中药红曲基原真菌的高效毛细管电泳色谱法鉴别
作者：邢旺兴 尹茶 宓鹤鸣 程荣珍 吴玉田
单位：邢旺兴(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；尹茶(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；宓鹤鸣(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；吴玉田(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；程荣珍(杭州尖峰德康药业有限公司)
关键词：红曲；红曲霉菌；毛细管电泳
第二军医大学学报000119 摘 要：目的：建立一种中药红曲基原真菌新的鉴定方法。方法：采用毛细管区带电泳分离模式，背景电解质为20 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 9.11)，电压20 kV，温度25 ℃；紫外检测波长214 nm，压差进样，进样时间5 s。结果：不同种红曲霉胞内和胞外水溶性蛋白质的成分和含量均存在显著差异。根据红曲霉胞内或胞外水溶性蛋白质4～10 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，可以有效地鉴别红曲霉属真菌，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。结论：高效毛细管电泳可用于红曲霉等真菌的分类和鉴定。
, 百拇医药
中图分类号：R 282.710.3 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)01-0059-03
Distinguish of original fungi of Hongqu with high performance capillary electrophoresis
XING Wang-Xing
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
YIN Cha
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, 百拇医药
MI He-Ming
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
WU Yu-Tian1
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
CHENG Rong-Zhen
(Hangzhou Jianfeng Dekang Medicine Limited Company)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objective: To establish a new method to identify original fungi of Chinese traditional medicine: Hongqu. Methods: The capillary zone electrophoresis method was used. The buffer used for protein separation was 20 mmol/L borate of pH 9.11. Proteins were monitored at 214 nm, voltage at 20 kV and pressure injection 5 s. The temperature of the capillary during electrophoresis was kept constant at 25℃. Results: The number of peaks and the contents either extracellular proteins of Monascus or intracellular proteins was obviously different, we could distinguish easily Monascus by the fingerprint peaks within 4 and 10 minutes either of extracellular proteins or of intracellular proteins. The results were consistent with morphologic study and analysis with scanning electron microscope. Conclusion: HPCE assay technique can classify and identify of Monascus fungi.
, 百拇医药
KEY WORDS：Hongqu; Monascus; capillary electrophoresis▲
[Acad J Sec Mil Med Univ, 2000, 21(1): 59-61]
红曲是一种医食两用的传统中药，近年来的研究发现，红曲同时具有降脂、降压、降糖和抑制肿瘤生长的作用[1]。然而，红曲基原真菌的命名在分类学上尚有争议[2]。高效毛细管电泳(HPCE)是近年迅速发展的一种新型分离分析技术，兼有普通电泳和色谱的双重优点[3]。HPCE能给出不同蛋白质的特征性图谱作为指纹图谱，用作鉴别的依据，如胡平等[4]鉴别了13个不同来源的菟丝子生药；张朝晖等[5]鉴别了12种海马、海龙药材。本研究采用HPCE 中常用的毛细管区带电泳(CZE)分离模式，以液基及菌丝中可溶性蛋白质为分析对象，建立了适合混合蛋白质分离分析的HPCE方法，并成功地鉴别了不同种红曲霉真菌，为真菌学鉴定提供了一种新的方法和手段，同时也为进一步筛选优良的降脂红曲提供了科学依据。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器 Water Capillary Ion Analyzer，美国Waters公司，数据的采集、分析和仪器的控制由工作站完成；HA-202M电子天平(日本); 普通石英毛细管柱，河北永年光导纤维厂；pHS-3c型酸度计，上海雷磁仪器厂；所用试剂均为分析纯。
1.2 样品 7种红曲霉菌及同属的土曲霉对照株共8株,见表1。
表1 红曲霉和对照菌株的名称及来源
Tab 1 The names and sources of strains of
Monascus fungi and control No.
Strain
, http://www.100md.com
Name
Sources
1
5015
Monascus aurantiacus Lee
Shanxi
2
5016
M.serorubesceus Sato
Shanxi
3
5017
, 百拇医药
M.albidus Sato
Fujian
4
5021
M.barkeri Dangerd
Liaoning
5
5029
M.ruber van Tieghem
Guangdong
6
5032
, 百拇医药
M. purpureus Went
Sichuan
7
5035
M.fuliginosus Sato
Yunnan
8
9001
Aspergillus terreus
Beijing
1.3 样品溶液的制备 取不同种红曲的液体培养物，转种1次，于32℃培养7 d后，抽滤收集菌丝。滤液为水层，直接进样测定胞外可溶性蛋白质部分。将菌丝用蒸馏水洗3次后，尽量抽干，称湿质量，加水冰浴研磨15 min,使成匀浆状，转移至离心管内1×104 r/ min离心 20 min，吸取上清液(使成菌丝50 mg/ml)进行HPCE 测定，为胞内可溶性蛋白质部分。
, http://www.100md.com
1.4 电泳条件 57 cm×75 μm毛细管柱，背景电解质为20 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 9.11)，电压20 kV，温度25℃，紫外检测波长214 nm，压差进样，进样时间5 s。两次进样间用0.1 mol/L氢氧化钠溶液冲柱1 min，水冲柱1 min，再用电解液冲柱1 min。
1.5 方法的优化
1.5.1 蛋白质提取条件的考察 文献报道多用pH 8.3的Tris-枸橼酸体系提取蛋白质，但由于不同的蛋白质有不同的等电点和溶解性能，仅用一种抽提液很难将所有的蛋白质完全提取出来。也有分别用酸性和碱性蛋白质抽提液的，又过于繁琐，同时抽提液中含有一定强度的离子，易使毛细管产生焦耳热。我们采用水作抽提液，最为接近自然状态，能比较客观地反映水溶性蛋白质的真实状态，结果也表明用水提取是可行的。
1.5.2 蛋白质分离条件的优化 为了尽可能地消除毛细管壁的吸附，在实验中采取了以下措施。一是使用碱性缓冲液，使蛋白质和毛细管内壁都带上负电荷，两者之间由于存在静电排斥作用，而在一定程度上控制了蛋白质吸附问题；比较醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐等几种缓冲体系，发现以pH 9.11的硼酸盐缓冲体系为佳。另一方面也考察了缓冲液离子强度对分离的影响。试验了10～50 mmol/L系列浓度的硼酸盐缓冲体系，发现以20 mmol/L为宜，当然，离子强度增大，能有效屏蔽毛细管内壁的电荷，减少蛋白质的吸附，但同时可导致双电层中扩散层变薄，ζ电位降低，电渗流减小，使分析时间延长。
, 百拇医药
以20 mmol/L (pH 9.11)硼酸盐缓冲液为背景电解质，取菌丝蛋白质提取液连续进样5次，测得迁移时间的RSD为0.3%～1.6%，峰面积的RSD为1.5%～7.1%。
2 结果
2.1 红曲霉胞内可溶性蛋白质的HPCE比较 实验表明同属不同种红曲霉菌丝内水溶性蛋白质的成分和含量均存在显著差异，可用于鉴别不同种的红曲霉。表2列出了图中主要峰的迁移时间和峰面积，积分条件为：峰宽2.5 s，最小峰面积200。以4.52 min处的峰为基准(tR=1.00，面积计为100)，计算其他峰的相对迁移时间及相对峰面积。根据4～9 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，完全可以有效地鉴别红曲霉属真菌。
表2 胞内可溶性蛋白质的HPCE比较
Tab 2 Comparison of the electropherograms of soluble
, http://www.100md.com
intracellular proteins Strains
Number
of peaks
Relative migration time/relative area
5015
6
0.99/26.3, 1.00/13.7, 1.20/100,1.46/33.3, 1.70/39.4, 1.75/24.0
5016
5
1.00/6.14, 1.08/22.7, 1.20/100,1.47/36.2, 1.51/32.6
, 百拇医药
5017
6
1.00/26.7, 1.01/23.0, 1.09/16.3,1.21/100, 1.48/37.7, 1.73/38.0
5021
5
1.00/27.6, 1.20/100, 1.46/41.9,1.70/20.7, 1.75/18.4
5029
5
0.99/22.7, 1.00/30.8, 1.20/100,1.47/32.6, 1.71/40.6
, http://www.100md.com 5032
9
1.00/10.2, 1.08/32.2, 1.19/100,1.32/61.7, 1.65/17.3, 1.69/56.1,1.71/12.9, 1.74/10.2, 1.79/22.1
5035
11
1.00/14.6, 1.08/10.2, 1.19/100,1.42/35.1, 1.46/30.2, 1.50/16.1,1.70/19.9, 1.73/30.4, 1.78/10.4,2.02/16.7, 2.04/14.9
9001
10
, 百拇医药
1.00/28.8, 1.08/19.8, 1.19/100,1.49/36.7, 1.51/24.6, 1.70/29.3,1.73/45.4, 1.78/11.1, 1.88/21.6,2.01/17.4
2.2 红曲霉胞外可溶性蛋白质的HPCE比较 实验表明同属不同种红曲霉胞外可溶性蛋白质的成分和含量也存在一定差异，可用于鉴别不同种的红曲霉；表3列出了图中主要峰的迁移时间和峰面积，积分条件为：峰宽5 s，最小峰面积200；以6.70 min处的峰为基准，计算其他峰的相对迁移时间及相对峰面积。根据5～10 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，完全可以有效地鉴别红曲霉属真菌。表3 胞外可溶性蛋白质的电泳图谱比较
Tab 3 Comparison of the electropherograms of
soluble intracellular proteins Strains
, http://www.100md.com
Number
of peaks
Relative migration time/relative area
5015
5
0.84/100, 0.86/79.3, 0.91/56.2,0.93/45.1, 1.00/48.3
5016
3
0.91/44.3, 0.98/100, 1.15/35.4
5017
, 百拇医药
3
0.96/100,1.06/66.2, 1.20/45.7
5021
2
0.98/89.7, 1.08/100
5029
2
1.00/57.3, 1.10/100
5032
3
1.00/89.4, 1.10/100, 1.32/62.0
, http://www.100md.com
5035
4
1.03/100,1.13/43.5, 1.29/45.1,1.37/38.8
9001
4
0.92/55.7, 1.03/85.0, 1.30/49.9, 1.44/100
2.3 方法学检验 为检验方法的实际效果，运用此方法对从20个不同产地红曲中分离得到的14株红曲霉分离株进行鉴定，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。从目前收集的红曲样品状况来看，紫红曲霉发酵制备的红曲(12株)占据了红曲药材市场的主流。
3 讨论
, 百拇医药 本研究首次利用不同蛋白质的HPCE指纹图谱进行了红曲霉菌的鉴别，建立了适合混合蛋白质分离分析的CZE分析方法，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。因样品溶液配制过程相同，进样条件相同，保证了加入样品的浓度和体积的一致，故所得电泳图谱的变化反映了不同品种间水溶性蛋白质的成分和含量的差异。
本研究首次运用HPCE分别对红曲霉胞内及胞外可溶性蛋白质的成分和含量进行了比较，发现红曲霉胞内可溶性蛋白质成分明显多于红曲霉胞外可溶性蛋白质成分,提示红曲霉菌将一部分蛋白质分泌至液体培养液中,但大部分仍在胞内, 这具有十分重要的实际意义, 如目的成分主要存在于菌丝体内,可以采用大规模液体发酵生产, 收集菌体后进行分离分析, 简化工序,提高产率, 降低生产成本。又如为鉴定红曲霉，则可直接用澄明的液体培养液进行胞外可溶性蛋白质成分的HPCE分析, 省去破碎菌体提取蛋白质等步骤, 同样能有效鉴别不同种的红曲霉。■
基金项目：军队“九五”医学科研规划重点课题基金资助项目(96-Z-059)
, 百拇医药
作者简介：邢旺兴(1966～)，男，(汉族)，硕士，主管药师
参考文献：
[1]林赞峰. 红曲菌研究发展之演讲[J]. 科学农业,1992,40 (3/4):193-198.
[2]李钟庆. 红曲霉属的一个新种[J]. 微生物学报,1982,22(2):118-122.
[3]王义明,罗国安,魏 伟,等.毛细管电泳在医药领域中的应用[J].色谱,1997,15(6):494-498.
[4]胡 平,罗国安,王如骥,等.中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别[J].药学学报,1997,32(7):549-552.
[5]张朝晖,范国荣,徐国钧,等.12种海马、海龙类药材高效毛细管电泳法鉴别[J].中国中药杂志,1998,23(5):259-261.
[6]范国荣,胡晋红,林 梅,等.蛋白质类生化产品的高效毛细管电泳分析[J].第二军医大学学报,1998,19(4):360-363.
[7]Gordon MJ, Lee KJ, Arias AA, et al. Protocol for resolving protein mixtures in capillary zone electrophoresis[J]. Anal Chem,1991,63(1):69-72.
收稿日期：1999-09-11
修回日期：1999-12-28, 百拇医药
单位：邢旺兴(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；尹茶(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；宓鹤鸣(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；吴玉田(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；程荣珍(杭州尖峰德康药业有限公司)
关键词：红曲；红曲霉菌；毛细管电泳
第二军医大学学报000119 摘 要：目的：建立一种中药红曲基原真菌新的鉴定方法。方法：采用毛细管区带电泳分离模式，背景电解质为20 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 9.11)，电压20 kV，温度25 ℃；紫外检测波长214 nm，压差进样，进样时间5 s。结果：不同种红曲霉胞内和胞外水溶性蛋白质的成分和含量均存在显著差异。根据红曲霉胞内或胞外水溶性蛋白质4～10 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，可以有效地鉴别红曲霉属真菌，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。结论：高效毛细管电泳可用于红曲霉等真菌的分类和鉴定。
, 百拇医药
中图分类号：R 282.710.3 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)01-0059-03
Distinguish of original fungi of Hongqu with high performance capillary electrophoresis
XING Wang-Xing
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
YIN Cha
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, 百拇医药
MI He-Ming
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
WU Yu-Tian1
(Department of Analysis，College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
CHENG Rong-Zhen
(Hangzhou Jianfeng Dekang Medicine Limited Company)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objective: To establish a new method to identify original fungi of Chinese traditional medicine: Hongqu. Methods: The capillary zone electrophoresis method was used. The buffer used for protein separation was 20 mmol/L borate of pH 9.11. Proteins were monitored at 214 nm, voltage at 20 kV and pressure injection 5 s. The temperature of the capillary during electrophoresis was kept constant at 25℃. Results: The number of peaks and the contents either extracellular proteins of Monascus or intracellular proteins was obviously different, we could distinguish easily Monascus by the fingerprint peaks within 4 and 10 minutes either of extracellular proteins or of intracellular proteins. The results were consistent with morphologic study and analysis with scanning electron microscope. Conclusion: HPCE assay technique can classify and identify of Monascus fungi.
, 百拇医药
KEY WORDS：Hongqu; Monascus; capillary electrophoresis▲
[Acad J Sec Mil Med Univ, 2000, 21(1): 59-61]
红曲是一种医食两用的传统中药，近年来的研究发现，红曲同时具有降脂、降压、降糖和抑制肿瘤生长的作用[1]。然而，红曲基原真菌的命名在分类学上尚有争议[2]。高效毛细管电泳(HPCE)是近年迅速发展的一种新型分离分析技术，兼有普通电泳和色谱的双重优点[3]。HPCE能给出不同蛋白质的特征性图谱作为指纹图谱，用作鉴别的依据，如胡平等[4]鉴别了13个不同来源的菟丝子生药；张朝晖等[5]鉴别了12种海马、海龙药材。本研究采用HPCE 中常用的毛细管区带电泳(CZE)分离模式，以液基及菌丝中可溶性蛋白质为分析对象，建立了适合混合蛋白质分离分析的HPCE方法，并成功地鉴别了不同种红曲霉真菌，为真菌学鉴定提供了一种新的方法和手段，同时也为进一步筛选优良的降脂红曲提供了科学依据。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器 Water Capillary Ion Analyzer，美国Waters公司，数据的采集、分析和仪器的控制由工作站完成；HA-202M电子天平(日本); 普通石英毛细管柱，河北永年光导纤维厂；pHS-3c型酸度计，上海雷磁仪器厂；所用试剂均为分析纯。
1.2 样品 7种红曲霉菌及同属的土曲霉对照株共8株,见表1。
表1 红曲霉和对照菌株的名称及来源
Tab 1 The names and sources of strains of
Monascus fungi and control No.
Strain
, http://www.100md.com
Name
Sources
1
5015
Monascus aurantiacus Lee
Shanxi
2
5016
M.serorubesceus Sato
Shanxi
3
5017
, 百拇医药
M.albidus Sato
Fujian
4
5021
M.barkeri Dangerd
Liaoning
5
5029
M.ruber van Tieghem
Guangdong
6
5032
, 百拇医药
M. purpureus Went
Sichuan
7
5035
M.fuliginosus Sato
Yunnan
8
9001
Aspergillus terreus
Beijing
1.3 样品溶液的制备 取不同种红曲的液体培养物，转种1次，于32℃培养7 d后，抽滤收集菌丝。滤液为水层，直接进样测定胞外可溶性蛋白质部分。将菌丝用蒸馏水洗3次后，尽量抽干，称湿质量，加水冰浴研磨15 min,使成匀浆状，转移至离心管内1×104 r/ min离心 20 min，吸取上清液(使成菌丝50 mg/ml)进行HPCE 测定，为胞内可溶性蛋白质部分。
, http://www.100md.com
1.4 电泳条件 57 cm×75 μm毛细管柱，背景电解质为20 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 9.11)，电压20 kV，温度25℃，紫外检测波长214 nm，压差进样，进样时间5 s。两次进样间用0.1 mol/L氢氧化钠溶液冲柱1 min，水冲柱1 min，再用电解液冲柱1 min。
1.5 方法的优化
1.5.1 蛋白质提取条件的考察 文献报道多用pH 8.3的Tris-枸橼酸体系提取蛋白质，但由于不同的蛋白质有不同的等电点和溶解性能，仅用一种抽提液很难将所有的蛋白质完全提取出来。也有分别用酸性和碱性蛋白质抽提液的，又过于繁琐，同时抽提液中含有一定强度的离子，易使毛细管产生焦耳热。我们采用水作抽提液，最为接近自然状态，能比较客观地反映水溶性蛋白质的真实状态，结果也表明用水提取是可行的。
1.5.2 蛋白质分离条件的优化 为了尽可能地消除毛细管壁的吸附，在实验中采取了以下措施。一是使用碱性缓冲液，使蛋白质和毛细管内壁都带上负电荷，两者之间由于存在静电排斥作用，而在一定程度上控制了蛋白质吸附问题；比较醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐等几种缓冲体系，发现以pH 9.11的硼酸盐缓冲体系为佳。另一方面也考察了缓冲液离子强度对分离的影响。试验了10～50 mmol/L系列浓度的硼酸盐缓冲体系，发现以20 mmol/L为宜，当然，离子强度增大，能有效屏蔽毛细管内壁的电荷，减少蛋白质的吸附，但同时可导致双电层中扩散层变薄，ζ电位降低，电渗流减小，使分析时间延长。
, 百拇医药
以20 mmol/L (pH 9.11)硼酸盐缓冲液为背景电解质，取菌丝蛋白质提取液连续进样5次，测得迁移时间的RSD为0.3%～1.6%，峰面积的RSD为1.5%～7.1%。
2 结果
2.1 红曲霉胞内可溶性蛋白质的HPCE比较 实验表明同属不同种红曲霉菌丝内水溶性蛋白质的成分和含量均存在显著差异，可用于鉴别不同种的红曲霉。表2列出了图中主要峰的迁移时间和峰面积，积分条件为：峰宽2.5 s，最小峰面积200。以4.52 min处的峰为基准(tR=1.00，面积计为100)，计算其他峰的相对迁移时间及相对峰面积。根据4～9 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，完全可以有效地鉴别红曲霉属真菌。
表2 胞内可溶性蛋白质的HPCE比较
Tab 2 Comparison of the electropherograms of soluble
, http://www.100md.com
intracellular proteins Strains
Number
of peaks
Relative migration time/relative area
5015
6
0.99/26.3, 1.00/13.7, 1.20/100,1.46/33.3, 1.70/39.4, 1.75/24.0
5016
5
1.00/6.14, 1.08/22.7, 1.20/100,1.47/36.2, 1.51/32.6
, 百拇医药
5017
6
1.00/26.7, 1.01/23.0, 1.09/16.3,1.21/100, 1.48/37.7, 1.73/38.0
5021
5
1.00/27.6, 1.20/100, 1.46/41.9,1.70/20.7, 1.75/18.4
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5
0.99/22.7, 1.00/30.8, 1.20/100,1.47/32.6, 1.71/40.6
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9
1.00/10.2, 1.08/32.2, 1.19/100,1.32/61.7, 1.65/17.3, 1.69/56.1,1.71/12.9, 1.74/10.2, 1.79/22.1
5035
11
1.00/14.6, 1.08/10.2, 1.19/100,1.42/35.1, 1.46/30.2, 1.50/16.1,1.70/19.9, 1.73/30.4, 1.78/10.4,2.02/16.7, 2.04/14.9
9001
10
, 百拇医药
1.00/28.8, 1.08/19.8, 1.19/100,1.49/36.7, 1.51/24.6, 1.70/29.3,1.73/45.4, 1.78/11.1, 1.88/21.6,2.01/17.4
2.2 红曲霉胞外可溶性蛋白质的HPCE比较 实验表明同属不同种红曲霉胞外可溶性蛋白质的成分和含量也存在一定差异，可用于鉴别不同种的红曲霉；表3列出了图中主要峰的迁移时间和峰面积，积分条件为：峰宽5 s，最小峰面积200；以6.70 min处的峰为基准，计算其他峰的相对迁移时间及相对峰面积。根据5～10 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量，完全可以有效地鉴别红曲霉属真菌。表3 胞外可溶性蛋白质的电泳图谱比较
Tab 3 Comparison of the electropherograms of
soluble intracellular proteins Strains
, http://www.100md.com
Number
of peaks
Relative migration time/relative area
5015
5
0.84/100, 0.86/79.3, 0.91/56.2,0.93/45.1, 1.00/48.3
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0.98/89.7, 1.08/100
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, http://www.100md.com
5035
4
1.03/100,1.13/43.5, 1.29/45.1,1.37/38.8
9001
4
0.92/55.7, 1.03/85.0, 1.30/49.9, 1.44/100
2.3 方法学检验 为检验方法的实际效果，运用此方法对从20个不同产地红曲中分离得到的14株红曲霉分离株进行鉴定，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。从目前收集的红曲样品状况来看，紫红曲霉发酵制备的红曲(12株)占据了红曲药材市场的主流。
3 讨论
, 百拇医药 本研究首次利用不同蛋白质的HPCE指纹图谱进行了红曲霉菌的鉴别，建立了适合混合蛋白质分离分析的CZE分析方法，结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致。因样品溶液配制过程相同，进样条件相同，保证了加入样品的浓度和体积的一致，故所得电泳图谱的变化反映了不同品种间水溶性蛋白质的成分和含量的差异。
本研究首次运用HPCE分别对红曲霉胞内及胞外可溶性蛋白质的成分和含量进行了比较，发现红曲霉胞内可溶性蛋白质成分明显多于红曲霉胞外可溶性蛋白质成分,提示红曲霉菌将一部分蛋白质分泌至液体培养液中,但大部分仍在胞内, 这具有十分重要的实际意义, 如目的成分主要存在于菌丝体内,可以采用大规模液体发酵生产, 收集菌体后进行分离分析, 简化工序,提高产率, 降低生产成本。又如为鉴定红曲霉，则可直接用澄明的液体培养液进行胞外可溶性蛋白质成分的HPCE分析, 省去破碎菌体提取蛋白质等步骤, 同样能有效鉴别不同种的红曲霉。■
基金项目：军队“九五”医学科研规划重点课题基金资助项目(96-Z-059)
, 百拇医药
作者简介：邢旺兴(1966～)，男，(汉族)，硕士，主管药师
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收稿日期：1999-09-11
修回日期：1999-12-28, 百拇医药