孔源性视网膜脱离患者视网膜下液维A酸含量的分析
作者：朱晓华 石翊轩
单位：朱晓华(第二附属医院眼科 长沙 410011)；石翊轩(第二附属医院眼科 长沙 410011)
关键词：维生素A酸类；视网膜下液*；视网膜脱离；增殖性玻；璃体视网膜病变*
湖南医科大学学报000114 摘 要：采用高效液相色谱法研究56例孔源性视网膜脱离患者的视网膜下液(SRF)及血清维A酸的含量，并观察部分患者服用维生素A对其的影响。结果示，患者SRF中维A酸的含量与增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)程度、视网膜 脱离范围和术前服用维生素A的天数呈正相关(r1=0.851, P<0.00; r2=0.452,P<0.01; r3=0.431,P<0.05)；血清维A酸的含量 与眼部病变无关；SRF中维A酸在口服维生素服药第4 d时显著增高。结果表明视网膜脱离后，色素上皮和神经上皮之间代谢关系发生紊乱，造成维A酸循环利用障碍。服用维生素A有利于阻止PVR的发生和发展。
, 百拇医药
分类号：R779.6 文献标识码：A
文章编号：1000-5625(2000)01-0042-03
Analysis of retinoic acid in subretinal fluid in patients with
rhegmatogenous retinal detachment
ZHU Xiao-hua, SHI Yi-xuan
(Department of Ophthalmology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medic al University Changsha 410011)
Abstract：To investigate the relationship between the level o f retinoic acid (RA) in the s ubretinal fluid (SRF) and the extent of the vitreoretinopathy in 56 patients wit h rhegmatogenous retinal detachment, we studied the levels of RA in both SRF and serum using high liquid chromatography and also examined those levels in part of patients who took oral vitamin A 150 000 U.d-1. The results were that th elevel of RA in the SRF increased with the grade of the proliferative vitreoretinopat hy (PVR); the levels of RA in both SRF and serum were significantly higher in th e cases with vitamin A than those without. We conclude that retinoic acid metabo lism between retinal pigment epithelial cells and neural epithelia was unbalance d after retinal detachment. Oral vitamin A is helpful to inhibit the genesis and development of the proliferative vitreoretinopathy.
, 百拇医药
Key words：retinoids; subretina fluid*; retinal detachme nt; proliferative vitreoretinopathy*▲
维A酸(retinoic acid, RA)系维生素A的氧化产物，是维生素A类似物中最重要的生物活性物 质[1]。维A酸由于其对上皮和间质来源的正常细胞和肿瘤细胞的分化和增殖起调控 作用，而 受到医学界的重视。增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)是 视网膜脱离后以视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial, RPE)和神经胶质细胞等异 常分化和增殖为特征[2]。维A酸因其具有抗分化和增殖的特性，有望用于PVR的预 防和治疗 。有关SRF中是否存在维A酸，及其与视网膜脱离病变的关系，国内外尚未见文献报道。本文 通过对SRF维A酸的研究，探讨其与视网膜脱离后玻璃体视网膜病变程度的关系。
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1 对象与方法
1.1 对象 56例孔源性视网膜脱离(rhegmatogenous retinal detachment, RRD)患者系我院 97年8月～98年10月间住院手术病人，其中男39例，女17例，年龄17～69 (平均34±16.9) 岁 。患者均无明显全身性疾病，除近视外，无其它眼病。56例患者有20例术前服用维生素A， 剂量15 000 U.d-1，9例术前服药未超过3 d。未服药的36例患者按玻璃体视网膜病 变程度[3]、视网膜脱离范围及服药患者情况分组(表1)。
表1 玻璃体视网膜病变和服药分组 组数
PVR程度
脱离范围
, 百拇医药 服 药情况
一
A级膜(8)
1个象限(2)
未服药(36)
二
B级膜(10)
2个象限(12)
服药≤3d(9)
三
C1～3级膜(10)
3个象限(12)
服药≥4d(11)
, 百拇医药
四
D1～3级膜(8)
4个象限(10)
1.2 SRF的收集 随机选择手术病人。术中充分暴露放液部位的巩膜，避开 血管，局部冲洗，止血，切透巩膜1 mm，用4号针头穿刺脉络膜，在出液口处吸取SRF，被血 污染者弃去，含血量在<0.1%者取用。同时抽取患者空腹时静脉血，取血清作对照。
1.3 实验方法 仪器为LC-6A高效液相色谱仪，标准品为全反式维A酸(重庆 市第一制药厂生 产，纯度≥98%)。样品处理： 取0.4 ml血清或SRF加5%高氯酸0.1 ml混匀，再加0.1 ml乙酸 乙酯混匀1 min，1400 r.min-1 15 min。取上层有机相进样20 μl，比色测定， 测量波长340 nm，回收率≥95%，批内变异系数为3.5%。
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1.4 统计学处理 用SSPS For Windows 7.5统计软件包进行分析。数据用
±s表示，对有相 关 趋势的变量行相关分析，多因素分析用线性回归分析，三组比较用单因素方差分析 ，组间比较用t检验。
2 结 果
2.1 患者血清维A酸含量与服用维生素A的关系 患者血清维A酸含量与眼部 病变无相关关系，而与服用维生素A呈正相关，服药天数与血清维A酸的含量关系见表2。未 服药组患者血清维A酸含量与正常人血清含量[(189.8±20.3) μg.L-1]差异无显 著性(P>0.05)。
表2 服药天数与血清RA含量的关系(μg.L -1,±s) 分 组
, 百拇医药
n
RA
未服药
36
180.54±13.74
服药≤3d
9
228.56±18.31①
服药≥4d
11
239.87±23.59①
2.2 SRF中维A酸含量与PVR的程度、视网膜脱离范围和服药天数之间的关系 SRF中维A酸含量与PVR的程度、视网膜脱离范围和服药天数有显著正相关(r1=0.851,P <0.00; r2=0.452, P<0.01; r3=0.431, P<0.05)，PVR程度、视网膜脱离范围 、服药天数各组间SRF中RA含量比较见表3。表3 PVR，视网膜脱离范围、服药天数各组 间SRF中RA含量比较(μg*L-1，±s) 分组
, 百拇医药
PVR程度
视网膜脱离范围
服药天数
例数
RA
例数
RA
例数
RA
一
8
2 .42±0.29
2
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22.70±18.03
36
35.57±33.51
二
10
40.67±13.39①
12
30.07±28.82
9
52.45±28.69
三
10
, 百拇医药
72.15±24.48①②
12
76.88±38.47①②
11
87.10±40.16①②
四
8
106.40±16.05①②③
10
67.06±39.52 ①②
①与一组比较、②与二组比较及③与三组比较：P<0.05
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3 讨 论
正常情况下，维生素A类似物大量存在于眼组织内，在视传导和调控细胞分化和增殖中起重 要作 用。维A酸是维生素A在机体内氧化产生的最重要的生物活性物质，主要是抑制细胞的异常分 化和增殖，眼内结构正常时，维A酸可循环利用。一 旦视网膜发生脱离， RPE 和神经上皮细胞正常的联系和代谢发生障碍，维A酸循环破坏[1,2]，并启 动一系列细胞介导的病理性变化，RPE细胞和胶质细胞产生异常转化、迁移和增殖，遂致PVR 的形成[4]。
本实验结果显示，SRF中含有维A酸，其含量与视网膜脱离后所产生的病变程度一致，PVR越 重和视网膜脱离范围越大，SRF中维A酸含量越高。这一结果表明，视网膜在脱离状态下，神 经上皮细胞合成的维A酸不能直接传递到RPE细胞内[5，6]，而分泌到SRF中 ，视网膜脱离范围越 大，SRF中维A酸聚积越多。另外，有实验证实，在培养的RPE细胞基质中增加营养血清的浓 度，会造 成细胞内维 A酸的丢失，其程度与血清浓度呈线性相关[7，8]；同样，SRF中血清 蛋白含量 的集聚[9]，也可能促使RPE细胞丢失维A酸，而使其进入SRF；因此，RPE细胞内的 维A酸浓度势必降低。
, 百拇医药
RPE细胞内维A酸含量不足，导致维A酸调控作用不能有效发挥，使RPE细胞易于去分化并 对有丝分裂原 的敏感性增加[10]，在各种促增殖因子的作用下，很容易产生转化和增殖而形 成PVR。本文结果也显示，视网膜脱离患者PVR越重，SRF中维A酸含量越高。
本文通过研究部分患者服用维生素A后血清和SRF中维A酸含量变化，发现服药后维A酸在血清 中含量 增加的同时，SRF中也有所增加，二者均有一个稳态控制[6]；血清中的变化在服药 后即 产生，而SRF中在服药第4 d才开始显著增加。这说明SRF中维A酸并非直接来源于血清。服 用维 生素A能增加眼组织内维A酸浓度，这样患者就可通过服用维生素A来增加视网膜组织对维A酸 的利用度，以期增加维A酸在RPE细胞内的浓度，减缓和阻止 RPE细胞的去分化，降低细胞 对有丝分裂原的敏感性，阻止PVR的发生和生展。
综上所述，SRF中存在维A酸，其含量随PVR程度的加重和视网膜脱离范围的扩大而增 加，视网膜脱离后RPE细胞利用和循环维A酸障碍是其原因。服用维生素A在提高血清维A酸浓 度的同时，使SRF中维A酸含量也增加。通过服药有望增加眼组织内维A酸浓度，以利阻止 PV R的发生和发展。
, http://www.100md.com
作者简介：朱晓华(1965-)，女，副教授
参考文献：
[1]Pfahl M, Chytil F. Regulation of metabolism by retinoic acid and its nuclear receptors[J]. Annu Rev Nutr, 1996,16:257-283.
[2]Doyle JW, Dowgiert RD, Buzney SM. Factors modulating the effect of retino ids on cultured retinal pigment epithelial cell proliferation[J]. Curr Eye Res, 19 92,1198:753-765.
[3]Hilton GF, Rao NA. The classification of retinal detachemnt with proli-fe rative vitreoretinopathy[J]. Ophthalmology, 1983,90:121-130.
, 百拇医药
[4]Campochiaro PA. Pathogenic mechanism in proliferative vitreoretino-pathy [J]. Arch Ophthalmol, 1997,15:237-241.
[5]Giordano GG, Refojo MF, Arroyo MH, et al. Sustained delivery of retin oic acid from microspheres of biogradable polymer in PVR[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci , 1993,34(9):2743-2751.
[6]Edwards RB, Adler AJ, Dev S. Synthesis of retinoic acid from retinol by c ultured rabbit Muller cells[J]. Exp Eye Res, 1992,54:481-490.
, http://www.100md.com
[7]Doyle JW, Dowgiert RK, Buzney SM. Retinoic acid metabolism in cultured re tinal pigment epithelial cells[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1995, 36(3):708- 717.
[8]Das SR, Gouras P. Retinoid metabolism in cultured human retinal pigment e pithelium[J]. Biochem J, 1988,250:459-465.
[9]Campochiaro PA, Hachett SF, Conway BP. Retinoic acid promotes density dep endent growth arrest in human retinal pigment epithelial cells[J]. Invest Opht halmol Vis Sic, 1991,32(1):65-72.
[10]Vieira AV, Schneider WJ, Wieira PM, et al. Retinoids: transport , metabolism, and mechanism or action[J]. J Endocrin, 1995, 146:201-207.
收稿日期：1999-05-20, http://www.100md.com
单位：朱晓华(第二附属医院眼科 长沙 410011)；石翊轩(第二附属医院眼科 长沙 410011)
关键词：维生素A酸类；视网膜下液*；视网膜脱离；增殖性玻；璃体视网膜病变*
湖南医科大学学报000114 摘 要：采用高效液相色谱法研究56例孔源性视网膜脱离患者的视网膜下液(SRF)及血清维A酸的含量，并观察部分患者服用维生素A对其的影响。结果示，患者SRF中维A酸的含量与增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)程度、视网膜 脱离范围和术前服用维生素A的天数呈正相关(r1=0.851, P<0.00; r2=0.452,P<0.01; r3=0.431,P<0.05)；血清维A酸的含量 与眼部病变无关；SRF中维A酸在口服维生素服药第4 d时显著增高。结果表明视网膜脱离后，色素上皮和神经上皮之间代谢关系发生紊乱，造成维A酸循环利用障碍。服用维生素A有利于阻止PVR的发生和发展。
, 百拇医药
分类号：R779.6 文献标识码：A
文章编号：1000-5625(2000)01-0042-03
Analysis of retinoic acid in subretinal fluid in patients with
rhegmatogenous retinal detachment
ZHU Xiao-hua, SHI Yi-xuan
(Department of Ophthalmology, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medic al University Changsha 410011)
Abstract：To investigate the relationship between the level o f retinoic acid (RA) in the s ubretinal fluid (SRF) and the extent of the vitreoretinopathy in 56 patients wit h rhegmatogenous retinal detachment, we studied the levels of RA in both SRF and serum using high liquid chromatography and also examined those levels in part of patients who took oral vitamin A 150 000 U.d-1. The results were that th elevel of RA in the SRF increased with the grade of the proliferative vitreoretinopat hy (PVR); the levels of RA in both SRF and serum were significantly higher in th e cases with vitamin A than those without. We conclude that retinoic acid metabo lism between retinal pigment epithelial cells and neural epithelia was unbalance d after retinal detachment. Oral vitamin A is helpful to inhibit the genesis and development of the proliferative vitreoretinopathy.
, 百拇医药
Key words：retinoids; subretina fluid*; retinal detachme nt; proliferative vitreoretinopathy*▲
维A酸(retinoic acid, RA)系维生素A的氧化产物，是维生素A类似物中最重要的生物活性物 质[1]。维A酸由于其对上皮和间质来源的正常细胞和肿瘤细胞的分化和增殖起调控 作用，而 受到医学界的重视。增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR)是 视网膜脱离后以视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelial, RPE)和神经胶质细胞等异 常分化和增殖为特征[2]。维A酸因其具有抗分化和增殖的特性，有望用于PVR的预 防和治疗 。有关SRF中是否存在维A酸，及其与视网膜脱离病变的关系，国内外尚未见文献报道。本文 通过对SRF维A酸的研究，探讨其与视网膜脱离后玻璃体视网膜病变程度的关系。
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1 对象与方法
1.1 对象 56例孔源性视网膜脱离(rhegmatogenous retinal detachment, RRD)患者系我院 97年8月～98年10月间住院手术病人，其中男39例，女17例，年龄17～69 (平均34±16.9) 岁 。患者均无明显全身性疾病，除近视外，无其它眼病。56例患者有20例术前服用维生素A， 剂量15 000 U.d-1，9例术前服药未超过3 d。未服药的36例患者按玻璃体视网膜病 变程度[3]、视网膜脱离范围及服药患者情况分组(表1)。
表1 玻璃体视网膜病变和服药分组 组数
PVR程度
脱离范围
, 百拇医药 服 药情况
一
A级膜(8)
1个象限(2)
未服药(36)
二
B级膜(10)
2个象限(12)
服药≤3d(9)
三
C1～3级膜(10)
3个象限(12)
服药≥4d(11)
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四
D1～3级膜(8)
4个象限(10)
1.2 SRF的收集 随机选择手术病人。术中充分暴露放液部位的巩膜，避开 血管，局部冲洗，止血，切透巩膜1 mm，用4号针头穿刺脉络膜，在出液口处吸取SRF，被血 污染者弃去，含血量在<0.1%者取用。同时抽取患者空腹时静脉血，取血清作对照。
1.3 实验方法 仪器为LC-6A高效液相色谱仪，标准品为全反式维A酸(重庆 市第一制药厂生 产，纯度≥98%)。样品处理： 取0.4 ml血清或SRF加5%高氯酸0.1 ml混匀，再加0.1 ml乙酸 乙酯混匀1 min，1400 r.min-1 15 min。取上层有机相进样20 μl，比色测定， 测量波长340 nm，回收率≥95%，批内变异系数为3.5%。
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1.4 统计学处理 用SSPS For Windows 7.5统计软件包进行分析。数据用
±s表示，对有相 关 趋势的变量行相关分析，多因素分析用线性回归分析，三组比较用单因素方差分析 ，组间比较用t检验。2 结 果
2.1 患者血清维A酸含量与服用维生素A的关系 患者血清维A酸含量与眼部 病变无相关关系，而与服用维生素A呈正相关，服药天数与血清维A酸的含量关系见表2。未 服药组患者血清维A酸含量与正常人血清含量[(189.8±20.3) μg.L-1]差异无显 著性(P>0.05)。
表2 服药天数与血清RA含量的关系(μg.L -1,
±s) 分 组, 百拇医药
n
RA
未服药
36
180.54±13.74
服药≤3d
9
228.56±18.31①
服药≥4d
11
239.87±23.59①
2.2 SRF中维A酸含量与PVR的程度、视网膜脱离范围和服药天数之间的关系 SRF中维A酸含量与PVR的程度、视网膜脱离范围和服药天数有显著正相关(r1=0.851,P <0.00; r2=0.452, P<0.01; r3=0.431, P<0.05)，PVR程度、视网膜脱离范围 、服药天数各组间SRF中RA含量比较见表3。表3 PVR，视网膜脱离范围、服药天数各组 间SRF中RA含量比较(μg*L-1，
±s) 分组, 百拇医药
PVR程度
视网膜脱离范围
服药天数
例数
RA
例数
RA
例数
RA
一
8
2 .42±0.29
2
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22.70±18.03
36
35.57±33.51
二
10
40.67±13.39①
12
30.07±28.82
9
52.45±28.69
三
10
, 百拇医药
72.15±24.48①②
12
76.88±38.47①②
11
87.10±40.16①②
四
8
106.40±16.05①②③
10
67.06±39.52 ①②
①与一组比较、②与二组比较及③与三组比较：P<0.05
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正常情况下，维生素A类似物大量存在于眼组织内，在视传导和调控细胞分化和增殖中起重 要作 用。维A酸是维生素A在机体内氧化产生的最重要的生物活性物质，主要是抑制细胞的异常分 化和增殖，眼内结构正常时，维A酸可循环利用。一 旦视网膜发生脱离， RPE 和神经上皮细胞正常的联系和代谢发生障碍，维A酸循环破坏[1,2]，并启 动一系列细胞介导的病理性变化，RPE细胞和胶质细胞产生异常转化、迁移和增殖，遂致PVR 的形成[4]。
本实验结果显示，SRF中含有维A酸，其含量与视网膜脱离后所产生的病变程度一致，PVR越 重和视网膜脱离范围越大，SRF中维A酸含量越高。这一结果表明，视网膜在脱离状态下，神 经上皮细胞合成的维A酸不能直接传递到RPE细胞内[5，6]，而分泌到SRF中 ，视网膜脱离范围越 大，SRF中维A酸聚积越多。另外，有实验证实，在培养的RPE细胞基质中增加营养血清的浓 度，会造 成细胞内维 A酸的丢失，其程度与血清浓度呈线性相关[7，8]；同样，SRF中血清 蛋白含量 的集聚[9]，也可能促使RPE细胞丢失维A酸，而使其进入SRF；因此，RPE细胞内的 维A酸浓度势必降低。
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RPE细胞内维A酸含量不足，导致维A酸调控作用不能有效发挥，使RPE细胞易于去分化并 对有丝分裂原 的敏感性增加[10]，在各种促增殖因子的作用下，很容易产生转化和增殖而形 成PVR。本文结果也显示，视网膜脱离患者PVR越重，SRF中维A酸含量越高。
本文通过研究部分患者服用维生素A后血清和SRF中维A酸含量变化，发现服药后维A酸在血清 中含量 增加的同时，SRF中也有所增加，二者均有一个稳态控制[6]；血清中的变化在服药 后即 产生，而SRF中在服药第4 d才开始显著增加。这说明SRF中维A酸并非直接来源于血清。服 用维 生素A能增加眼组织内维A酸浓度，这样患者就可通过服用维生素A来增加视网膜组织对维A酸 的利用度，以期增加维A酸在RPE细胞内的浓度，减缓和阻止 RPE细胞的去分化，降低细胞 对有丝分裂原的敏感性，阻止PVR的发生和生展。
综上所述，SRF中存在维A酸，其含量随PVR程度的加重和视网膜脱离范围的扩大而增 加，视网膜脱离后RPE细胞利用和循环维A酸障碍是其原因。服用维生素A在提高血清维A酸浓 度的同时，使SRF中维A酸含量也增加。通过服药有望增加眼组织内维A酸浓度，以利阻止 PV R的发生和发展。
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作者简介：朱晓华(1965-)，女，副教授
参考文献：
[1]Pfahl M, Chytil F. Regulation of metabolism by retinoic acid and its nuclear receptors[J]. Annu Rev Nutr, 1996,16:257-283.
[2]Doyle JW, Dowgiert RD, Buzney SM. Factors modulating the effect of retino ids on cultured retinal pigment epithelial cell proliferation[J]. Curr Eye Res, 19 92,1198:753-765.
[3]Hilton GF, Rao NA. The classification of retinal detachemnt with proli-fe rative vitreoretinopathy[J]. Ophthalmology, 1983,90:121-130.
, 百拇医药
[4]Campochiaro PA. Pathogenic mechanism in proliferative vitreoretino-pathy [J]. Arch Ophthalmol, 1997,15:237-241.
[5]Giordano GG, Refojo MF, Arroyo MH, et al. Sustained delivery of retin oic acid from microspheres of biogradable polymer in PVR[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci , 1993,34(9):2743-2751.
[6]Edwards RB, Adler AJ, Dev S. Synthesis of retinoic acid from retinol by c ultured rabbit Muller cells[J]. Exp Eye Res, 1992,54:481-490.
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[8]Das SR, Gouras P. Retinoid metabolism in cultured human retinal pigment e pithelium[J]. Biochem J, 1988,250:459-465.
[9]Campochiaro PA, Hachett SF, Conway BP. Retinoic acid promotes density dep endent growth arrest in human retinal pigment epithelial cells[J]. Invest Opht halmol Vis Sic, 1991,32(1):65-72.
[10]Vieira AV, Schneider WJ, Wieira PM, et al. Retinoids: transport , metabolism, and mechanism or action[J]. J Endocrin, 1995, 146:201-207.
收稿日期：1999-05-20, http://www.100md.com