腺苷受体激动剂对大鼠脊髓损伤后细胞外液兴奋性氨基酸的影响
作者：张秋林 李明 赵杰 叶晓健 侯铁胜 张玲妹
单位：张秋林(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；李明(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；赵杰(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；叶晓健(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；侯铁胜(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；张玲妹(上海医科大学神经生物国家重点实验室)
关键词：腺苷；氨基酸；兴奋性；脊髓损伤
第二军医大学学报000123 摘 要：目的：观察腺苷对脊髓损伤后细胞外液兴奋性氨基酸(EAA)的影响，研究腺苷对脊髓损伤后的神经保护机制。方法：腹侧压迫损伤法造成大鼠脊髓T13中度损伤，用微透析法收集伤前15 min和伤后即刻,15,30,45 min脊髓T13的细胞外液。治疗组伤后立即灌注非特异性腺苷受体激动剂2-氯腺苷(2-CADO，0.1 mmol/L)。采用高效液相色谱仪荧光检测法检测透析液中谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)含量。结果：伤段脊髓细胞外液中Glu，Asp含量在伤后15 min分别升高为伤前的5倍和7倍，45 min后降为正常，而2-CADO治疗组则可显著抑制Glu，Asp的升高(P<0.01)。结论：2-CADO通过抑制EAA的毒性从而对脊髓损伤起保护作用。
, 百拇医药
中图分类号：R651.2 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)01-0071-03
Effect of adenosine agonist on extracellular excitatory amino acid after spinal cord injury in rats
ZHANG Qiu-Lin
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
LI Ming
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, 百拇医药
ZHAO Jie
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
YE Xiao-Jian
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
HOU Tie-Sheng
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, http://www.100md.com
ZHANG Ling-Mei
(Neurobiology National Major Laboratory, Shanghai Medical University)
ABSTRACT：Objective: To observe the effect of adenosine on extracellular excitatory amino acid (EAA) after spinal cord injury (SCI) so as to explore its neuroprotective mechanism on SCI. Methods: Moderate spinal cord injury of T13 in rats were abtained by using ventral compression injury model. The extracellular fluids were collected 15 min before injury and after every 15 min till 60 min after injury by using microdialysis. Glutamate and asparate in the samples were analyzed by an HPLC. In treatment group, 2-chloroadenesine (2-CADO，0.1 mmol/L), one of nonspecific adenosine agonists, was given through the probe immediately after injury. Results: The concentration of glutamate and asparate in extracellular fluid increased by 5 and 7 times respectively during the first 15 min after SCI, and decreased to pre-injury level 45 min after SCI. Conclusion: Treatment with 2-CADO can inhibit the increase of glutamate and asparate significantly (P<0.01). Adenosine plays a neuroprotective role partly through inhibiting excitotoxicity of EAA.
, http://www.100md.com
KEY WORDS：adenosine；amino acid，excitotary； spinal cord injuries▲
[Acad J Sec Mil Med Univ, 2000, 21(1): 71-73]
兴奋性氨基酸(EAA)主要包括谷氨酸(Glu)及天门冬氨酸(Asp)，是中枢神经系统内重要的兴奋性递质。但在病理情况下，EAA过度释放会导致神经组织损害，许多研究结果都表明EAA是参与脑和脊髓继发性损伤的主要毒性物质之一，因而被称为兴奋性毒性递质[1，2]。腺苷是中枢神经系统内的主要抑制性保护因子之一，它能在突触前抑制EAA的释放，从而能减轻神经细胞的缺血、缺氧性损害[3，4]， 但在脊髓损伤中的作用尚未见报道。本实验观察了腺苷受体激动剂2-氯腺苷(2-CADO)对大鼠脊髓损伤后细胞外液中EAA的影响，以进一步了解腺苷对脊髓损伤的保护机制。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 实验动物分组 健康封闭群SD大鼠12只(购自必-凯公司)，体质量(250±10)g，随机分为对照组和 2-CADO治疗组(n=6)。
1.2 微透析探针植入 用2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉，暴露T13脊髓左侧作为压迫损伤侧,保留椎板。T13～L1右侧椎间孔给以扩大开窗，在T13脊髓右侧正中偏后方，在水平面上与脊髓纵轴成45°插入微透析探针(MD-2200型，膜长2 mm，直径0.5 mm，美国BAS公司产品)，深约2.5 mm，使透析膜完全在脊髓实质内，外套管保护后用牙托基质固定于脊柱及肋骨上。 微量注射泵以2 μl/min的速度向探针内灌注人工脑脊液。平衡2 h后开始在计算机控制下自动低温(4℃)收集15 min流出液作为伤前基础值。
1.3 致伤方法及样品收集 用2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉，1 h后追加1/3量维持动物处于麻醉状态。以T13椎骨为中心取背正中切口，咬去T13左侧椎弓根及部分椎板，暴露T13脊髓左侧作为压迫损伤侧。将自制的不锈钢致伤钩(宽2.5 mm，长4 mm，厚0.5 mm)置于脊髓腹侧，通过杠杆在致伤钩的另一端挂砝码使致伤钩上产生约0.345 N向脊髓背侧方向的力造成脊髓的压迫损伤。压迫4 min后对照组立即开始收集透析液，每15 min一管，共4管；治疗组于伤后立即改灌注含1 mmol/L 2-CADO的人工脑脊液，同样收集4管，样品置于-70℃冰箱保存待测。
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1.4 氨基酸检测 采用反相高效液相色谱仪(Beckman 110B型)荧光检测法检测样品中Glu和Asp的含量。流动相采用0.01 mol/L KH2PO4，流动相A中甲醇体积分数35%，流动相B中甲醇体积分数90%，流速1 ml/min，荧光激发波长280 nm，发射波长340 nm，外标法峰面积定量，由标准曲线得回归方程求出氨基酸的浓度。每一次使用探针前均用标准的Glu和Asp测定其回收率，然后将测得的浓度除以回收率即可得到细胞外液的实际浓度。
1.5 统计学处理 数据以
±s表示，采用t检验进行统计分析。
2 结果
微透析对Glu的相对回收率为(7.1±0.6)%，对Asp的相对回收率为(8.4±0.7)%，经换算后得到对照组动物伤后细胞外液中EAA的基础值：Glu为(0.86 ±0.08) μmol/L；Asp为(0.38±0.05) μmol/L。脊髓损伤后15 min对照组EAA浓度达最高峰，Glu为(4.29±0.73) μmol/L，Asp为(2.62±0.45) μmol/L，至45 min均降至基础值水平； 2-CADO治疗组伤后15 min细胞外液EAA浓度明显低于对照组， Glu的高峰值降为(1.57±0.28) μmol/L (P<0.01)， Asp的高峰值降为(0.84±0.11) μmol/L (P<0.01)，见表1，2。
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表1 2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后细胞外液中谷氨酸的影响
Tab 1 Effect of 2-chloroadenosine on extracellular Glu after spinal cord injury in rats
(n=6,±s,cB/μmol。L-1) Group
Pre-injury
Post-injury(t/min)
0
15
, http://www.100md.com 30
45
Control
0.86±0.08
4.29±0.73
2.98±0.46
1.42±0.17
0.93±0.10
Treatment
0.90±0.07
1.57±0.28**
1.12±0.15**
, 百拇医药
0.97±0.11**
0.89±0.08
**P<0.01 vs control group表2 2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后细胞外液中天门冬氨酸的影响
Tab 2 Effect of 2-chloroadenosine on extracellular Asp after spinal cord injury in rats
(n=6,±s,cB/μmol。L-1) Group
Pre-injury
, http://www.100md.com
Post-injury(t/min)
0
15
30
45
Control
0.38±0.05
2.62±0.45
1.49±0.29
0.59±0.10
0.41±0.07
Treatment
, 百拇医药
0.36±0.06
0.84±0.11**
0.63±0.10**
0.47±0.09*
0.39±0.08
*P<0.05， **P<0.01 vs control group3 讨论
许多研究表明，脊髓损伤后伤段脊髓组织以及脑脊液中EAA含量明显升高[1,2]。但用微透析技术观察脊髓损伤后细胞外液中EAA的变化尚未见报道。本研究利用该技术观察到脊髓损伤后15 min，Glu浓度急剧升高约5倍，Asp升高约7倍，45 min后均降为正常水平。过高的EAA会通过对EAA受体的病理性刺激，导致神经细胞损伤。Olney等[5]最早将EAA的这种神经损伤作用称为EAA神经毒性。 Faden等[1]于80年代末率先进行了EAA与脊髓损伤的相关性研究，鞘内注射外源性EAA NMDA可致脊髓损伤加重，而注射NMDA受体拮抗剂则可提高脊髓损伤后神经功能评分。近年来研究表明EAA 的兴奋性毒性可能至少是通过以下3种机制实现：(1)EAA使膜去极化，导致大量的Na+和水内流致细胞急性肿胀；(2)EAA 激活离子型受体，使受体门控的Ca2+通道开放，导致了大量的Ca2+内流；(3)EAA 激活代谢型受体，从而激活了磷酸肌醇的代谢，导致了与肌醇三磷酸相关的钙库的释放，增加了Ca2+细胞内流，细胞内Ca2+超载严重干扰了细胞代谢，最终导致神经细胞死亡[6]。
, 百拇医药
腺苷是中枢神经系统内突触传递和神经元活动的重要抑制性调节因子之一。其受体遍布整个脑和脊髓，按作用后对细胞内cAMP的影响不同分为A1受体和A2受体，其中A1受体广泛分布于突触前膜、突触后膜以及神经元突起和星形胶质细胞，A2受体则分布于血管平滑肌和内皮细胞。正常生理情况下，腺苷能调节多种神经递质(如单胺类递质、EAA、一氧化氮、乙酰胆碱等)的释放。在病理情况下，给予外源性腺苷受体激动剂能减轻缺血，缺氧造成的神经毒性[3,4]，但腺苷在脊髓损伤中的作用尚未见报道。
2-CADO是非特异性腺苷受体激动剂，能同时激活A1和A2受体。本研究结果发现，2-CADO能使脊髓损伤后伤段脊髓细胞外液的EAA水平显著下降，尤其在伤后45 min内，但其作用机制还不完全清楚。作者认为可能主要是通过A1受体起作用的：(1)脊髓损伤早期，由于脊髓出血和缺血，细胞外液中K+急骤升高，使膜去极化，导致大量的Ca2+流入突触前，引起大量的EAA释放到突触间隙，2-CADO作用于A1受体能抑制N型和P型Ca2+通道，从而阻断了Ca2+ 依赖的突触囊泡释放EAA[4]，即突触前抑制兴奋性氨基酸的释放；(2)通过A1受体调节K+通道和Cl-通道抑制神经元的兴奋性，即抑制细胞膜去极化降低EAA的释放[7]，即突触后抑制兴奋性氨基酸的释放。此外，2-CADO通过A2受体扩张血管，增加脊髓血流，使过量的EAA从血流中带走，可能是EAA含量下降的另一机制。
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本研究发现脊髓损伤后45 min细胞外液中EAA的含量恢复至伤前水平，但这并不说明脊髓继发性损伤的停止，脊髓损伤早期EAA的急骤升高造成的可能只是Na+和水内流致细胞急性肿胀，而EAA过度激活NMDA受体门控的Ca2+内流是导致细胞不可逆死亡的重要途径。因此本研究观察到2-CADO抑制早期EAA的升高，只是腺苷对脊髓损伤的保护机制之一，是否能阻止NMDA受体过度兴奋造成的Ca2+超载尚待进一步研究。■
基金项目：上海市科委带头人基金资助项目(97XD14015)
作者简介：张秋林(1968～)，男(汉族)，博士，主治医师
参考文献：
[1]Faden AI, Simon RS. A potential role for excitotoxins in the pathophysiology of spinal cord injury[J]. Ann Neurol, 1988, 23(6)： 623-626.
, 百拇医药
[2]叶晓健，李家顺，王家林，等. 兴奋性氨基酸在脊髓继发性损伤的作用机制的研究[J]. 第二军医大学学报，1995, 16(6): 520-523.
[3]Rudolphi KA, Schubert P, Parkinson FE, et al. Neuroprotective role of adenosine in cerebral ischemia[J]. Trends Pharmacol Sci, 1992, 13(12): 439-445.
[4]Corradetti R, Loconte G, Moroni F, et al. Adenosine decreases asparate and glutamate release from rat hippocampal slices[J]. Eur J Pharmacol, 1984, 104(1): 19-26.
, 百拇医药 [5]Olney JW, Ho OC, Rhee V. Brain lesions, obesity and other disturbances in mice treated with monosodium glutamate[J]. Science, 1969, 164(3883): 719-721.
[6]Rothman SM, Olney JW. Excitotoxicity and the NMDA receptor[J]. Trends Pharmacol Sci, 1987, 8(8): 299-302.
[7]Mager R, Ferroni S, Schubert P. Adenosine modulates a voltagedependent chloride condactance in cultured hippocampus neurous[J]. Brain Res, 1990, 532(1): 58-62.
收稿日期：1999-09-13
修回日期：1999-12-20, 百拇医药
单位：张秋林(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；李明(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；赵杰(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；叶晓健(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；侯铁胜(第二军医大学长海医院骨科，上海 200433)；张玲妹(上海医科大学神经生物国家重点实验室)
关键词：腺苷；氨基酸；兴奋性；脊髓损伤
第二军医大学学报000123 摘 要：目的：观察腺苷对脊髓损伤后细胞外液兴奋性氨基酸(EAA)的影响，研究腺苷对脊髓损伤后的神经保护机制。方法：腹侧压迫损伤法造成大鼠脊髓T13中度损伤，用微透析法收集伤前15 min和伤后即刻,15,30,45 min脊髓T13的细胞外液。治疗组伤后立即灌注非特异性腺苷受体激动剂2-氯腺苷(2-CADO，0.1 mmol/L)。采用高效液相色谱仪荧光检测法检测透析液中谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)含量。结果：伤段脊髓细胞外液中Glu，Asp含量在伤后15 min分别升高为伤前的5倍和7倍，45 min后降为正常，而2-CADO治疗组则可显著抑制Glu，Asp的升高(P<0.01)。结论：2-CADO通过抑制EAA的毒性从而对脊髓损伤起保护作用。
, 百拇医药
中图分类号：R651.2 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)01-0071-03
Effect of adenosine agonist on extracellular excitatory amino acid after spinal cord injury in rats
ZHANG Qiu-Lin
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
LI Ming
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, 百拇医药
ZHAO Jie
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
YE Xiao-Jian
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
HOU Tie-Sheng
(Department of Orthopedics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, http://www.100md.com
ZHANG Ling-Mei
(Neurobiology National Major Laboratory, Shanghai Medical University)
ABSTRACT：Objective: To observe the effect of adenosine on extracellular excitatory amino acid (EAA) after spinal cord injury (SCI) so as to explore its neuroprotective mechanism on SCI. Methods: Moderate spinal cord injury of T13 in rats were abtained by using ventral compression injury model. The extracellular fluids were collected 15 min before injury and after every 15 min till 60 min after injury by using microdialysis. Glutamate and asparate in the samples were analyzed by an HPLC. In treatment group, 2-chloroadenesine (2-CADO，0.1 mmol/L), one of nonspecific adenosine agonists, was given through the probe immediately after injury. Results: The concentration of glutamate and asparate in extracellular fluid increased by 5 and 7 times respectively during the first 15 min after SCI, and decreased to pre-injury level 45 min after SCI. Conclusion: Treatment with 2-CADO can inhibit the increase of glutamate and asparate significantly (P<0.01). Adenosine plays a neuroprotective role partly through inhibiting excitotoxicity of EAA.
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KEY WORDS：adenosine；amino acid，excitotary； spinal cord injuries▲
[Acad J Sec Mil Med Univ, 2000, 21(1): 71-73]
兴奋性氨基酸(EAA)主要包括谷氨酸(Glu)及天门冬氨酸(Asp)，是中枢神经系统内重要的兴奋性递质。但在病理情况下，EAA过度释放会导致神经组织损害，许多研究结果都表明EAA是参与脑和脊髓继发性损伤的主要毒性物质之一，因而被称为兴奋性毒性递质[1，2]。腺苷是中枢神经系统内的主要抑制性保护因子之一，它能在突触前抑制EAA的释放，从而能减轻神经细胞的缺血、缺氧性损害[3，4]， 但在脊髓损伤中的作用尚未见报道。本实验观察了腺苷受体激动剂2-氯腺苷(2-CADO)对大鼠脊髓损伤后细胞外液中EAA的影响，以进一步了解腺苷对脊髓损伤的保护机制。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 实验动物分组 健康封闭群SD大鼠12只(购自必-凯公司)，体质量(250±10)g，随机分为对照组和 2-CADO治疗组(n=6)。
1.2 微透析探针植入 用2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉，暴露T13脊髓左侧作为压迫损伤侧,保留椎板。T13～L1右侧椎间孔给以扩大开窗，在T13脊髓右侧正中偏后方，在水平面上与脊髓纵轴成45°插入微透析探针(MD-2200型，膜长2 mm，直径0.5 mm，美国BAS公司产品)，深约2.5 mm，使透析膜完全在脊髓实质内，外套管保护后用牙托基质固定于脊柱及肋骨上。 微量注射泵以2 μl/min的速度向探针内灌注人工脑脊液。平衡2 h后开始在计算机控制下自动低温(4℃)收集15 min流出液作为伤前基础值。
1.3 致伤方法及样品收集 用2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉，1 h后追加1/3量维持动物处于麻醉状态。以T13椎骨为中心取背正中切口，咬去T13左侧椎弓根及部分椎板，暴露T13脊髓左侧作为压迫损伤侧。将自制的不锈钢致伤钩(宽2.5 mm，长4 mm，厚0.5 mm)置于脊髓腹侧，通过杠杆在致伤钩的另一端挂砝码使致伤钩上产生约0.345 N向脊髓背侧方向的力造成脊髓的压迫损伤。压迫4 min后对照组立即开始收集透析液，每15 min一管，共4管；治疗组于伤后立即改灌注含1 mmol/L 2-CADO的人工脑脊液，同样收集4管，样品置于-70℃冰箱保存待测。
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1.4 氨基酸检测 采用反相高效液相色谱仪(Beckman 110B型)荧光检测法检测样品中Glu和Asp的含量。流动相采用0.01 mol/L KH2PO4，流动相A中甲醇体积分数35%，流动相B中甲醇体积分数90%，流速1 ml/min，荧光激发波长280 nm，发射波长340 nm，外标法峰面积定量，由标准曲线得回归方程求出氨基酸的浓度。每一次使用探针前均用标准的Glu和Asp测定其回收率，然后将测得的浓度除以回收率即可得到细胞外液的实际浓度。
1.5 统计学处理 数据以
±s表示，采用t检验进行统计分析。2 结果
微透析对Glu的相对回收率为(7.1±0.6)%，对Asp的相对回收率为(8.4±0.7)%，经换算后得到对照组动物伤后细胞外液中EAA的基础值：Glu为(0.86 ±0.08) μmol/L；Asp为(0.38±0.05) μmol/L。脊髓损伤后15 min对照组EAA浓度达最高峰，Glu为(4.29±0.73) μmol/L，Asp为(2.62±0.45) μmol/L，至45 min均降至基础值水平； 2-CADO治疗组伤后15 min细胞外液EAA浓度明显低于对照组， Glu的高峰值降为(1.57±0.28) μmol/L (P<0.01)， Asp的高峰值降为(0.84±0.11) μmol/L (P<0.01)，见表1，2。
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表1 2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后细胞外液中谷氨酸的影响
Tab 1 Effect of 2-chloroadenosine on extracellular Glu after spinal cord injury in rats
(n=6,
±s,cB/μmol。L-1) GroupPre-injury
Post-injury(t/min)
0
15
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45
Control
0.86±0.08
4.29±0.73
2.98±0.46
1.42±0.17
0.93±0.10
Treatment
0.90±0.07
1.57±0.28**
1.12±0.15**
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0.97±0.11**
0.89±0.08
**P<0.01 vs control group表2 2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后细胞外液中天门冬氨酸的影响
Tab 2 Effect of 2-chloroadenosine on extracellular Asp after spinal cord injury in rats
(n=6,
±s,cB/μmol。L-1) GroupPre-injury
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Post-injury(t/min)
0
15
30
45
Control
0.38±0.05
2.62±0.45
1.49±0.29
0.59±0.10
0.41±0.07
Treatment
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0.36±0.06
0.84±0.11**
0.63±0.10**
0.47±0.09*
0.39±0.08
*P<0.05， **P<0.01 vs control group3 讨论
许多研究表明，脊髓损伤后伤段脊髓组织以及脑脊液中EAA含量明显升高[1,2]。但用微透析技术观察脊髓损伤后细胞外液中EAA的变化尚未见报道。本研究利用该技术观察到脊髓损伤后15 min，Glu浓度急剧升高约5倍，Asp升高约7倍，45 min后均降为正常水平。过高的EAA会通过对EAA受体的病理性刺激，导致神经细胞损伤。Olney等[5]最早将EAA的这种神经损伤作用称为EAA神经毒性。 Faden等[1]于80年代末率先进行了EAA与脊髓损伤的相关性研究，鞘内注射外源性EAA NMDA可致脊髓损伤加重，而注射NMDA受体拮抗剂则可提高脊髓损伤后神经功能评分。近年来研究表明EAA 的兴奋性毒性可能至少是通过以下3种机制实现：(1)EAA使膜去极化，导致大量的Na+和水内流致细胞急性肿胀；(2)EAA 激活离子型受体，使受体门控的Ca2+通道开放，导致了大量的Ca2+内流；(3)EAA 激活代谢型受体，从而激活了磷酸肌醇的代谢，导致了与肌醇三磷酸相关的钙库的释放，增加了Ca2+细胞内流，细胞内Ca2+超载严重干扰了细胞代谢，最终导致神经细胞死亡[6]。
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腺苷是中枢神经系统内突触传递和神经元活动的重要抑制性调节因子之一。其受体遍布整个脑和脊髓，按作用后对细胞内cAMP的影响不同分为A1受体和A2受体，其中A1受体广泛分布于突触前膜、突触后膜以及神经元突起和星形胶质细胞，A2受体则分布于血管平滑肌和内皮细胞。正常生理情况下，腺苷能调节多种神经递质(如单胺类递质、EAA、一氧化氮、乙酰胆碱等)的释放。在病理情况下，给予外源性腺苷受体激动剂能减轻缺血，缺氧造成的神经毒性[3,4]，但腺苷在脊髓损伤中的作用尚未见报道。
2-CADO是非特异性腺苷受体激动剂，能同时激活A1和A2受体。本研究结果发现，2-CADO能使脊髓损伤后伤段脊髓细胞外液的EAA水平显著下降，尤其在伤后45 min内，但其作用机制还不完全清楚。作者认为可能主要是通过A1受体起作用的：(1)脊髓损伤早期，由于脊髓出血和缺血，细胞外液中K+急骤升高，使膜去极化，导致大量的Ca2+流入突触前，引起大量的EAA释放到突触间隙，2-CADO作用于A1受体能抑制N型和P型Ca2+通道，从而阻断了Ca2+ 依赖的突触囊泡释放EAA[4]，即突触前抑制兴奋性氨基酸的释放；(2)通过A1受体调节K+通道和Cl-通道抑制神经元的兴奋性，即抑制细胞膜去极化降低EAA的释放[7]，即突触后抑制兴奋性氨基酸的释放。此外，2-CADO通过A2受体扩张血管，增加脊髓血流，使过量的EAA从血流中带走，可能是EAA含量下降的另一机制。
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本研究发现脊髓损伤后45 min细胞外液中EAA的含量恢复至伤前水平，但这并不说明脊髓继发性损伤的停止，脊髓损伤早期EAA的急骤升高造成的可能只是Na+和水内流致细胞急性肿胀，而EAA过度激活NMDA受体门控的Ca2+内流是导致细胞不可逆死亡的重要途径。因此本研究观察到2-CADO抑制早期EAA的升高，只是腺苷对脊髓损伤的保护机制之一，是否能阻止NMDA受体过度兴奋造成的Ca2+超载尚待进一步研究。■
基金项目：上海市科委带头人基金资助项目(97XD14015)
作者简介：张秋林(1968～)，男(汉族)，博士，主治医师
参考文献：
[1]Faden AI, Simon RS. A potential role for excitotoxins in the pathophysiology of spinal cord injury[J]. Ann Neurol, 1988, 23(6)： 623-626.
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收稿日期：1999-09-13
修回日期：1999-12-20, 百拇医药