IL-2基因修饰对巨噬细胞杀瘤活性的影响
作者：邱实 闵志廉 雷虹 弭静 朱学军 赵勇 张明徽 曹雪涛
单位：邱实(第二军医大学长征医院泌尿外科，上海 200003)；闵志廉(第二军医大学长征医院泌尿外科，上海 200003)；雷虹(基础医学部免疫学教研室)；弭静(基础医学部免疫学教研室)；朱学军(基础医学部免疫学教研室)；赵勇(基础医学部免疫学教研室)；张明徽(基础医学部免疫学教研室)；曹雪涛(基础医学部免疫学教研室)
关键词：巨噬细胞；白细胞介素2；细胞毒性；免疫
第二军医大学学报000108 摘 要：目的：观察IL-2基因修饰对小鼠腹腔巨噬细胞免疫效应功能的影响。方法：通过重组腺病毒介导，在体外将IL-2基因转染至小鼠腹腔巨噬细胞，检测IL-2基因修饰的巨噬细胞TNF，IL-1和NO分泌水平及其杀伤活性。结果：IL-2基因修饰的巨噬细胞TNF，IL-1和NO分泌水平显著提高，对巨噬细胞敏感株L1210细胞以及Renca细胞的杀伤活性显著增强。结论：IL-2基因修饰可增强巨噬细胞的细胞毒效应。本研究为IL-2基因修饰的巨噬细胞治疗肿瘤提供了实验依据。
, 百拇医药
中图分类号：R 730.51 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)01-0024-03
Enhanced cytotoxicity of macrophages transfected with IL-2 gene
QIU Shi
(Department of Urology Surgery, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
MIN Zhi-Lian1,(Department of Urology Surgery, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
, 百拇医药
LEI Hong
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
MI Jing
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
ZHU Xue-Jun
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
, 百拇医药
ZHAO Yong
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
ZHANG Ming-Hui
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
CAO Xue-Tao
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objective: To investigate the effects of macrophages transfected with IL-2 gene. Methods: IL-2 gene was transfected into murine peritoneal macrophages by adenovirus. Levels of TNF, IL-1 and NO in the supernatant of macrophages as well as cytotoxicity of macrophages to target cells L1210 and Renca cells were assayed. Results: The productions of TNF,IL-1 and NO in the supernatant of IL-2 gene-modified macrophages increased, cytotoxicity of the macrophages to L1210 cells and Renca cells also increased significantly. Conclusion: Transfection of IL-2 gene to macrophages can enhance their cytotoxicity, thus provide experimental basis for immunotherapy of tumor with IL-2 gene-modified macrophages.
, 百拇医药
KEY WORDS：macrophage; interleukin-2; cytotoxicity; immunologic
[Acad J Sec Mil Med Univ, 2000, 21(1): 24-26]
巨噬细胞(macrophage， Mφ)是重要的免疫效应细胞，在机体抗肿瘤免疫反应中起重要作用，但巨噬细胞必须活化后才能发挥抗肿瘤作用。IL-2能激活巨噬细胞[1]，增强机体抗瘤免疫功能；基因转染可为巨噬细胞提供持续刺激因子，维持其活化状态。由于巨噬细胞处于非增殖期，应用逆转录病毒等载体难以转染或转染效率太低，而腺病毒载体可有效地介导细胞因子转染至巨噬细胞中[2]，因此，我们选择以IL-2基因为目的基因，以腺病毒为基因转移方式，证明了IL-2基因修饰的巨噬细胞能持续稳定地分泌IL-2(另文报道)。在此基础上，本研究进一步观察了IL-2基因修饰的巨噬细胞的分泌功能和杀伤活性的变化。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 细胞株 小鼠肾细胞癌细胞(Renca)由美国国立癌症研究所Wiltroult博士馈赠；小鼠成纤维细胞L929、白血病细胞株L1210均由本室常规传代培养。
1.2 试剂 表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒载体Adex1 CA mIL-2 (Ad-mIL-2)、表达LacZ对照基因的重组腺病毒载体Adex1 CA-RxZ(Ad-LacZ)由日本癌症研究会分子生物治疗研究部Hirofumi Hamada博士惠赠。
1.3 方法
1.3.1 小鼠腹腔巨噬细胞的制备及IL-2基因的修饰 常规提取腹腔细胞，贴壁2 h后洗去悬浮细胞，可获得较纯的贴壁巨噬细胞。12 mmol/L利多卡因在37℃条件下消化巨噬细胞。按常规方法，将新鲜分离的腹腔巨噬细胞加至24孔板中(0.5×106个/孔)，置37℃，5% CO2 孵箱中孵育1 h，弃去悬浮细胞，用RPMI 1640洗3次，每孔按50 MOI (mutiplicity of infection)加入稀释的腺病毒0.25 ml，每5 min 轻摇1次，使病毒与细胞充分接触，2 h后弃去病毒液，补充RPMI 1640至1 ml，FCS终浓度5%，置37℃，5% CO2 孵箱中培养；同时设立转染LacZ基因(LacZ-Mφ组)和未处理的巨噬细胞(Mφ组)为对照。
, 百拇医药
1.3.2 巨噬细胞TNF，IL-1和NO分泌水平的检测 于IL-2基因修饰后24 h，收集巨噬细胞(0.5×106个/孔)培养上清检测TNF，IL-1的水平。TNF的检测采用以L929为靶细胞的结晶紫染色法；IL-1活性以小鼠胸腺细胞作为检测细胞，用间接MTT法测定；NO检测根据Griess反应测定[3]，其原理是在酸性溶液中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮盐，再与α-萘胺发生偶合反应，生成紫红色偶氮色素，以NaNO2作为标准品，根据比色的结果计算NO2-的量，分别于IL-2基因修饰后第12, 24, 36, 48, 60小时检测巨噬细胞NO的动态分泌量。
1.3.3 巨噬细胞杀伤活性的检测 分别以巨噬细胞敏感株L1210和Renca细胞作为靶细胞，采用间接MTT法[4]，于转染后24 h检测巨噬细胞的杀伤活性，效靶比(E∶T)为50∶1；以Renca细胞作为靶细胞，分别于IL-2基因修饰后第12, 24, 36, 48, 60小时检测巨噬细胞杀瘤活性的变化。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 采用未配对计量资料的t检验。
2 结果
2.1 IL-2基因修饰的巨噬细胞抗原提呈功能的变化 本室曾证明IL-2基因修饰的巨噬细胞持续稳定地分泌IL-2，IL-2基因修饰24 h后分泌量达高峰，106 Mφ为413.5 U/ml。通过FACS检测发现其表面分子MHCⅡ，B7-1，B7-2和CD40表达增加，通过混合淋巴细胞反应(MLR)检测证明其抗原提呈能力也显著提高(另文报道)，表明IL-2基因修饰可促进巨噬细胞表面分子的表达，增强巨噬细胞的抗原提呈能力。
2.2 IL-2基因修饰的巨噬细胞杀伤活性的检测 表1可见，IL-2基因修饰的巨噬细胞对L1210及Renca细胞杀伤活性与LacZ-Mφ组和Mφ组相比均有显著提高(P<0.05)，而LacZ-Mφ组和Mφ组的巨噬细胞杀伤活性无明显差别。
, 百拇医药
表1 IL-2基因修饰后24 h巨噬细胞的杀伤活性
Tab 1 Cytotoxicity of macrophages
transfected with IL-2 gene
(n=5,
±s,%) Group
L1210
Renca
Mφ
25±5.9*
17±5.0*
, http://www.100md.com
LacZ-Mφ
23±5.5*
19±4.9*
IL-2-Mφ
43±8.7
37±6.5
*P<0.05 vs IL-2-Mφ group2.3 IL-2基因修饰的巨噬细胞TNF，IL-1，NO分泌水平的检测 如表2所示，IL-2基因修饰巨噬细胞24 h后，细胞培养上清中TNF，IL-1，NO较对照组均有明显升高(P<0.01)。从图1可见，巨噬细胞分泌的NO水平在IL-2基因修饰后36 h达到高峰；巨噬细胞杀伤活性随着NO分泌量的变化而变化，两者变化趋势一致。结果提示，IL-2基因修饰能增强巨噬细胞的细胞毒活性，并与其上述分泌的效应分子，特别是NO有着密切的关系。
, 百拇医药
表2 IL-2基因修饰后24 h巨噬细胞培
养上清中TNF，IL-1和NO水平
Tab 2 The levels of TNF, IL-1 and NO
in the supernatant of the macrophages
transfected with IL-2 gene
(n=5,±s) Group
TNF
(z/U。ml-1)
, http://www.100md.com
IL-1
(z/U。ml-1)
NO
(ρB/ng。ml-1)
Mφ
0.45±0.15**
0.45±0.21**
180±25**
LacZ-Mφ
0.30±0.17**
, 百拇医药
0.30±0.18**
160±29**
IL-2-Mφ
7.20±1.50
8.90±1.70
780±140
**P<0.01 vs IL-2-Mφ group
图1 IL-2基因修饰的巨噬细胞
杀伤活性与NO的关系
, 百拇医药
Fig 1 Relationship between cytotoxicity of IL-2
gene-modified macrophages and production of NO
○: Level of NO; ●: Mφ cytotoxicity; n=5,±s
3 讨论
巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，具有独特的杀伤肿瘤细胞作用。首先，它在体外可特异性地杀伤肿瘤细胞而不损伤正常的组织细胞，许多体外实验表明，巨噬细胞可以有效地区别肿瘤细胞与正常的组织细胞，并能选择性地杀伤多种肿瘤细胞[5]；其次，巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的作用与肿瘤细胞的免疫原性，转移潜能和细胞周期无关，而且极少出现肿瘤细胞对巨噬细胞杀伤作用的抵抗性。因此，巨噬细胞在免疫监视和抑制肿瘤生长方面起到重要的作用。但人们也发现，肿瘤组织及其周围的侵润的巨噬细胞(肿瘤相关巨噬细胞，TAM)可促进血管增生，引起肿瘤细胞播散和转移。“巨噬细胞平衡”学说认为，TAM具有双重作用，既抑制又促进肿瘤生长。肿瘤组织内环境影响TAM的功能，肿瘤细胞分泌的活性因子能使TAM转化为“肿瘤支持细胞”；但是，如果单核细胞体外分化为成熟的巨噬细胞，并进一步活化后，已具有稳定的表型和功能，自体回输可避免此影响[6]。在临床方面，体外活化的巨噬细胞自体回输治疗肿瘤已经取得一定的疗效[7]。所以，用活化的巨噬细胞回输治疗转移性或对化疗不敏感性肿瘤的方法，为临床治疗难治性肿瘤提供了新的思路。IL-2能直接增强人体单核细胞细胞毒作用[8]。我们在以往的工作中，曾将IL-2基因转入巨噬细胞，发现巨噬细胞MHC-Ⅱ，B7，CD40表达增加，抗原提呈能力提高，说明IL-2基因修饰能增强巨噬细胞诱导特异性免疫反应的能力。
, 百拇医药
作为抗肿瘤的一种重要效应细胞，巨噬细胞非特异性免疫功能也直接影响着其抗肿瘤作用的强弱。巨噬细胞主要通过内吞和分泌一些效应分子发挥免疫效应功能，杀伤肿瘤细胞。具体机制如下：(1)通过释放炎性介质如TNF，IL-1，NO及丝氨酸酯酶等抑制肿瘤细胞的增殖及DNA合成，杀伤肿瘤细胞；(2)通过与肿瘤细胞的直接接触或分泌的生物活性因子如NO，TNF，IL-1的作用诱导肿瘤细胞的凋亡；(3)巨噬细胞Fc受体与覆盖于肿瘤细胞表面的IgG结合，发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；(4)通过直接吞噬作用消毁肿瘤细胞。现在认为TNF和NO是巨噬细胞最重要的肿瘤杀伤效应分子，TNF和NO相互作用，相互协调，活化的巨噬细胞对一些TNF不敏感的肿瘤细胞的杀伤则通过NO的作用，NO又可使TNF杀伤原本对其不敏感的肿瘤细胞。本实验也发现IL-2基因修饰的巨噬细胞非特异性免疫力得到增强，表现在IL-2基因修饰的巨噬细胞分泌的TNF，IL-1，特别是NO明显提高，巨噬细胞细胞毒性增加，巨噬细胞细胞毒性与NO的分泌紧密相关。本研究结果为以后开展IL-2基因修饰的巨噬细胞回输治疗肿瘤提供了实验依据。■
, 百拇医药
基金项目：上海市优秀学科带头人计划资助项目(97XD1406)
作者简介：邱实(1966～)，男(汉族)，博士，主治医师
参考文献：
[1]曹雪涛 主编. 白细胞介素2的基础与临床[M]. 北京：北京科学技术出版社， 1990. 90-93.
[2]雷 虹，曹雪涛，于益芝，等. 重组腺病毒介导IFN-γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能分析[J]. 中国免疫学杂志，1997，13(3)：131-135.
[3]Ding AH, Nathan CF, Stuehr DJ. Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophages[J]. J Immunol, 1988, 141(7): 2407-2412.
, 百拇医药
[4]于益芝，曹雪涛，雷 虹，等. 肿瘤抗原致敏的GM-CSF基因转染巨噬细胞对实验性肺转移肿瘤的治疗作用[J]. 中国科学(C辑)，1997，27(5)：451-456.
[5]Killion JJ, Fidler IJ. Therapy of cancer metastasis by tumoricidal activation of tissue macrophages using liposome-encapsulated immunomodulators[J]. Pharmacol Ther, 1998, 78(3): 141-154.
[6]Hennemann B, Beckmann G, Eichelmann A, et al. Phase Ⅰ trial of adoptive immunotherapy of cancer patients using monocyte-derived macrophages activated with interferon γ and lipopolysaccharide[J]. Cancer Immunol Immunother, 1998, 45(5): 250-256.
, http://www.100md.com
[7]Lesimple T, Moisan A, Toujas L. Autologous human macrophages and anti-tumour cell therapy[J]. Res Immunol, 1998, 149(7-8): 663-671.
[8]Malkovsky M, Loveland B, North M, et al. Recombinant interleukin-2 directly augments the cytotoxicity of human monocytes[J]. Nature, 1987, 325(6102): 262-265.
收稿日期：1999-07-11
修回日期：1999-10-19, 百拇医药
单位：邱实(第二军医大学长征医院泌尿外科，上海 200003)；闵志廉(第二军医大学长征医院泌尿外科，上海 200003)；雷虹(基础医学部免疫学教研室)；弭静(基础医学部免疫学教研室)；朱学军(基础医学部免疫学教研室)；赵勇(基础医学部免疫学教研室)；张明徽(基础医学部免疫学教研室)；曹雪涛(基础医学部免疫学教研室)
关键词：巨噬细胞；白细胞介素2；细胞毒性；免疫
第二军医大学学报000108 摘 要：目的：观察IL-2基因修饰对小鼠腹腔巨噬细胞免疫效应功能的影响。方法：通过重组腺病毒介导，在体外将IL-2基因转染至小鼠腹腔巨噬细胞，检测IL-2基因修饰的巨噬细胞TNF，IL-1和NO分泌水平及其杀伤活性。结果：IL-2基因修饰的巨噬细胞TNF，IL-1和NO分泌水平显著提高，对巨噬细胞敏感株L1210细胞以及Renca细胞的杀伤活性显著增强。结论：IL-2基因修饰可增强巨噬细胞的细胞毒效应。本研究为IL-2基因修饰的巨噬细胞治疗肿瘤提供了实验依据。
, 百拇医药
中图分类号：R 730.51 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)01-0024-03
Enhanced cytotoxicity of macrophages transfected with IL-2 gene
QIU Shi
(Department of Urology Surgery, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
MIN Zhi-Lian1,(Department of Urology Surgery, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China)
, 百拇医药
LEI Hong
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
MI Jing
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
ZHU Xue-Jun
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
, 百拇医药
ZHAO Yong
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
ZHANG Ming-Hui
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
CAO Xue-Tao
(Department of Immunology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objective: To investigate the effects of macrophages transfected with IL-2 gene. Methods: IL-2 gene was transfected into murine peritoneal macrophages by adenovirus. Levels of TNF, IL-1 and NO in the supernatant of macrophages as well as cytotoxicity of macrophages to target cells L1210 and Renca cells were assayed. Results: The productions of TNF,IL-1 and NO in the supernatant of IL-2 gene-modified macrophages increased, cytotoxicity of the macrophages to L1210 cells and Renca cells also increased significantly. Conclusion: Transfection of IL-2 gene to macrophages can enhance their cytotoxicity, thus provide experimental basis for immunotherapy of tumor with IL-2 gene-modified macrophages.
, 百拇医药
KEY WORDS：macrophage; interleukin-2; cytotoxicity; immunologic
[Acad J Sec Mil Med Univ, 2000, 21(1): 24-26]
巨噬细胞(macrophage， Mφ)是重要的免疫效应细胞，在机体抗肿瘤免疫反应中起重要作用，但巨噬细胞必须活化后才能发挥抗肿瘤作用。IL-2能激活巨噬细胞[1]，增强机体抗瘤免疫功能；基因转染可为巨噬细胞提供持续刺激因子，维持其活化状态。由于巨噬细胞处于非增殖期，应用逆转录病毒等载体难以转染或转染效率太低，而腺病毒载体可有效地介导细胞因子转染至巨噬细胞中[2]，因此，我们选择以IL-2基因为目的基因，以腺病毒为基因转移方式，证明了IL-2基因修饰的巨噬细胞能持续稳定地分泌IL-2(另文报道)。在此基础上，本研究进一步观察了IL-2基因修饰的巨噬细胞的分泌功能和杀伤活性的变化。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 细胞株 小鼠肾细胞癌细胞(Renca)由美国国立癌症研究所Wiltroult博士馈赠；小鼠成纤维细胞L929、白血病细胞株L1210均由本室常规传代培养。
1.2 试剂 表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒载体Adex1 CA mIL-2 (Ad-mIL-2)、表达LacZ对照基因的重组腺病毒载体Adex1 CA-RxZ(Ad-LacZ)由日本癌症研究会分子生物治疗研究部Hirofumi Hamada博士惠赠。
1.3 方法
1.3.1 小鼠腹腔巨噬细胞的制备及IL-2基因的修饰 常规提取腹腔细胞，贴壁2 h后洗去悬浮细胞，可获得较纯的贴壁巨噬细胞。12 mmol/L利多卡因在37℃条件下消化巨噬细胞。按常规方法，将新鲜分离的腹腔巨噬细胞加至24孔板中(0.5×106个/孔)，置37℃，5% CO2 孵箱中孵育1 h，弃去悬浮细胞，用RPMI 1640洗3次，每孔按50 MOI (mutiplicity of infection)加入稀释的腺病毒0.25 ml，每5 min 轻摇1次，使病毒与细胞充分接触，2 h后弃去病毒液，补充RPMI 1640至1 ml，FCS终浓度5%，置37℃，5% CO2 孵箱中培养；同时设立转染LacZ基因(LacZ-Mφ组)和未处理的巨噬细胞(Mφ组)为对照。
, 百拇医药
1.3.2 巨噬细胞TNF，IL-1和NO分泌水平的检测 于IL-2基因修饰后24 h，收集巨噬细胞(0.5×106个/孔)培养上清检测TNF，IL-1的水平。TNF的检测采用以L929为靶细胞的结晶紫染色法；IL-1活性以小鼠胸腺细胞作为检测细胞，用间接MTT法测定；NO检测根据Griess反应测定[3]，其原理是在酸性溶液中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮盐，再与α-萘胺发生偶合反应，生成紫红色偶氮色素，以NaNO2作为标准品，根据比色的结果计算NO2-的量，分别于IL-2基因修饰后第12, 24, 36, 48, 60小时检测巨噬细胞NO的动态分泌量。
1.3.3 巨噬细胞杀伤活性的检测 分别以巨噬细胞敏感株L1210和Renca细胞作为靶细胞，采用间接MTT法[4]，于转染后24 h检测巨噬细胞的杀伤活性，效靶比(E∶T)为50∶1；以Renca细胞作为靶细胞，分别于IL-2基因修饰后第12, 24, 36, 48, 60小时检测巨噬细胞杀瘤活性的变化。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 采用未配对计量资料的t检验。
2 结果
2.1 IL-2基因修饰的巨噬细胞抗原提呈功能的变化 本室曾证明IL-2基因修饰的巨噬细胞持续稳定地分泌IL-2，IL-2基因修饰24 h后分泌量达高峰，106 Mφ为413.5 U/ml。通过FACS检测发现其表面分子MHCⅡ，B7-1，B7-2和CD40表达增加，通过混合淋巴细胞反应(MLR)检测证明其抗原提呈能力也显著提高(另文报道)，表明IL-2基因修饰可促进巨噬细胞表面分子的表达，增强巨噬细胞的抗原提呈能力。
2.2 IL-2基因修饰的巨噬细胞杀伤活性的检测 表1可见，IL-2基因修饰的巨噬细胞对L1210及Renca细胞杀伤活性与LacZ-Mφ组和Mφ组相比均有显著提高(P<0.05)，而LacZ-Mφ组和Mφ组的巨噬细胞杀伤活性无明显差别。
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表1 IL-2基因修饰后24 h巨噬细胞的杀伤活性
Tab 1 Cytotoxicity of macrophages
transfected with IL-2 gene
(n=5,
±s,%) GroupL1210
Renca
Mφ
25±5.9*
17±5.0*
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LacZ-Mφ
23±5.5*
19±4.9*
IL-2-Mφ
43±8.7
37±6.5
*P<0.05 vs IL-2-Mφ group2.3 IL-2基因修饰的巨噬细胞TNF，IL-1，NO分泌水平的检测 如表2所示，IL-2基因修饰巨噬细胞24 h后，细胞培养上清中TNF，IL-1，NO较对照组均有明显升高(P<0.01)。从图1可见，巨噬细胞分泌的NO水平在IL-2基因修饰后36 h达到高峰；巨噬细胞杀伤活性随着NO分泌量的变化而变化，两者变化趋势一致。结果提示，IL-2基因修饰能增强巨噬细胞的细胞毒活性，并与其上述分泌的效应分子，特别是NO有着密切的关系。
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表2 IL-2基因修饰后24 h巨噬细胞培
养上清中TNF，IL-1和NO水平
Tab 2 The levels of TNF, IL-1 and NO
in the supernatant of the macrophages
transfected with IL-2 gene
(n=5,
±s) GroupTNF
(z/U。ml-1)
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IL-1
(z/U。ml-1)
NO
(ρB/ng。ml-1)
Mφ
0.45±0.15**
0.45±0.21**
180±25**
LacZ-Mφ
0.30±0.17**
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0.30±0.18**
160±29**
IL-2-Mφ
7.20±1.50
8.90±1.70
780±140
**P<0.01 vs IL-2-Mφ group
图1 IL-2基因修饰的巨噬细胞
杀伤活性与NO的关系
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Fig 1 Relationship between cytotoxicity of IL-2
gene-modified macrophages and production of NO
○: Level of NO; ●: Mφ cytotoxicity; n=5,
±s3 讨论
巨噬细胞是重要的免疫效应细胞，具有独特的杀伤肿瘤细胞作用。首先，它在体外可特异性地杀伤肿瘤细胞而不损伤正常的组织细胞，许多体外实验表明，巨噬细胞可以有效地区别肿瘤细胞与正常的组织细胞，并能选择性地杀伤多种肿瘤细胞[5]；其次，巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的作用与肿瘤细胞的免疫原性，转移潜能和细胞周期无关，而且极少出现肿瘤细胞对巨噬细胞杀伤作用的抵抗性。因此，巨噬细胞在免疫监视和抑制肿瘤生长方面起到重要的作用。但人们也发现，肿瘤组织及其周围的侵润的巨噬细胞(肿瘤相关巨噬细胞，TAM)可促进血管增生，引起肿瘤细胞播散和转移。“巨噬细胞平衡”学说认为，TAM具有双重作用，既抑制又促进肿瘤生长。肿瘤组织内环境影响TAM的功能，肿瘤细胞分泌的活性因子能使TAM转化为“肿瘤支持细胞”；但是，如果单核细胞体外分化为成熟的巨噬细胞，并进一步活化后，已具有稳定的表型和功能，自体回输可避免此影响[6]。在临床方面，体外活化的巨噬细胞自体回输治疗肿瘤已经取得一定的疗效[7]。所以，用活化的巨噬细胞回输治疗转移性或对化疗不敏感性肿瘤的方法，为临床治疗难治性肿瘤提供了新的思路。IL-2能直接增强人体单核细胞细胞毒作用[8]。我们在以往的工作中，曾将IL-2基因转入巨噬细胞，发现巨噬细胞MHC-Ⅱ，B7，CD40表达增加，抗原提呈能力提高，说明IL-2基因修饰能增强巨噬细胞诱导特异性免疫反应的能力。
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作为抗肿瘤的一种重要效应细胞，巨噬细胞非特异性免疫功能也直接影响着其抗肿瘤作用的强弱。巨噬细胞主要通过内吞和分泌一些效应分子发挥免疫效应功能，杀伤肿瘤细胞。具体机制如下：(1)通过释放炎性介质如TNF，IL-1，NO及丝氨酸酯酶等抑制肿瘤细胞的增殖及DNA合成，杀伤肿瘤细胞；(2)通过与肿瘤细胞的直接接触或分泌的生物活性因子如NO，TNF，IL-1的作用诱导肿瘤细胞的凋亡；(3)巨噬细胞Fc受体与覆盖于肿瘤细胞表面的IgG结合，发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；(4)通过直接吞噬作用消毁肿瘤细胞。现在认为TNF和NO是巨噬细胞最重要的肿瘤杀伤效应分子，TNF和NO相互作用，相互协调，活化的巨噬细胞对一些TNF不敏感的肿瘤细胞的杀伤则通过NO的作用，NO又可使TNF杀伤原本对其不敏感的肿瘤细胞。本实验也发现IL-2基因修饰的巨噬细胞非特异性免疫力得到增强，表现在IL-2基因修饰的巨噬细胞分泌的TNF，IL-1，特别是NO明显提高，巨噬细胞细胞毒性增加，巨噬细胞细胞毒性与NO的分泌紧密相关。本研究结果为以后开展IL-2基因修饰的巨噬细胞回输治疗肿瘤提供了实验依据。■
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基金项目：上海市优秀学科带头人计划资助项目(97XD1406)
作者简介：邱实(1966～)，男(汉族)，博士，主治医师
参考文献：
[1]曹雪涛 主编. 白细胞介素2的基础与临床[M]. 北京：北京科学技术出版社， 1990. 90-93.
[2]雷 虹，曹雪涛，于益芝，等. 重组腺病毒介导IFN-γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能分析[J]. 中国免疫学杂志，1997，13(3)：131-135.
[3]Ding AH, Nathan CF, Stuehr DJ. Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophages[J]. J Immunol, 1988, 141(7): 2407-2412.
, 百拇医药
[4]于益芝，曹雪涛，雷 虹，等. 肿瘤抗原致敏的GM-CSF基因转染巨噬细胞对实验性肺转移肿瘤的治疗作用[J]. 中国科学(C辑)，1997，27(5)：451-456.
[5]Killion JJ, Fidler IJ. Therapy of cancer metastasis by tumoricidal activation of tissue macrophages using liposome-encapsulated immunomodulators[J]. Pharmacol Ther, 1998, 78(3): 141-154.
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收稿日期：1999-07-11
修回日期：1999-10-19, 百拇医药