分别为46.2%和6.3%，两者差异均有显著性。结论：卵巢恶性肿瘤组织中MDR1阳性表达与临床化疗耐药有关，并影响其生存率，MDR1检测可作为判断恶性肿瘤预后的客观指标之一。
, 百拇医药
Clinical Research for Multidrug Resistance Gene Expression in Ovarian Carcinoma
Zhou Qi,Xu Jianye,Zhu Xiaoling, Lu Ping
Chongqing Tumour Hospital,Chongqing，400030
Abstract：Objectives:To investigate the relationship between multidrug resistance gene(MDR1) expression and drug resistance to chemotherapy and survival rate of ovarian carcinoma. Methods: The reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)was used to detect MDR1 mRNA in ovarian carcinoma biopsy samples of 29 cases. The chemotherapy effects and survival rate of 29 cases were observed.Results: The rate of MDR1 expression in ovarian carcinomas was 55.2%.Five of 29 cases had presurgical chemotherapy accounting for 31.1% of cases with positive MDR1 expression.No signifcant correlation was observed between the positive rate of MDR1 expression and clinical stages,pathological types and pathological differentiation.Positive and negative MDR1 gene expression were 43.8% and 84.6% in chemotherpy efficiency cases and 5 year survival rates were 46.2% and 6.3% in MDR1(-)and MDR1(+) group respectively. Conclusions：The over-expression of MDR1 was correlated with drug resistance of clinical chemotherapy,curative effect and survival rate in ovarian cancer.The over-expression of MDR1 in ovarian carcinoma may be used as an objective index of predicting prognosis.
, 百拇医药
Key Word：Ovarian cancer MDR1 Gene expression
化疗是治疗卵巢恶性肿瘤的重要手段之一。随着化疗方案的不断改进和新抗癌药的使用，化疗疗效虽有所提高，但仍有相当一部分患者因化疗不敏感，导致化疗失败，其主要原因是对化疗药物的耐药。近年来的研究表明，肿瘤多药耐药基因(MDR1)的阳性表达可产生化疗耐药，化疗耐药可能会影响卵巢恶性肿瘤的生存率[1，5]。我们用逆转录―多聚酶链反应(RT-PCR)检测卵巢恶性肿瘤MDR1基因表达，并对其化疗疗效和生存率进行观察随访，旨在探讨MDR1表达与化疗疗效及肿瘤预后的关系，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象：研究病例均系我院1993年2月～1994年6月间住院患者，共计29例，均为卵巢恶性肿瘤，全部病例以病理学诊断为准。其中卵巢上皮癌26例，非上皮癌3例。临床期别，Ⅰ、Ⅱ期11例，Ⅲ、Ⅳ期18例。
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1.2 MDR1表达的检测：将手术时无菌新鲜肿瘤组织标本取材后，立即存放于-70℃冰箱待检。采用热酚法提取组织总RHA，紫外光分光光度仪测定OD260、OD280值，对总RNA纯度及RNA定量分析。用逆转录酶按随机六聚脱氧核糖核酸引物法合成CDNA，PCR法扩增，并用溴乙啶染色后紫外光透视下观察进行结果判定，以β2微球蛋白(β2M)基因作内对照。
1.3 治疗方法：29例均采用手术加化疗的治疗方法，其中5例术前行静脉或腹腔化疗，29例中术后化疗>6疗程的25例，<6疗程的4例，化疗以CAP方案为主，生殖细胞肿瘤以VBP方案化疗。29例均行最大限度肿瘤细胞减灭术，术后残存肿瘤<2cm24例，>2cm25例。
1.4 疗效评定与随访：疗效评定按国际癌症联盟(UICC)标准[2]，全部病例均随访,随访率100%，按生命表法计算生存率。
, http://www.100md.com
1.5 统计学处理：采用卡方检验。
2 结 果
2.1 MDR1阳性表达与临床的关系：29例卵巢恶性肿瘤MDR1阳性表达为55.2%，对MDR1阳性表达和MDR1阴性两组的主要临床特征进行比较，两组在年龄、临床期别、病理类型及分化、残存肿瘤大小、化疗疗程数之间无差异，见表1。MDR1阳性表达中有5例于术前曾给予不同方式的化疗，占MDR1阳性表达的31.3%。
表1 MDR1(+)与MDR1(-)临床特征比较 临床特征
MDR1(+)
MDR1(-)
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P
中位年龄(岁)
47.5
49
期别
Ⅰ、Ⅱ期
5
6
Ⅲ、Ⅳ期
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>0.05
病理类型
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上皮癌
14
12
内胚窦癌
1
0
>0.05
透明细胞癌
1
1
分化程度
低
9
7
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中
5
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>0.05
高
2
1
残存肿瘤大小
≤2.0cm
13
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>2.0cm
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>0.05
化疗疗程数
≤6疗程
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>6疗程
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术前化疗
5
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2.2 MDR1表达与化疗近期疗效的关系：将术后化疗缓解与部分缓解视为有效，MDR1阳性表达与MDR1阴性的化疗近期疗效见表2，其MDR1阳性表达与MDR1阴性组化疗疗效比较，差异有显著性(P<0.05)。表2 MDR1表达与疗效的关系 疗 效
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MDR1(+)
MDR1(-)
P
化疗有效
43.8%(7/16)
84.6%(11/13)
<0.05
化疗无效
56.2%(9/16)
15.4%(2/13)
<0.05
总计(例)
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16
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2.3 MDR1表达与生存率的关系：29例病例我们均进行随访，本组总的1年生存率为72.4%(21/29)。3年生存率为44.8%(13/29)，5年生存率为24.1%(7/29)，MDR1阳性表达与MDR1阴性的生存率比较见图1所示，其1年生存率分别为62.5%、84.6%，3年生存率分别为25%、69.2%，5年生存率分别为6.3%、46.2%，其差异有显著性(P<0.05)。
图1 MDR1表达与生存率的关系(―MDR1阴性，MDR1阳性，总生丰率)
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3 讨 论
3.1 卵巢恶性肿瘤MDR1的阳性表达：人类肿瘤多药耐药基因家族由MDR1和MDR3组成，文献表明，主要是MDR1过度表达与肿瘤耐药性有关[3、4]，MDR1编码分子量为17万道尔顿的一种细胞膜蛋白，其过度表达能降低细胞内有效的药物浓度，是导致肿瘤耐药的主要原因之一。卵巢癌细胞MDR1阳性表达已被证实，我们应用PT-PCR检测卵巢恶性肿瘤组织中的MDR1，并采用β2M基因作内对照，减少了PCR反应体系中各种因素的影响，结果可靠。本组病例为肿瘤组织取样，其MDR1阳性表达率55.2%，与Tatyana等的研究报道的结果相似[4]。目前卵巢癌MDR1阳性表达率差异较大，可能与取材部位有关，而与临床期别和组织病理类型无关。
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3.2 MDR1表达与化疗疗效的关系：卵巢癌的化疗疗效受多种因素的影响，普遍认为与病理类型、残存肿瘤的大小、化疗药剂量及疗程有关，但化疗耐药是影响疗效的又一重要因素。对于化疗耐药问题，目前仍集中在MDR1阳性表达以及其他因素如谷胱甘肽-S-转移酶，DNA拓扑异构酶等的研究。本组观察表明，MDR1阴性与MDR1阳性表达与化疗疗效存在明显的相关性，其中MDR1阳性表达中有5例为检测前进行过化疗，占本组MDR1阳性表达的31.3%，提示化疗可诱导产生耐药，即诱导生成MDR1，亦可以解释卵巢癌在化疗过程中的开始几个疗程有效，多个疗程后则疗效降低，即产生耐药。也提示临床可通过MDR1检测及逆转方法研究以指导其用药，减少耐药发生，提高化疗疗效是切实可行的方法。未经化疗的卵巢恶性肿瘤患者仍有MDR1基因表达，说明MDR1基因表达除诱导产生外还有相当一部分为卵巢恶性肿瘤所固有的表达，由于MDR1基因在同一病理类型，同一临床期别的卵巢恶性肿瘤组织中的表达不同，从而导致其疗效的差异。因此，筛选诱导产生MDR1基因的药物和逆转MDR1阳性表达是提高化疗疗效的有效途径，值得深入研究。
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3.3 MDR1阳性表达与预后的关系：影响卵巢恶性肿瘤的预后因素很多，通常与患者的经济状况、是否彻底手术以及化疗疗程数有关，但目前对其预后没有客观的监测指标，有学者对白血病、淋巴瘤等血液系统疾病MDR1阳性表达的研究中发现，MDR1阳性表达为白血病不良预后因素[6、7]。本组结果也显示MDR1阴性与MDR1阳性表达5年生存率分别为46.2%和6.3%，说明MDR1阳性表达不但与产生化疗耐药有关，还提示MDR1阳性表达患者预后不良。因此，检测卵巢恶性肿瘤患者肿瘤组织中MDR1，可以为临床合理选用化疗药物提供依据，MDR1表达亦可望成为判断其预后的客观指标之一。
参考文献
[1]Johnson SW,Oyols RF.Mechanisms of drug resistance in ovarian cancer. Cancer,1993,71:644
, http://www.100md.com
[2]Miller AB,Hoogestraten B,Stacuet M,et al. Reporting results of cancer treatment.Cancer，1981,47:27
[3]Nonan KB,Beck C,Holgmayer TA,et al.Quantitative analysis of MDR1(Multidrug resistance)gene expression in human tumor by polymerase chain reaction.Pro Natl Acad Sci USA,1990,87:1160
[4]徐建业，周琦，沈平，等.用逆转录―多聚酶链反应检测卵巢癌及大肠癌患者多药耐药基因的表达.重庆医药，1997，26：7
[5]Holgmayer TA,Hilsenbeck S,Von Hoff DD,et al.Clinical correlation of MDR1(P-glycoprotein)gene expression in ovarian and small-cell lung carcinomas.J Natl Cancer lnst,1992,84:1484
[6]Pirker R,Wallner J.MDR1 RNA expression is an independent Prognostic factor in acute myeloid leukemia.Blood,1992,80:557
[7]Campos L,Guyotat D,Fiere D,et al.Clinical significance of multidrug resistance P-glycoprotein(P170)expression to acute lymphoblastic leukemia cell at diagnosis.Blood,1992,79:473, http://www.100md.com