口腔粘膜下纤维性变微血管形态定量分析
作者：方厂云 韩为农 冯德云
单位：方厂云(附属湘雅医院口腔医学系 长沙 410008)；韩为农(附属湘雅医院口腔医学系 长沙 410008)；冯德云(病理学教研室 长沙 410078)
关键词：口腔粘膜下纤维性变；微血管；免疫组织化学；形态计量学；病理学
湖南医科大学学报000119 摘 要：以CD34为标志物对27例早、中、晚 期口腔粘膜下纤维性变(OSF)组织中的微血管作免疫组化染色，并采用微机图像分析系统 定量检测了微血管计数、数密度、微血管面积和面密度。结果表明：OSF组织中，早期微血 管增生；中、晚期微血管数量减少、面积缩小；对其发生的病理机制进行了分析。
分类号：R781.5 文献标识码：A
文章编号：1000-5625(2000)01-0055-03
, http://www.100md.com
A morphometric study on the microvessel in oral submucous fibrosis
FANG Chang-yun, HAN Wei-nong
(Oral Faculty, Xiangya Hospital, Hunan Medical University Changsha 410008)
FONG Dei-yun
(Department of Pathology, Hunan Medical University Changsha 410078)
Abstract：To investigate the pathologic change of the m icrove ssel in oral submucoous fibrosis(OSF), the pathologic buccal tissues of 27 patie nts with OSF were studied by using immunochemical method. Microvessel q uantity(M VQ), quantity density(QD), microvessel area(MVA) and area density(AD) were deter mined by means of computer-aided image analysis system. The results showed the increase in MVQ and QD in the early stage and the decrease in MVQ, Q D, MVA and A D in the middle stage and the late stage. The authors concluded tha t presence of microvessel hyperplasia occurred in the early stage of OSF.
, 百拇医药
Key words：oral submucous fibrosis;microvessel;immunohis tochemistry;morphometry; pathology▲
口腔粘膜下纤维性变(oral submucous fibrosis , OSF)主要是因长期咀嚼槟榔所致，其致病机制尚不清楚。本科既往的研究表明，微血管 (Mic rovessel, MV)的病理损伤可能在OSF发病机制中具有重要的意义[2]。本研 究应用 免疫组化方法对OSF组织中的MV进行了定量分析，以探讨MV在OSF发生、发展过程中 的变化规 律。
1 材料与方法
1.1 标本收集及分期 27例OSF颊粘膜病变组织来源于我系口腔粘膜病专科 门诊及口腔病理学教研室；按Pindborg的OSF病理学分期标准[1]，经病理学确诊 并分期；其中早期11例，中期9例，晚期7例。8例正常颊粘膜对照取自无嚼槟榔、烟酒嗜好 ，身体健康的自愿者。上述常规制作石蜡切片，厚4μm，分别作HE和MV染色。
, 百拇医药
1.2 免疫组化染色及图像分析 鼠抗人CD34单克隆抗体、SP试剂盒及DAB均 购自福州迈新公司。MV染色方法均为常规SP法，每次染色设置阳性及阴性对照。MV染色后 呈 棕黄色至深棕黄色。采用北航一会凌Cmias-98型彩色图像分析仪，在10×10倍镜下选择 3个 血管密度最高区域对染色面积定量测定，测出微血管计数(MVQ)，微血管面积(MVA)，及 其面 密度(AD)，数密度(QD)。
1.3 统计学处理 求出每个样本的各项指标的均数，以均数±标准差(
±s)表示。对每项指标的各样本数据进行方差检验，作组间Newmankeuls法q检 验或组间秩和检验。
2 结 果
OSF样本中的MVQ及QD在早期显著增多，中、晚期则逐渐减少；MVA及AD在早期无显著变化 ， 中、晚期逐渐减少；MVA/MVQ值早期无显著变化，中期、晚期则减少(图1～4，附表)。
, 百拇医药
附图 颊粘膜组织中微血管CD34免疫组化染色(SP×100 ) 1. 正常颊粘膜组织 2.OSF早期组织中MVQ和QD较正常颊粘膜组织增加 3.OSF中期组织中 MVQ，MV A，AD，QD和MVA/MVP较早期减少 4.OSF晚期组织中MVQ，MVA，AD和QD较中期减少
Fig. Immunostaining for CD34 being positive in the micr ovesse l of buccal mucous membrane(SP×100) 1.The normal buccal mucous tissue 2.OSF,MV Q and QD of early stage on it was more than on Fig.1 3.OSF,MVQ,MVA,AD, QD and MV A /MVQ of middle stage on it was less than that on Fig.2 4.OSF,MVQ,MV A,AD and QD of late stage on it was less than that on Fig.3
, 百拇医药
附表 OSF的微血管免疫组化图像分析(±s) 分期
例数
MVQ
MVA
AD
QD
MVA/MVQ
对照
8
158.62±45.63
1.25±5.14
, 百拇医药
0 .054±0.025
0.755±0.217
0.071±0.033
早期
11
247.63±30.47②
13.74±4.32③
0.065±0.020 ③
1.184±0.143②
0.055±0.013③
, 百拇医药
中期
9
200.78±62.98①
8.53±3.26②
0 .040±0.016①
0.956±0.300①
0.042±0.011①
晚期
7
86.14±24.38②
, 百拇医药 4.01±1.18 ②
0.019±0.006②
0.409±0.116②
0.052±0.032③
各项指标分别进行对照/早期、早期/中期及中期/晚期两两比较，①P<0.05；②P <0.01；③P<0.05
3 讨 论
MV染色方法有多种，近来人们发现人原造血细胞抗原(human hematopoietic progenitor ce ll antigen, CD34)的单克隆抗体免疫组化染色MV可获得很好的结果，所染MV阳性表达率高 ，染色强度明显强于FⅧRAg，且背景较FⅧRAg清晰，易于判断[3]。本研究采用 单 克隆抗体及SP免疫组化的方法染色OSF组织中MV，获得了很好的效果。
, http://www.100md.com
OSF的发病机制至今仍未明了，OSF微血管病理损伤可能在发病机制中具有重要意义[2 ，4]。本研究采用微机图像分析系统定量分析早、中、晚期OSF组织中的微血管病理变 化，国内外尚未见报道。结果表明：OSF早期微血管增生，至中、晚期血管数逐渐减少、血 管腔面积逐渐缩小。由于OSF中、晚期组织过度纤维化，导致了血管数减少、血管腔缩小。 但早期微血管增生可能为：OSF早期微血管内皮细胞损伤，血管扩张，通透性增加，血管外 围组织水肿，炎性细胞浸润，血浆漏出和纤维蛋白沉积激活凝血机制，局部组织发生慢性 弥 散性血管内凝血(DIC)综合征，至局部组织贫血[4，5]。缺血组织由于氧的张 力 梯度调节巨噬细胞表达“血管生成因子”，它既增加组织的血液灌注，也加快了微血管 再生 [6，7]。因此，OSF早期微血管增生可能是局部组织缺血后的一种代偿反应 的结 果，但也不排除槟榔混合物相关成分直接刺激所致。其确切机制尚需进一步研究。
基金项目：国家自然科学基金资项目(39470751)
, http://www.100md.com
作者简介：方厂云(1965-)，国，副教授
参考文献：
[1]Pindborg JJ. Oral submucous fibrosias[J]. Oral Surg, 1 966,22:764-767.
[2]方厂云，翦新春，陈新群，等.口腔粘膜下纤维性变的微血管病理损伤[J].中国现代医学杂志，1996，6(6)：72-73.
[3]施作霖，胡时光，沈金辉，等.CD34和第Ⅷ因子相关抗原在血管源性肿瘤中的诊断意义[J].中华病理学杂志，1998，27(2)：101.
[4]Phatak AG. Oral submucous fibrosis-a chronic dissemination intravascular coagulation syndrome with local coagulpathy[J]. Gut, 1993,34(5):713.
, 百拇医药
[5]Phatak AG. Hyper coagulation and fibrinolysis in oral submucous fibrosis [J]. Am J Clin Pathol, 1984,81:623-628.
[6]Stark GB, Hong C, Futreu JW. Enhanced neovascularization of rat tubed ped icle flaps with low perfusion of the wound margin[J]. Plast Reconstr Surg, 198 7,80:814-824.
[7]Baffour R, Berman J, Garb JL, et al. Enhanced angiogenesis and growth collaterals by in vivo adminstration of recombinant bFGF in a rabbit model of acute lower limb ischemia: dose-reponse effect of bFGF[J]. J Vase Surg, 1992, 16:181-191.
收稿日期：1999-04-07, 百拇医药
单位：方厂云(附属湘雅医院口腔医学系 长沙 410008)；韩为农(附属湘雅医院口腔医学系 长沙 410008)；冯德云(病理学教研室 长沙 410078)
关键词：口腔粘膜下纤维性变；微血管；免疫组织化学；形态计量学；病理学
湖南医科大学学报000119 摘 要：以CD34为标志物对27例早、中、晚 期口腔粘膜下纤维性变(OSF)组织中的微血管作免疫组化染色，并采用微机图像分析系统 定量检测了微血管计数、数密度、微血管面积和面密度。结果表明：OSF组织中，早期微血 管增生；中、晚期微血管数量减少、面积缩小；对其发生的病理机制进行了分析。
分类号：R781.5 文献标识码：A
文章编号：1000-5625(2000)01-0055-03
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A morphometric study on the microvessel in oral submucous fibrosis
FANG Chang-yun, HAN Wei-nong
(Oral Faculty, Xiangya Hospital, Hunan Medical University Changsha 410008)
FONG Dei-yun
(Department of Pathology, Hunan Medical University Changsha 410078)
Abstract：To investigate the pathologic change of the m icrove ssel in oral submucoous fibrosis(OSF), the pathologic buccal tissues of 27 patie nts with OSF were studied by using immunochemical method. Microvessel q uantity(M VQ), quantity density(QD), microvessel area(MVA) and area density(AD) were deter mined by means of computer-aided image analysis system. The results showed the increase in MVQ and QD in the early stage and the decrease in MVQ, Q D, MVA and A D in the middle stage and the late stage. The authors concluded tha t presence of microvessel hyperplasia occurred in the early stage of OSF.
, 百拇医药
Key words：oral submucous fibrosis;microvessel;immunohis tochemistry;morphometry; pathology▲
口腔粘膜下纤维性变(oral submucous fibrosis , OSF)主要是因长期咀嚼槟榔所致，其致病机制尚不清楚。本科既往的研究表明，微血管 (Mic rovessel, MV)的病理损伤可能在OSF发病机制中具有重要的意义[2]。本研 究应用 免疫组化方法对OSF组织中的MV进行了定量分析，以探讨MV在OSF发生、发展过程中 的变化规 律。
1 材料与方法
1.1 标本收集及分期 27例OSF颊粘膜病变组织来源于我系口腔粘膜病专科 门诊及口腔病理学教研室；按Pindborg的OSF病理学分期标准[1]，经病理学确诊 并分期；其中早期11例，中期9例，晚期7例。8例正常颊粘膜对照取自无嚼槟榔、烟酒嗜好 ，身体健康的自愿者。上述常规制作石蜡切片，厚4μm，分别作HE和MV染色。
, 百拇医药
1.2 免疫组化染色及图像分析 鼠抗人CD34单克隆抗体、SP试剂盒及DAB均 购自福州迈新公司。MV染色方法均为常规SP法，每次染色设置阳性及阴性对照。MV染色后 呈 棕黄色至深棕黄色。采用北航一会凌Cmias-98型彩色图像分析仪，在10×10倍镜下选择 3个 血管密度最高区域对染色面积定量测定，测出微血管计数(MVQ)，微血管面积(MVA)，及 其面 密度(AD)，数密度(QD)。
1.3 统计学处理 求出每个样本的各项指标的均数，以均数±标准差(
±s)表示。对每项指标的各样本数据进行方差检验，作组间Newmankeuls法q检 验或组间秩和检验。2 结 果
OSF样本中的MVQ及QD在早期显著增多，中、晚期则逐渐减少；MVA及AD在早期无显著变化 ， 中、晚期逐渐减少；MVA/MVQ值早期无显著变化，中期、晚期则减少(图1～4，附表)。
, 百拇医药
附图 颊粘膜组织中微血管CD34免疫组化染色(SP×100 ) 1. 正常颊粘膜组织 2.OSF早期组织中MVQ和QD较正常颊粘膜组织增加 3.OSF中期组织中 MVQ，MV A，AD，QD和MVA/MVP较早期减少 4.OSF晚期组织中MVQ，MVA，AD和QD较中期减少
Fig. Immunostaining for CD34 being positive in the micr ovesse l of buccal mucous membrane(SP×100) 1.The normal buccal mucous tissue 2.OSF,MV Q and QD of early stage on it was more than on Fig.1 3.OSF,MVQ,MVA,AD, QD and MV A /MVQ of middle stage on it was less than that on Fig.2 4.OSF,MVQ,MV A,AD and QD of late stage on it was less than that on Fig.3
, 百拇医药
附表 OSF的微血管免疫组化图像分析(
±s) 分期例数
MVQ
MVA
AD
QD
MVA/MVQ
对照
8
158.62±45.63
1.25±5.14
, 百拇医药
0 .054±0.025
0.755±0.217
0.071±0.033
早期
11
247.63±30.47②
13.74±4.32③
0.065±0.020 ③
1.184±0.143②
0.055±0.013③
, 百拇医药
中期
9
200.78±62.98①
8.53±3.26②
0 .040±0.016①
0.956±0.300①
0.042±0.011①
晚期
7
86.14±24.38②
, 百拇医药 4.01±1.18 ②
0.019±0.006②
0.409±0.116②
0.052±0.032③
各项指标分别进行对照/早期、早期/中期及中期/晚期两两比较，①P<0.05；②P <0.01；③P<0.05
3 讨 论
MV染色方法有多种，近来人们发现人原造血细胞抗原(human hematopoietic progenitor ce ll antigen, CD34)的单克隆抗体免疫组化染色MV可获得很好的结果，所染MV阳性表达率高 ，染色强度明显强于FⅧRAg，且背景较FⅧRAg清晰，易于判断[3]。本研究采用 单 克隆抗体及SP免疫组化的方法染色OSF组织中MV，获得了很好的效果。
, http://www.100md.com
OSF的发病机制至今仍未明了，OSF微血管病理损伤可能在发病机制中具有重要意义[2 ，4]。本研究采用微机图像分析系统定量分析早、中、晚期OSF组织中的微血管病理变 化，国内外尚未见报道。结果表明：OSF早期微血管增生，至中、晚期血管数逐渐减少、血 管腔面积逐渐缩小。由于OSF中、晚期组织过度纤维化，导致了血管数减少、血管腔缩小。 但早期微血管增生可能为：OSF早期微血管内皮细胞损伤，血管扩张，通透性增加，血管外 围组织水肿，炎性细胞浸润，血浆漏出和纤维蛋白沉积激活凝血机制，局部组织发生慢性 弥 散性血管内凝血(DIC)综合征，至局部组织贫血[4，5]。缺血组织由于氧的张 力 梯度调节巨噬细胞表达“血管生成因子”，它既增加组织的血液灌注，也加快了微血管 再生 [6，7]。因此，OSF早期微血管增生可能是局部组织缺血后的一种代偿反应 的结 果，但也不排除槟榔混合物相关成分直接刺激所致。其确切机制尚需进一步研究。
基金项目：国家自然科学基金资项目(39470751)
, http://www.100md.com
作者简介：方厂云(1965-)，国，副教授
参考文献：
[1]Pindborg JJ. Oral submucous fibrosias[J]. Oral Surg, 1 966,22:764-767.
[2]方厂云，翦新春，陈新群，等.口腔粘膜下纤维性变的微血管病理损伤[J].中国现代医学杂志，1996，6(6)：72-73.
[3]施作霖，胡时光，沈金辉，等.CD34和第Ⅷ因子相关抗原在血管源性肿瘤中的诊断意义[J].中华病理学杂志，1998，27(2)：101.
[4]Phatak AG. Oral submucous fibrosis-a chronic dissemination intravascular coagulation syndrome with local coagulpathy[J]. Gut, 1993,34(5):713.
, 百拇医药
[5]Phatak AG. Hyper coagulation and fibrinolysis in oral submucous fibrosis [J]. Am J Clin Pathol, 1984,81:623-628.
[6]Stark GB, Hong C, Futreu JW. Enhanced neovascularization of rat tubed ped icle flaps with low perfusion of the wound margin[J]. Plast Reconstr Surg, 198 7,80:814-824.
[7]Baffour R, Berman J, Garb JL, et al. Enhanced angiogenesis and growth collaterals by in vivo adminstration of recombinant bFGF in a rabbit model of acute lower limb ischemia: dose-reponse effect of bFGF[J]. J Vase Surg, 1992, 16:181-191.
收稿日期：1999-04-07, 百拇医药