袖套法豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植模型的建立
作者：李晓平 李朝龙 沈新明 蒋邦好
单位：李晓平(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)；李朝龙(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)；沈新明(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)；蒋邦好(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)
关键词：全胰十二指肠移植；豚鼠；大鼠
第一军医大学学报000110 摘要：目的 为研究超急性排斥反应及对策，建立异种胰腺移植模型。方法 以豚鼠和大鼠为供受者，用袖套法吻合静脉建立异种全胰十二指肠移植模型。结果 共行42次手术，成功38例，均有内分泌功能，移植有效率为100%。结论 本模型具有操作简单，冷缺血及腹主动脉阻断时间短，不易形成血栓及吻合口漏等优点，为一较实用的研究异种胰腺移植模型。
中图分类号：R602 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0030-02
, http://www.100md.com
Establishment of guinea pig to rat pancreaticoduodenal xenograft model
LI Xiao-ping, LI Chao-long, SHEN Xin-ming, JIANG Bang-hao
(Department of Hepatobiliary and Vascular surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
Abstract: Objective To establish a guinea pig to rat pancreaticoduodenal xenograft model for studying hyperacute rejection. Methods Superior mesenteric vier-left renal vein cuff anastomases were resected. An end to side anastomasis was made between the graft duodenum and the host jejunum. Results Forty-two operations were done, and 38 cases were successful, of which all grafts of the successful cases had endocrinium function. Conclusions This model can reduce the incidence of thrombosis and the duration of ischemia during operation. It is a simple and practical. To establish a guinea pig to rat pancreaticoduodenal xenograft model for studying hyperacute rejection. Methods Superior mesenteric vier-left renal vein cuff anastomases were resected. An end to side anastomasis was made between the graft duodenum and the host jejunum. Results Forty-two operations were done, and 38 cases were successful, of which all grafts of the successful cases had endocrinium function. Conclusions This model can reduce the incidence of thrombosis and the duration of ischemia during operation. It is a simple and practical.
, 百拇医药
Key words: pancreaticoduodenal xenograft; guinea pig; rat
豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植尚未见报道。作者参考同种大鼠移植模型进行探索。Sun Lee[1]术式须同时阻断受体腹主动脉及下腔静脉，对糖尿病大鼠干扰大，术后并发症多、死亡率高。作者在改良的同种移植模型[2]基础上利用袖套法吻合供者门静脉与受者肾静脉简化手术过程建立豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植模型，成功率高，收到良好的效果。
1 材料与方法
1.1 实验动物
供者为雄性豚鼠，体质量300～350 g，受者为雄性Wistar大鼠，体质量250～300 g，由第一军医大学动物实验中心提供。
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1.2 糖尿病模型的制备1.2 糖尿病模型的制备
选合格大鼠，用链脲霉素(Streptorotocin，STZ)60 mg/kg从尾静脉注射，以尿糖+++ ～ ++++、非禁食血糖超过20 mmol/L，维持1周以上并且稳定的糖尿病模型为受者。
1.3 袖套吻合管1.3 袖套吻合管
参考蒋邦好[3] 的设计，由聚乙烯管加工而成，套管的管环长0.3 cm，一端切去2/3管壁作为柄，管壁中部刻有环形槽，内径0.15 cm，外径0.25 cm。
1.4 移植胰腺功能测定1.4 移植胰腺功能测定
以移植后大鼠非禁食血糖低于11.2 mmol/L，尿糖阴性为移植胰功能良好的标准，超过者为排斥。
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1.5 供者准备1.5 供者准备
以3%戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉。腹部大十字切口，上至剑突，下至耻骨联合，将胃向上翻起，牵开横结肠，分离结肠左、中血管。于胰腺下结扎肠系膜上血管。在十二指肠与空肠间因血运不同而形成明显分界处切断肠管。以脾脏作为牵引，结扎切断胃左血管，于幽门处结扎切断十二指肠，使十二指肠近端封闭。于食管、胃交界处结扎并切除胃，充分显露肝门，于十二指肠上缘分离出胆总管及肝固有动脉，分别结扎后切断，游离门静脉至肝门处。剪开腹主动脉上被覆的后腹膜，使肠系膜上动脉(豚鼠腹腔动脉与肠系膜动脉共干)完全游离，于肠系膜动脉开口以下，左肾动脉以上的腹主动脉绕一丝线，打一活结，暂不结扎。结扎脾胰之间血管，于左肾动脉开口平面以下行下腹主动脉插管，立即钳夹腹腔动脉开口以上0.5 cm处腹主动脉，用0～4 ℃ UW液8 ml原位匀速、低压、搏动性灌注，随即于肝门处切断门静脉，同时用生理盐水及甲硝唑液各4 ml冲洗十二指肠腔。良好的灌注可使胰腺、十二指肠、血管及系膜呈白色，流出液清亮。收紧左肾动脉开口处以上平面丝线活结，在其远端离断腹主动脉、上端自钳夹处离断。完整切下的移植物为全胰十二指肠，与胰腺相连的脾脏及供吻合的腹主动脉段、门静脉。移植物置于4℃的UW液。将门静脉从延伸一方穿过套管内口，开口外翻套于管环，用5-0丝线将其环扎固定于刻槽，仍0～4℃ UW液保存。
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1.6 受者手术1.6 受者手术
开放乙醚麻醉行腹部正中切口，将肠管推向右侧，用盐水纱布覆盖，不时洒予4℃ 林格氏液。结扎切断左输尿管，游离左肾、左肾动静脉，结扎切断左肾上腺动静脉，于左肾动脉起始处绕一5-0丝线，暂不结扎，该平面向下游离腹主动脉0.6～0.8 cm，于尾静脉注入肝素生理盐水1 ml(含肝素25U)，结扎左肾动脉。用微血管夹于近下腔静脉夹闭左肾静脉，于肾门处切除左肾。用肝素生理盐水冲洗左肾静脉，将移植物门静脉顺左肾静脉方向套入超过套管。用5-0丝线结扎固定左肾静脉于套管刻槽处，上下钳夹阻断腹主动脉游离处，于中部偏左侧开一与供者腹主动脉孔径一致的侧孔，用8-0无损伤缝合线连续缝合，完成供受者腹主动脉端侧吻合。开放血流，可见移植物血液循环恢复且与受者同一组织颜色相同，将受者肠管放回原处，注意不要扭曲血管，将移植物的十二指肠与受者屈氏韧带以下约3 cm处的空肠以5-0丝线间断缝合，完成端侧吻合。关腹前切除移植物脾脏，腹腔内注入生理盐水及甲硝唑各2 ml。
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整个手术均在肉眼下进行，无须显微镜。供者手术约60 min(含灌注、袖套准备)，受者手术50 min，热缺血时间为0 min，冷缺血时间小于60 min，静脉吻合5 min，阻断受者腹主动脉时间不超过20 min。
2 结果
2.1 胰腺移植后受者存活情况
42例豚鼠至大鼠异种胰腺移植，其中术中大出血死亡2例，穿破豚鼠胸膜死亡2例，余38例血管吻合均获成功，全部存活，发生排斥反应后立即切除移植物，大鼠均能存活。根据不同需要进行观察及取部分移植物，行病理及电镜检查。
2.2 移植后胰腺功能2.2 移植后胰腺功能
移植后，38只糖尿病受者大鼠尿糖均转阴，血糖降至正常，移植有效率为100%。术后分组进行实验，未处理组很快出现超急性排斥反应，移植物存活时间为2～3 h，蛇毒因子处理组移植物存活时间明显延长，经统计学处理，两组有显著性差异(P<0.05)。
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2.3 移植物形态变化2.3 移植物形态变化
移植后移植物均有轻度水肿，发生排斥反应时发黑，病理切片可见血管栓塞，电镜见毛细血管内皮细胞溶解。
2.4 并发症
38例成功移植术后，3例开放动脉夹后动脉吻合口漏血，经小棉球轻压后均停止出血，未再修补，1例术后麻醉过深不醒，经吸氧及鼻腔滴注尼可刹米后抢救成功。1例因肠道吻合口漏血死亡。
3 讨论
3.1 本模型的效用
异种移植研究多见于心脏移植模型。异种胰腺移植国内未见报道，国外Ohtuka[4] 于1994年报道仓鼠至大鼠异种胰腺移植。本实验结果证明豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植术后血糖尿糖均正常，说明移植胰腺具有内分泌功能。此外，对照组很快出现超急性排斥反应，实验组则明显延迟，两组有显著性差异，提示本模型可作为研究超急性排斥反应及其对策或进行异种胰腺移植研究的一个较好实验手段。
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3.2 本模型的优点 3.2 本模型的优点
(1)手术时间短，操作简便，减少冷缺血及复温时间，对糖尿病大鼠干扰小。朱晓峰[5] 认为同时阻断腹主动脉、下腔静脉的糖尿病大鼠，脏器功能损害严重，代谢紊乱。本法不用阻断下腔静脉，腹主动脉阻断时间亦短，减少了因血流淤积导致血栓形成的可能性。(2)缩短移植物缺血时间，热缺血时间为0 min，冷缺血时间小于60 min， 大大提高了移植物的功能存活，均通畅未见漏血。
3.3 手术注意事项3.3 手术注意事项
(1)豚鼠对麻醉耐受性差，麻醉勿深。游离脾脏时注意保护膈肌，否则造成气胸，动物将很快死亡。豚鼠腹腔干与肠系膜上动脉共干操作时应注意。(2)供者十二指肠内最好用甲硝唑及生理盐水冲洗，术后可从尾静脉给予抗生素防止感染。(3)鄢业鸿[ 2 ]提出取供者时不切除脾脏，关腹前切除脾脏。作者亦认为应利用“不接触技术”避免对胰腺的直接牵拉，但于实验中发现保留脾脏时胰腺灌注不彻底，近脾脏处易出现浅紫红花斑，因此改为灌注前结扎脾血管，开放血流前切除脾脏效果较佳。(4)糖尿病鼠血液粘稠度较正常高，作者发现吻合血管前小剂量静注肝素生理盐水可预防血栓形成但不宜过早使用，否则游离腹主动脉及肾动脉时极易造成广泛渗血。(5)术后24 h内禁食不禁水，因此术后应静脉或腹腔内适量补液。
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参考文献
[1]Sun L，Kenneth SKT, Koopmans H et al. Pancreaticodenal trans-plantation in the rat[J]. Transplantation,1972, 13(4): 421～5.
[2]鄢业鸿，夏穗生. 改良的大鼠同种异体全胰十二指肠移植[J]. 海南医学院学报，1997, 3(1): 7～9.
[3]蒋邦好，李朝龙，孔令红. 豚鼠至大鼠异种小肠移植模型的建立[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(3): 217～9.
[4]Ohtuka S, Yasutomi M, Hayshi S et al. Effect of splenectomy on hamaster-to-rat pancreas xenotransplantation[J]. Transplant Proc, 1994, 26(3): 1180～1.
[5]朱晓峰，王吉甫. 不阻断腹主动脉及下腔静脉的大鼠胰腺移植[J]. 中华显微外科杂志，1995, 18(3): 212～3.
1999-01-20, http://www.100md.com
单位：李晓平(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)；李朝龙(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)；沈新明(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)；蒋邦好(第一军医大学南方医院肝胆血管外科，广东 广州 510515)
关键词：全胰十二指肠移植；豚鼠；大鼠
第一军医大学学报000110 摘要：目的 为研究超急性排斥反应及对策，建立异种胰腺移植模型。方法 以豚鼠和大鼠为供受者，用袖套法吻合静脉建立异种全胰十二指肠移植模型。结果 共行42次手术，成功38例，均有内分泌功能，移植有效率为100%。结论 本模型具有操作简单，冷缺血及腹主动脉阻断时间短，不易形成血栓及吻合口漏等优点，为一较实用的研究异种胰腺移植模型。
中图分类号：R602 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0030-02
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Establishment of guinea pig to rat pancreaticoduodenal xenograft model
LI Xiao-ping, LI Chao-long, SHEN Xin-ming, JIANG Bang-hao
(Department of Hepatobiliary and Vascular surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
Abstract: Objective To establish a guinea pig to rat pancreaticoduodenal xenograft model for studying hyperacute rejection. Methods Superior mesenteric vier-left renal vein cuff anastomases were resected. An end to side anastomasis was made between the graft duodenum and the host jejunum. Results Forty-two operations were done, and 38 cases were successful, of which all grafts of the successful cases had endocrinium function. Conclusions This model can reduce the incidence of thrombosis and the duration of ischemia during operation. It is a simple and practical. To establish a guinea pig to rat pancreaticoduodenal xenograft model for studying hyperacute rejection. Methods Superior mesenteric vier-left renal vein cuff anastomases were resected. An end to side anastomasis was made between the graft duodenum and the host jejunum. Results Forty-two operations were done, and 38 cases were successful, of which all grafts of the successful cases had endocrinium function. Conclusions This model can reduce the incidence of thrombosis and the duration of ischemia during operation. It is a simple and practical.
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Key words: pancreaticoduodenal xenograft; guinea pig; rat
豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植尚未见报道。作者参考同种大鼠移植模型进行探索。Sun Lee[1]术式须同时阻断受体腹主动脉及下腔静脉，对糖尿病大鼠干扰大，术后并发症多、死亡率高。作者在改良的同种移植模型[2]基础上利用袖套法吻合供者门静脉与受者肾静脉简化手术过程建立豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植模型，成功率高，收到良好的效果。
1 材料与方法
1.1 实验动物
供者为雄性豚鼠，体质量300～350 g，受者为雄性Wistar大鼠，体质量250～300 g，由第一军医大学动物实验中心提供。
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1.2 糖尿病模型的制备1.2 糖尿病模型的制备
选合格大鼠，用链脲霉素(Streptorotocin，STZ)60 mg/kg从尾静脉注射，以尿糖+++ ～ ++++、非禁食血糖超过20 mmol/L，维持1周以上并且稳定的糖尿病模型为受者。
1.3 袖套吻合管1.3 袖套吻合管
参考蒋邦好[3] 的设计，由聚乙烯管加工而成，套管的管环长0.3 cm，一端切去2/3管壁作为柄，管壁中部刻有环形槽，内径0.15 cm，外径0.25 cm。
1.4 移植胰腺功能测定1.4 移植胰腺功能测定
以移植后大鼠非禁食血糖低于11.2 mmol/L，尿糖阴性为移植胰功能良好的标准，超过者为排斥。
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1.5 供者准备1.5 供者准备
以3%戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉。腹部大十字切口，上至剑突，下至耻骨联合，将胃向上翻起，牵开横结肠，分离结肠左、中血管。于胰腺下结扎肠系膜上血管。在十二指肠与空肠间因血运不同而形成明显分界处切断肠管。以脾脏作为牵引，结扎切断胃左血管，于幽门处结扎切断十二指肠，使十二指肠近端封闭。于食管、胃交界处结扎并切除胃，充分显露肝门，于十二指肠上缘分离出胆总管及肝固有动脉，分别结扎后切断，游离门静脉至肝门处。剪开腹主动脉上被覆的后腹膜，使肠系膜上动脉(豚鼠腹腔动脉与肠系膜动脉共干)完全游离，于肠系膜动脉开口以下，左肾动脉以上的腹主动脉绕一丝线，打一活结，暂不结扎。结扎脾胰之间血管，于左肾动脉开口平面以下行下腹主动脉插管，立即钳夹腹腔动脉开口以上0.5 cm处腹主动脉，用0～4 ℃ UW液8 ml原位匀速、低压、搏动性灌注，随即于肝门处切断门静脉，同时用生理盐水及甲硝唑液各4 ml冲洗十二指肠腔。良好的灌注可使胰腺、十二指肠、血管及系膜呈白色，流出液清亮。收紧左肾动脉开口处以上平面丝线活结，在其远端离断腹主动脉、上端自钳夹处离断。完整切下的移植物为全胰十二指肠，与胰腺相连的脾脏及供吻合的腹主动脉段、门静脉。移植物置于4℃的UW液。将门静脉从延伸一方穿过套管内口，开口外翻套于管环，用5-0丝线将其环扎固定于刻槽，仍0～4℃ UW液保存。
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1.6 受者手术1.6 受者手术
开放乙醚麻醉行腹部正中切口，将肠管推向右侧，用盐水纱布覆盖，不时洒予4℃ 林格氏液。结扎切断左输尿管，游离左肾、左肾动静脉，结扎切断左肾上腺动静脉，于左肾动脉起始处绕一5-0丝线，暂不结扎，该平面向下游离腹主动脉0.6～0.8 cm，于尾静脉注入肝素生理盐水1 ml(含肝素25U)，结扎左肾动脉。用微血管夹于近下腔静脉夹闭左肾静脉，于肾门处切除左肾。用肝素生理盐水冲洗左肾静脉，将移植物门静脉顺左肾静脉方向套入超过套管。用5-0丝线结扎固定左肾静脉于套管刻槽处，上下钳夹阻断腹主动脉游离处，于中部偏左侧开一与供者腹主动脉孔径一致的侧孔，用8-0无损伤缝合线连续缝合，完成供受者腹主动脉端侧吻合。开放血流，可见移植物血液循环恢复且与受者同一组织颜色相同，将受者肠管放回原处，注意不要扭曲血管，将移植物的十二指肠与受者屈氏韧带以下约3 cm处的空肠以5-0丝线间断缝合，完成端侧吻合。关腹前切除移植物脾脏，腹腔内注入生理盐水及甲硝唑各2 ml。
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整个手术均在肉眼下进行，无须显微镜。供者手术约60 min(含灌注、袖套准备)，受者手术50 min，热缺血时间为0 min，冷缺血时间小于60 min，静脉吻合5 min，阻断受者腹主动脉时间不超过20 min。
2 结果
2.1 胰腺移植后受者存活情况
42例豚鼠至大鼠异种胰腺移植，其中术中大出血死亡2例，穿破豚鼠胸膜死亡2例，余38例血管吻合均获成功，全部存活，发生排斥反应后立即切除移植物，大鼠均能存活。根据不同需要进行观察及取部分移植物，行病理及电镜检查。
2.2 移植后胰腺功能2.2 移植后胰腺功能
移植后，38只糖尿病受者大鼠尿糖均转阴，血糖降至正常，移植有效率为100%。术后分组进行实验，未处理组很快出现超急性排斥反应，移植物存活时间为2～3 h，蛇毒因子处理组移植物存活时间明显延长，经统计学处理，两组有显著性差异(P<0.05)。
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2.3 移植物形态变化2.3 移植物形态变化
移植后移植物均有轻度水肿，发生排斥反应时发黑，病理切片可见血管栓塞，电镜见毛细血管内皮细胞溶解。
2.4 并发症
38例成功移植术后，3例开放动脉夹后动脉吻合口漏血，经小棉球轻压后均停止出血，未再修补，1例术后麻醉过深不醒，经吸氧及鼻腔滴注尼可刹米后抢救成功。1例因肠道吻合口漏血死亡。
3 讨论
3.1 本模型的效用
异种移植研究多见于心脏移植模型。异种胰腺移植国内未见报道，国外Ohtuka[4] 于1994年报道仓鼠至大鼠异种胰腺移植。本实验结果证明豚鼠至大鼠异种全胰十二指肠移植术后血糖尿糖均正常，说明移植胰腺具有内分泌功能。此外，对照组很快出现超急性排斥反应，实验组则明显延迟，两组有显著性差异，提示本模型可作为研究超急性排斥反应及其对策或进行异种胰腺移植研究的一个较好实验手段。
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3.2 本模型的优点 3.2 本模型的优点
(1)手术时间短，操作简便，减少冷缺血及复温时间，对糖尿病大鼠干扰小。朱晓峰[5] 认为同时阻断腹主动脉、下腔静脉的糖尿病大鼠，脏器功能损害严重，代谢紊乱。本法不用阻断下腔静脉，腹主动脉阻断时间亦短，减少了因血流淤积导致血栓形成的可能性。(2)缩短移植物缺血时间，热缺血时间为0 min，冷缺血时间小于60 min， 大大提高了移植物的功能存活，均通畅未见漏血。
3.3 手术注意事项3.3 手术注意事项
(1)豚鼠对麻醉耐受性差，麻醉勿深。游离脾脏时注意保护膈肌，否则造成气胸，动物将很快死亡。豚鼠腹腔干与肠系膜上动脉共干操作时应注意。(2)供者十二指肠内最好用甲硝唑及生理盐水冲洗，术后可从尾静脉给予抗生素防止感染。(3)鄢业鸿[ 2 ]提出取供者时不切除脾脏，关腹前切除脾脏。作者亦认为应利用“不接触技术”避免对胰腺的直接牵拉，但于实验中发现保留脾脏时胰腺灌注不彻底，近脾脏处易出现浅紫红花斑，因此改为灌注前结扎脾血管，开放血流前切除脾脏效果较佳。(4)糖尿病鼠血液粘稠度较正常高，作者发现吻合血管前小剂量静注肝素生理盐水可预防血栓形成但不宜过早使用，否则游离腹主动脉及肾动脉时极易造成广泛渗血。(5)术后24 h内禁食不禁水，因此术后应静脉或腹腔内适量补液。
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参考文献
[1]Sun L，Kenneth SKT, Koopmans H et al. Pancreaticodenal trans-plantation in the rat[J]. Transplantation,1972, 13(4): 421～5.
[2]鄢业鸿，夏穗生. 改良的大鼠同种异体全胰十二指肠移植[J]. 海南医学院学报，1997, 3(1): 7～9.
[3]蒋邦好，李朝龙，孔令红. 豚鼠至大鼠异种小肠移植模型的建立[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(3): 217～9.
[4]Ohtuka S, Yasutomi M, Hayshi S et al. Effect of splenectomy on hamaster-to-rat pancreas xenotransplantation[J]. Transplant Proc, 1994, 26(3): 1180～1.
[5]朱晓峰，王吉甫. 不阻断腹主动脉及下腔静脉的大鼠胰腺移植[J]. 中华显微外科杂志，1995, 18(3): 212～3.
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